----Schone achtergrond, stabiele bandpatronen, nauwkeurige maten
DNA-markers zijn een combinatie van DNA-fragmenten met verschillende moleculaire gewichten. Hun primaire gebruik is om te co-migreren met monster-DNA in agarosegelelektroforese om de DNA-moleculen te scheiden. Door de grootte en helderheid van de monsterbanden te vergelijken met die van de DNA-marker, kan men het moleculaire gewicht en de concentratie van het monster-DNA in oplossing ruwweg schatten.
Producteigenschappen
- Sterke stabiliteit, kan 3-6 maanden bij kamertemperatuur bewaard worden;
- Schone achtergrond, stabiele bandpatronen en nauwkeurige afmetingen;
- Bevat referentiebanden met bekende concentraties voor eenvoudige positionering en semi-kwantitatieve analyse;
- Inclusief laadbuffer voor directe elektroforese, handig en snel;
- Wordt geleverd met een 5× laadbuffer voor het laden van monsters.
Elektroforese Diagram
Aandachtspunten
- Bewaarmethode: Stabiel bewaren bij kamertemperatuur gedurende 3 tot 6 maanden; voor langere periodes bewaren bij 4°C of -20°C.
- DNA Marker is geschikt voor het analyseren van DNA-banden in agarosegelelektroforese en wordt niet aanbevolen voor gebruik in polyacrylamidegelelektroforese.
- Selectie van gelconcentratie en bufferoplossing:
| Agarose-concentratie | Effectief scheidingsbereik (bp) | Aanbevolen buffer |
| 0,5% | 2.000-50.000 | 1×TAE |
| 0,8% | 800-10.000 | 1×TAE |
| 1,0% | 400-8.000 | 1×TAE |
| 1,2% | 300-7.000 | 1×TAE |
| 1,5% | 200-3.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 2,0% | 100-2.000 | 1×TAE/0,5×TBE |
| 3,0% | 25-1.000 | 0,5×TBE |
【Opmerking】: Kies voor grote fragmenten een gel met een lage concentratie en gebruik een TAE-buffersysteem voor elektroforese. Kies voor kleine fragmenten een gel met een hoge concentratie en gebruik een TBE-buffersysteem voor elektroforese.
- Selectie van nucleïnezuurkleuringen:
EB (Ethidium Bromide) is een zeer gevoelige fluorescerende kleurstof met een maximale excitatiegolflengte van 302 nm, die kan worden gebruikt om nucleïnezuren in agarose- en polyacrylamidegels te observeren. EB intercaleert met de basen in nucleïnezuren en staat bekend als giftig.
YeaRed (Cat#10202ES76) en YeaGreen (Cat#10204ES76) zijn nieuwe, niet-giftige nucleïnezuurkleurstoffen met een unieke olieachtige moleculaire structuur die niet door celmembranen heen kunnen dringen, niet snel vervliegen of sublimeren en dus niet door mensen worden ingeademd, waardoor de veiligheid van de experimentator wordt gegarandeerd.Ames-testresultaten tonen ook aan dat YeaRed en YeaGreen geen mutageniteit hebben bij gelkleuringsconcentraties, waardoor ze een veilig en niet-toxisch alternatief zijn voor het zeer kankerverwekkende EB. Bovendien heeft YeaRed dezelfde spectrale kenmerken als EB, dus het kan EB perfect vervangen zonder het bestaande beeldvormingssysteem te veranderen.
Vragen en antwoorden
Vraag 1: Waarom slepen de banden met een hoog moleculair gewicht van de DNA-marker zich voort en scheiden ze zich niet goed?
A1: De nucleïnezuurkleurstof bindt niet voldoende met de DNA-marker. Omdat banden met een hoog moleculair gewicht meer nucleïnezuurkleurstof nodig hebben, zijn de banden met een hoog moleculair gewicht gevoeliger voor migratie-effecten als de kleurstof niet verzadigd is, wat leidt tot slepen en slechte scheiding. Het wordt aanbevolen om de hoeveelheid gebruikte DNA-marker te verminderen (het kan 5 keer met water worden verdund en dan kan 8-10 μL worden geladen) of om de concentratie van de nucleïnezuurkleurstof te verhogen.
Vraag 2: Waarom zijn er geen banden of zwakke banden voor DNA?
A2:
- Onvoldoende DNA-lading, verhoog de geladen hoeveelheid;
- De DNA-band is uit de gel verdwenen;
- De DNA-band wordt verduisterd door de tracking-kleurstof;
- Er werd geen nucleïnezuurkleurstof aan de gel toegevoegd;
- De agarosegel is te lang blijven staan, het is aan te raden om deze direct klaar te maken en te gebruiken.
V3: Waarom zijn de DNA-markerbanden diffuus?
A3:
- Gedeeltelijke afbraak van DNA, controleer of de opslagomstandigheden te warm zijn;
- De spanning tijdens elektroforese is te laag, waardoor de DNA-banden diffunderen. Het wordt aanbevolen om de gel te laten draaien op 110V-130 V langer dan 45 min;
- De concentratie van de agarosegel is niet geschikt, bereid de gel volgens de aanbevolen gelconcentratie in de handleiding;
- De kwaliteit van de agarosegel is slecht, het is raadzaam om een nieuwe te maken.
Vraag 4: Waarom lijken de monsterbanden een andere grootte te hebben dan de DNA-markerbanden?
A4:
- DNA-migratie is niet alleen gerelateerd aan de werkelijke grootte, maar ook aan of het gecombineerd is met eiwitten, ionenstatus, DNA-structuur, gel en andere factoren. De elektroforetische migratiesnelheid van nucleïnezuren is gerelateerd aan de verhouding DNA/kleurstof, en wanneer de hoeveelheid nucleïnezuurkleurstof onvoldoende is, kan dit leiden tot grotere fouten in de migratiesnelheid;
- Als het monster een hoge concentratie zoutionen bevat, kan dit ook aanzienlijke migratiefouten veroorzaken;
- Als de hoeveelheid geladen monster aanzienlijk verschilt van de hoeveelheid DNA-markerbanden of als de volumes aanzienlijk verschillen, kan dit ook grotere migratiefouten veroorzaken.
Bestel Informatie
| Productoriëntatie | Productnaam | Productnummer | Specificaties |
| DNA-marker | GoldBand DL2000 DNA-marker | 10501ES60/80 | 100 T/10×100T |
| GoldBand DL5000 DNA-marker | 10504ES60/80 | 100 T/10×100T | |
| GoldBand 100bp DNA-ladder | 10507ES60/80 | 100 T/10×100T | |
| GoldBand 1 kb DNA-ladder | 10510ES60/80 | 100 T/10×100T |