Ultra-lage residu Universal vooraf gemengde qPCR-mix: voor precieze pathogene detectie in diverse toepassingen

Trefwoorden:

Laag residu, voorgemengd, universeel multi-target, één-buis, qPCR, hoge gevoeligheid.

Abstract:

De nieuwe derde generatie qPCR-mix met ultralaag residu, vooraf gemengd om een ​​hoge gevoeligheid te garanderen, ondersteunt een snel protocol van 30 minuten en blinkt uit in multiplex-amplificatie in uiteenlopende scenario's.

Achtergrond：

Commerciële moleculaire enzymen, voornamelijk geproduceerd via recombinante expressie in gemanipuleerde stammen (bijv. E. coli), bevatten vaak restanten van gastheergenoom-DNA. Factoren zoals de bereidingsomgeving en menselijke contaminatie vergroten de kans op restanten van DNA in deze enzymen nog verder. Dit kan leiden tot onnauwkeurige kwantificering van restanten van gastheernucleïnezuur in kwaliteitscontroleproducten, wat veiligheidsrisico's oplevert voor de biofarmaceutische productie. Tijdens de detectie van pathogenen kunnen besmette bacteriële achtergrondnucleïnezuren de doelnucleïnezuren met een lage overvloed overweldigen of samen met hen worden gedetecteerd, wat de nauwkeurigheid van de test in gevaar brengt.

Totale oplossing

Om de interferentie van achtergrondbacteriën en restanten van gastheernucleïnezuur bij de detectie van pathogenen aan te pakken, YEASEN Biotech heeft een unieke ultra-low residu control technologie ontwikkeld. We hebben UCF.ME opgezet, een ultra-schone moleculaire enzym productiebasis die voldoet aan GMP-normen, met strikte naleving van het ISO 13485 kwaliteitsmanagementsysteem in alle fasen. Dit omvat strenge controle over personeel, machines, materialen (reagentia en verbruiksartikelen), processen, omgeving en normen. Door effectieve technische maatregelen, een schone productieomgeving en strenge kwaliteitscontrole te integreren, maken we grootschalige productie van verschillende UCF.ME mogelijk.^TMenzymen met een extreem laag restgehalte aan moleculen.

Hoge Unicon^TM Pure Pro U+ qPCR-mix(Eén buis）（Kat#16713ES）is een nauwkeurig samengestelde universele qPCR-mix van YEASEN Biotech, dat een laag host-DNA-residu heeft. Dit product is gebaseerd op een nieuwe generatie universele voorgemengde qPCR-mix (Cat#16713ES) die effectief het resterende genomische DNA van de gastheer controleert (E. coli), terwijl ook de restniveaus van veelvoorkomende pathogene bacteriën zoals Pseudomonas aeruginosa en van mensen afkomstige verontreinigingen worden gecontroleerd. Omdat deze voorgemengde oplossing (Cat#16713ES) niet alleen effectief het niveau van pathogeenresidu controleert, maar ook de problemen van stabiliteit bij meervoudige detectie en veelzijdigheid van doelen aanpakt, verbetert het belangrijke prestatie-indicatoren zoals de gevoeligheid en specificiteit van het reagens. Het verbetert de detectie-efficiëntie aanzienlijk en kan op grote schaal worden gebruikt in toepassingsscenario's zoals detectie van pathogene micro-organismen.

Productvoordelen

• Lage achtergrondresidu – Geen detectie van Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa en van mensen afkomstig genomisch DNA-residu in 48 putjes.
• Uitzonderlijke voorgemengde stabiliteit: Stabiel bij 37°C gedurende maximaal 14 dagen, bij 4°C gedurende maximaal 28 dagen en na 50 vries-dooicycli.
• Uitstekende veelzijdigheid van reagentia – Compatibel met diverse multiplex primer-probe sets (gevalideerd voor meer dan 40 verschillende soorten targets), met uitstekende amplificatieprestaties.
• Hoge gevoeligheid en specificiteit – De gevoeligheid is in staat om 250 kopieën/ml te detecteren, met een specificiteit die ervoor zorgt dat er geen pieken ontstaan ​​in 48 negatieve putjes.
• Ondersteunt snelle protocollen – Compatibel met snelle protocollen, resultaten kunnen in slechts 30 minuten worden verkregen.
• dUTP/UDG anti-verontreinigingssysteem – Bevat een dUTP/UDG-antiverontreinigingssysteem om aerosolverontreiniging effectief te voorkomen.
• Compatibiliteit met meerdere platforms en systemen – Compatibel met platforms zoals Bio-Rad CFX96, ABI Q5, 7500, Slan, Tianlong en andere.

Prestatie hoogtepunten

1、Ultra-lage achtergrond bacteriële residuen

Op basis van de beoordeling van de bacteriële residuniveaus van de reagensachtergrond, wordt het gebruik van YEASEN'S ultra-laag residu universeel popnieuw gemixt qPCR-mix (Cat#16713ES) en conventionele reagentia (zonder residucontrole)) voor NTC (geen sjabloonbesturing) amplificatie in een Escherichia coli (E. coli) systeem, waarbij 16713ES ook NTC-amplificatie ondergaat in zowel Pseudomonas aeruginosa als van mensen afkomstige genomische DNA-systemen. De resultaten tonen aan dat Cat#16713ES geen amplificatie vertoont in 48 putten van NTC, wat duidt op een verwaarloosbaar achtergrond-DNA-residu (E. coli, P. aeruginosa en menselijk DNA) in het reagens.

2. Uitstekende stabiliteit van de volledig voorgemengde premix

Op basis van het onderzoek naar de stabiliteit van de voorgemengd reagens, Cat#16713ES werd op drie manieren behandeld (4°C, 37°C en vriezen-ontdooien). De experimentele groepen werden respectievelijk 7 dagen behandeld bij 4°C en 37°C en onderworpen aan 50 vries-ontdooicycli. De stabiliteit werd geëvalueerd ten opzichte van de controlegroep (opgeslagen bij -20°C) onder vier multiplex-amplificatiesystemen (Groepen 1, 2 en 4 zijn 4-plex-amplificatiesystemen en Groep 3 is een 3-plex-amplificatiesysteem), waarbij sommige amplificatiegroepen bovendien werden beoordeeld op stabiliteit na 14 dagen acceleratie bij 37°C. De resultaten toonden aan dat de Ct-waardeafwijking (ΔCt-waarde) tussen de experimentele en controlereagentia lag binnen ±0,5, en de afwijking van de fluorescentiewaarde was binnen 15%, wat aangeeft dat YEASEN's voorgemengde reagens heeft een uitstekende stabiliteit in multiplex-versterking.

3、Uitstekende veelzijdigheid van reagens

Op basis van het onderzoek naar de veelzijdige toepassingsscenario's van het reagens, YEASEN (Cat#16713ES) werd samen met diverse conventionele reagentia gebruikt om de amplificatieprestaties onder verschillende doelscenario's te valideren. De resultaten toonden aan dat het product een goede amplificatieprestatie vertoont bij een verscheidenheid aan doelen, waaronder pathogenen, menselijke bronnen en planten, wat duidt op een hoog niveau van veelzijdigheid van reagentia.

4. Uitstekende versterkingsgevoeligheid

Op basis van een beoordeling van de gevoeligheid van het reagens werd een evaluatie uitgevoerd van de detectiegraad van Cat#16713ES in een multiplex-amplificatiesysteem (4-plex) met behulp van monsters in ultralage concentraties (250 kopieën/ml). De resultaten geven aan dat YEASEN's Cat#16713ES vertoont uitstekende versterkingsgevoeligheid, met een detectielimiet van ten minste 250 kopieën/ml.

5、Compatibiliteit met meerdere snelle protocollen

Op basis van het onderzoek naar de amplificatieprestaties van het snelle protocol van het reagens werden zeven gradiëntmonsters (1~10^6 kopieën/μL) gevalideerd met behulp van zowel conventionele (1 uur en 6 minuten) als snelle protocollen (30 minuten) op hetzelfde kwantitatieve PCR-instrument (ABI Q5). De resultaten toonden aan dat de amplificatie-efficiëntie van het snelle protocol gelijk bleef boven 99%, en de afwijking van de Ct-waarde (ΔCt-waarde) tussen de conventionele en snelle protocollen was binnen ±0,5, met een afwijking van de fluorescentiewaarde binnen ±10%, en de versterkingscurven vertoonde een “S”-vorm.

IVD-detectiereagentia delen

Als leverancier van hulpmiddelen voor de levenswetenschappen, YEASEN Biotech levert al lange tijd hoogwaardige en kosteneffectieve grondstoffen aan IVD-bedrijven. Naast universele volledig voorgemengd qPCR/RT-qPCR-mastermixen, wij bieden een verscheidenheid aan andere qPCR/RT-qPCR-detectiereagentia, die u helpen IVD zakelijke klanten richten zich gezamenlijk op de efficiënte detectie van menselijke pathogenen en dierziekten.

Producttype	Productfunctie	Productnaam	Artikelnummer
qPCR-mix	Gloednieuwe 3e generatie universele, volledig voorgemengde, zeer gevoelige ondersteuning voor snelle tests	Hieff UniconTM Universele TaqMan Pro U+ qPCR-mix(Eén buis）	16710ES
	Hooggevoelig universeel (5× concentratie)	Hieff UniconTM Universele TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG-plus）	13891ES
	2e generatie snel volledig voorgemengd	Hieff UniconTM Superpro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix(UDG-plus）	11827ES
	Host-vrije ultra-lage rest	Hieff UniconTM Purepro Ⅰ TaqMan qPCR Master Mix(UDG-plus）	11853ES
	Hooggevoelige universele lyofiliseerbare	Hieff UniconTM Universele TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG-plus）	11893ES
RT-qPCR-mix	Universele snelle hoge gevoeligheid	HifairTM C203P1 Multiplex One Step RT-qPCR-sondekit(UDG-plus）	16630ES
	volledig voorgemengde universele	HifairTM V Multiplex One Step RT-qPCR-sondekit(UDG-plus）	11899ES
	Universele snelle lyofiliseerbare	HifairTM Lyo Multiplex One Step RT-qPCR-kit	11831ES