De laatste jaren, met de snelle ontwikkeling van moleculair-biologische technieken, Diagnostische methoden op basis van nucleïnezuur zijn uitgebreid vastgesteld en worden op grote schaal toegepast in laboratoriumtesten van menselijke ziekten. Vergeleken met andere amplificatietechnieken voor nucleïnezuur biedt isothermische amplificatie de voordelen van snel, efficiënt en specifiek zijn, en vereist geen gespecialiseerde apparatuur. Daarom wordt het sinds de opkomst ervan door veel wetenschappers beschouwd als een detectiemethode die potentieel kan concurreren met PCR.

Daarom wordt aangenomen dat de ontwikkeling en toepassing van diagnostische instrumenten en kits op basis van isotherme amplificatietechnologie een nieuwe richting zal vertegenwoordigen voor Point-of-Care Testing (POCT) in moleculaire diagnostiek.

Inleiding tot de principes van gangbare isotherme versterkingstechnologieën

1、Lus-gemedieerde isothermische versterking

(LAMP) Technologie

Beginsel:Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) maakt gebruik van Bst DNA polymerase, dat strand displacement-activiteit heeft. Het ontwerpt vier typen specifieke primers die gericht zijn op zes regio's van het doelgen, wat efficiënte, snelle en specifieke amplificatie van de doelsequentie onder isotherme omstandigheden mogelijk maakt. De amplificatie kan worden uitgevoerd bij een constante temperatuur van 60-65°C, en binnen 15-60 minuten een nucleïnezuuramplificatie van 10⁹ tot 10¹⁰ keer bereikt kan worden.

Voordelen en toepassingen:Vanwege de snelle reactie, hoge specificiteit, eenvoudige en gemakkelijk te bedienen apparatuur en de resultaten die gemakkelijk te interpreteren zijn, isotherme versterking is toegepast bij de detectie van pathogene bacteriën, parasieten, virussen, ziekten en genetisch gemodificeerde producten. Er wordt ook verwacht dat het op grote schaal gebruikt zal worden in klinische diagnose van infectieziekten, milieumonitoring, voedselveiligheid en andere gebieden. Het is een ideale methode geworden die geschikt is voor moleculaire Point-of-Care Testing (POCT) platformen.

Classificatie:LAMP-detectiemethoden worden onderverdeeld in verschillende typen, waaronder turbidimetrie, pH-indicatormethoden, fluorescerende kleurstofmethoden (zoals NHB, calceïne, SYBR Green, Syto, enz.) en fluorescerende sondemethoden.

2、Recombinase Polymerase Amplification (RPA) Technologie

Beginsel:Het recombinase-enzym vormt, wanneer gebonden aan primers, een eiwit-DNA-complex dat kan zoeken naar homologe sequenties in dubbelstrengs DNA. Zodra de primers de homologe sequenties hebben gelokaliseerd, vindt er een strenguitwisselingsreactie plaats, wat leidt tot de vorming en initiatie van DNA-synthese, die de doelregio op de template exponentieel versterkt. De verplaatste DNA-streng bindt aan enkelstrengs bindend (SSB) eiwit om verdere verplaatsing te voorkomen. In dit systeem wordt een synthesegebeurtenis geïnitieerd door twee tegengestelde primers, die voornamelijk vertrouwen op de activiteiten van de recombinase, het Bsu-enzym en het SSB-eiwit. De technologie kan binnen 10-30 minuten bij temperaturen variërend van 37 tot 42 °C een snelle detectie van het doelwit van belang bereiken.

Voordelen en toepassingen:RPA pocht hoge gevoeligheid, sterke specificiteit, lage afhankelijkheid van gespecialiseerde apparatuur, en de mogelijkheid om verschillende detectieformaten te integreren. Het is met name geschikt voor point-of-care-testen op grassrootsniveau en in veldomgevingen. RPA kan breed worden toegepast in in-vitrodiagnostiek, dierziekten, voedselveiligheid, biologische veiligheid, landbouw en andere gebieden.

Classificatie:RPA-detectiemethoden worden onderverdeeld in verschillende typen, waaronder gelelektroforese, EXO-sondemethode, Fpg-sondemethode, laterale flow dipstick (LF-RPA) en flocculatieanalyse.

Productprestatie-etalage

01 pH-gevoelige kleurstof RT-LAMP-reagentia

pH-gevoelige kleurstof RT-LAMP gebruikt een visuele kleurstof als gevoelige indicator, onder isotherme omstandigheden van 60-65℃, om eenstaps RNA-nucleïnezuuramplificatie te voltooien met behulp van een waterbad met constante temperatuur of een standaard PCR-machine. In slechts 30 minuten kan de kleurverandering na de reactie worden gebruikt om te bepalen of er sprake is van een pathogene infectie, met meer intuïtieve resultaten (positief is oranjegeel, negatief is magenta). Deze methode is geschikt voor snelle tests van grote populaties.

Aanbevolen producten:

RT-LAMP pH-gevoelige kleurstofkit (13906ES)
RT-LAMP pH-gevoelige kleurstof chromogene versie vriesdroogkit (13920ES)

Prestatie Showcase：

1.RT-LAMP/RPA mix selectiegids

Productclassificatie	RT-LAMP-mix			RPA-mix
Productnaam	RT-LAMP kleurstofanalysekit (UDG plus)	RT-LAMP pH-gevoelige kleurstofkit	RT-LAMP pH-gevoelige kleurstof chromogene versie vriesdroogkit	Snelle zekeringversterker
Productartikelnummer	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
Productcategorie	Fluorescerende kleurstof	pH-gevoelige kleurstof	pH-gevoelige kleurstof	Doorvragen
Productcomponenten	2 componenten Buffer, enzymmix	3 componenten Buffer, RT-enzym, Bst-enzym	4 componenten Buffer, RT-enzym, Bst-enzym, Lyoprotectant	4 componenten Buffer, enzymmix, magnesiumacetaat
Vriesdrogen ondersteund	Nee	Ja, zonder Lyoprotectant	Ja, bevat lyoprotectant	Nee

2.LAMP/RT-LAMP-enzymselectiegids

Productclassificatie	Bst-enzym		Omgekeerde transcriptase		UDG-enzym
Productnaam	Bst Plus	Gevriesdroogde Bst Plus	Ⅲ Omgekeerde transcriptase	III Omgekeerde transcriptase, Glycerolvrij	UDG	UDG, glycerolvrij
Productartikelnummer	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
Enzymactiviteit	40 eenheden/μL	60 eenheden/μL	200 eenheden/μL	600 eenheden/μL	1 eenheid/μL	1 eenheid/μL
Productcomponenten	3 componenten	2 componenten	2 componenten	eencomponent	enkel- onderdeel	eencomponent
Vriesdrogen ondersteund	Nee	Ja	Nee	Ja	Nee	Ja

3、RPA-enzymselectiegids

Productclassificatie	Bsu	T4X	T4 J	SSB	CK	EXO
Productnaam	Bsu	T4 UvsX	T4 UvsY	huisarts 32	Creatine kinase	Exonuclease III
Productartikelnummer	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
Enzymactiviteit	5 eenheden/μL	2 μg/μL	2 μg/μL	5 μg/μL	2 μg/μL	100 eenheden/μL
Productcomponenten	eencomponent	eencomponent	eencomponent	eencomponent	eencomponent	2 componenten
Vriesdrogen ondersteund	Nee	Nee	Nee	Nee	Nee	Nee