Isothermische nucleïnezuuramplificatietechnologie kan worden gecategoriseerd in vele typen op basis van verschillende amplificatieprincipes. De meest voorkomende en breed toegepaste methode is de Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP)-technologie, ontwikkeld door Japanse geleerden waaronder Notomi in 2000. Het technische kenmerk van LAMP is het ontwerp van vier primers die zich richten op zes regio's op het doelgen, waarbij gebruik wordt gemaakt van een strengverplaatsend type Bst DNA-polymerase om de amplificatiereactie uit te voeren bij een constante temperatuur van 60~65°C. Dit bereikt een 109-1010-voudige versterking binnen 15-60 minuten.
De Bst DNA-polymerase is het kernenzym in de LAMP isothermische amplificatietechnologie. Het bezit een sterke thermische stabiliteit, strengverplaatsingsactiviteit en polymeraseactiviteit, wat snelle, efficiënte en specifieke amplificatie van de template onder constante temperatuuromstandigheden mogelijk maakt. In tegenstelling tot PCR, waarvoor thermische denaturatiecycli nodig zijn voor amplificatie, kan het hele LAMP-experiment binnen één uur worden voltooid zonder de noodzaak van dergelijke cycli.
Productvoordelen
Glycerolvrij enzym, geschikt voor lyofilisatie
Transport bij omgevingstemperatuur, kostenbesparing
Sterke strengverplaatsingsactiviteit, gevoelig en stabiel
Snelle rehydratatie, eenvoudig te bedienen
Prestatie hoogtepunten
01 Toepassing van de fluorescerende kleurstofmethode
1、Hoge gevoeligheid en goede specificiteit
In het RT-LAMP fluorescentiekleurstofversterkingssysteem is de versterkingsprestatie van de gevriesdroogde poederkoek 14405ES consistent met die van het vloeibare Bst-enzym (inclusief glycerol en glycerolvrij), en beide kunnen 100% detecteren bij een gevoeligheid van 50 kopieën/T. De specificiteit is goed, met geen detectie in 48 putjes NTC (Negative Template Control).
2、Goede thermische versnelde stabiliteit
In het RT-LAMP fluorescente kleurstofversterkingssysteem werd het gevriesdroogde poeder onderworpen aan opslagbehandelingen bij 45°C gedurende 7 dagen, 45°C gedurende 15 dagen en kamertemperatuur gedurende 19 dagen. Na thermische versnelling bleven de productprestaties consistent met die van de vloeibare versie van glycerolvrij Bst-enzym en werd er geen piek waargenomen in de NTC (Negative Template Control).
3、Ondersteunt opnieuw bevriezen na acceleratie
In het RT-LAMP fluorescentiekleurstofversterkingssysteem werd het gevriesdroogde poeder onderworpen aan opslagbehandelingen bij 45 °C gedurende respectievelijk 7 dagen en 45 °C gedurende 15 dagen. Het gevriesdroogde poeder werd na thermische versnellingsbehandeling vervolgens onderworpen aan een tweede ronde van vriesdrogen (inclusief enkelvoudig enzym en RT-LAMP-reagentia). Experimenten tonen aan dat na de versnelde behandeling en de tweede vriesdrogen de productprestaties consistent blijven met die van de vloeibare versie van glycerolvrij Bst-enzym, en er werd geen piek waargenomen in de NTC (Negative Template Control). De stabiliteit van het product is goed, wat secundaire vriesdrogen en versnelling na secundaire vriesdrogen ondersteunt.
02 pH Colorimetrische Methode Toepassing
1、Hoge gevoeligheid en goede specificiteit
In het RT-LAMP pH-colorimetrische amplificatiesysteem kan de amplificatiegevoeligheid van de gevriesdroogde poederkoek 14405ES 50 kopieën/T bereiken (100% detectiepercentage) en de specificiteit is goed, met geen detectie in 24 putjes NTC (Negative Template Control).
2、Goede thermische versnelde stabiliteit
In het RT-LAMP pH-colorimetrische amplificatiesysteem werd de thermisch versnelde stabiliteit van het gevriesdroogde poeder 14405ES onderzocht bij 45°C gedurende 15 dagen, de stabiliteit na secundaire vriesdroging na versnelling (rehydratatie na versnelling bij 45°C gedurende 7 dagen) en de opslagstabiliteit na rehydratatie (bewaard bij -20°C gedurende 7 dagen na rehydratatie). De experimenten geven aan dat het 14405ES-product een goede stabiliteit heeft, zonder invloed op de productprestaties na thermische versnelling, en secundaire vriesdroging na versnelling ondersteunt.
Aanbevolen productaanbevelingen
| Producttype | Productfunctie | Productnaam | Artikelnummer |
| RT-LAMP-mix | Fluorescerende kleurstof | RT-LAMP Verf Beoordelen Kit（UDG Plus) | 13762ES |
| pH-indicator | RT-LAMP pH Gevoelig Verfstof Uitrusting | 13906ES | |
| Lyofiliseerbare pH-indicator | RT-LAMP pH Gevoelig Verf Chromogeen Versie Vriesdroogbaar Uitrusting | 13920ES | |
| Bst-enzym | Glycerol | Hieff® Beste Plus DNA Polymerase (40 (U/μL) | 14402ES |
| Glycerol-vrij | Gevriesdroogd Beste Plus DNA Polymerase (60 U/μL (glycerolvrij) | 14405ES | |
| Buffer | Basisbuffer (vrij van kleurstoffen e.d.) | 10× Hieff® Beste Plus DNA Polymerase Buffer | 15441ES |