Aerosolverontreiniging in de operationele omgeving als meest voorkomende oorzaak van vals-positieve resultaten in PCR-resultaten: de baanbrekende ontdekking van uracil-DNA-glycosylase (UDG) door de Amerikaanse wetenschapper Lindahl in E. coli en Bacillus subtilis, en de oprichting van een systeem ter voorkoming van PCR-verontreiniging door het gebruik van UDG-enzym met dUTP.

De commercieel verkrijgbare UDG-enzymen bestaan ​​voornamelijk uit twee typen: de reguliere UDG-enzymen afkomstig van Escherichia coli en Bacillus subtilis, en de thermolabiele UDG-enzymen afkomstig van psychrofiele mariene bacteriën. De reguliere UDG-enzymen vertonen een grotere hittebestendigheid en behouden een kleine hoeveelheid uracil-DNA-glycosylase-activiteit, zelfs na behandeling bij 95 °C gedurende 10 minuten, wat kan leiden tot de afbraak van doelamplificatieproducten die dU bevatten. Bovendien is er, vanwege het gebruik van gemanipuleerde bacteriestammen (zoals E. coli) voor de recombinante expressie van moleculaire enzymen, een bepaalde hoeveelheid resterend gastheergenoom-DNA in deze enzymen. In combinatie met de invloeden van de productieomgeving en menselijke bronnen zijn moleculaire enzymproducten zeer gevoelig voor DNA-verontreiniging. Tijdens de detectie van pathogenen kan verontreinigend DNA ofwel doelwitnucleïnezuren met een lage overvloed maskeren of ernaast worden gedetecteerd, wat de interpretatie van de resultaten beïnvloedt.

Yeasen UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), hittelabiel

Beschrijving

De UCF.ME Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG), hittelabiel, 1 U/μL (Cat#14466ES) afgeleid van psychrofiele mariene bacteriën, is het een ultra-laag resterend hitte-labiel UDG-enzym dat bekend staat als UCF.ME. Het gebruik van dit product kan voorkomen dat de restactiviteit van conventionele UDG-enzymen na inactivering dU-bevattende amplificatieproducten afbreekt bij kamertemperatuur. Het voorkomt ook dat achtergrondbacteriën die aanwezig zijn in moleculaire enzymen vals-positieve resultaten veroorzaken in PCR-resultaten. Daarom is de introductie van UCF.ME® ultra-laag resterend thermolabiel UDG-enzym cruciaal voor het nauwkeurig identificeren van infectieuze pathogenen en het helpen bij de klinische diagnose van infecties en infectieziekten.

Productvoordelen

• Ultra-lage rest van UCF.ME—E. coli genomische DNA-residu <0,1 kopieën/E;
• Laag nucleaseresidu: geen resterend exonuclease, nicking-enzym of RNase;
• Sterk verteringsvermogen: 0,05 U/T kan 105 kopieën/T dU-DNA-producten verteren;
• Goede thermolabiliteit: volledige inactivering onder alle omstandigheden van 50°C gedurende 10 minuten, 55°C gedurende 5 minuten of 95°C gedurende 5 minuten;
• Compatibel met RT-qPCR-reactiesystemen: geen invloed op het detectiesysteem, zelfs niet bij hoge invoerniveaus (2U/20μL-reactiesysteem).

(1) Eiwitzuiverheid ≥95%