Proteïne-elektroforese is een techniek voor eiwitanalyse. Proteïnen worden negatief of positief geladen in een buffer en bewegen naar de anode in een elektrisch veld dat elektroforese wordt genoemd. Verschillende eiwitmoleculen hebben verschillende elektroforetische mobiliteiten. Een zeer belangrijk onderdeel van eiwit-elektroforese is gelbereiding. Conventionele gelbereiding duurt vaak enkele uren en er zijn ook problemen zoals vloeistoflekkage, ongelijkmatige gel en luchtbellen. Naast de moeite van de bereiding, zullen de grondstoffenreagentia ook een bepaalde toxiciteit hebben, wat schade zal toebrengen aan het lichaam van de lijmdispenser, en het verschijnen van geprefabriceerde lijm kan deze problemen oplossen. Dus wat is het basisprincipe van eiwit-elektroforese en wat is de functie en het principe van geprefabriceerde gel?

1. Wat is het basisprincipe van proteïne-elektroforese?
2. Wat is de functie en het principe van geprefabriceerde lijm?
3. Introductie van geprefabriceerde lijm geleverd door Yeasen
4. Veelgestelde vragen
5. Productdetails

1. Wat is het basisprincipe van proteïne-elektroforese?

De meeste biologische macromoleculen, zoals eiwitten en nucleïnezuren, hebben kationische en anionische groepen, die zwitterionen worden genoemd. De zone-elektroforesemethode waarbij de deeltjes worden verspreid in de oplossing en de zetmeelgel, agar- of agarosegel, polyacrylamidegel, enz. als ondersteunend medium, wordt gelelektroforese genoemd. Polyacrylamidegelelektroforese is een elektroforesemethode waarbij de drager een polyacrylamidegel is. Er wordt aangenomen dat de grootte van de poriën van de polyacrylamidegel wordt gecontroleerd om te polymeriseren, en de eiwitten worden gescheiden door de werking van een vergelijkbare moleculaire zeef.

Proteïne-elektroforese omvat twee vormen, native polyacrylamide-gelelektroforese (Native-PAGE) en natriumdodecylsulfaat-polyacrylamide-gelelektroforese (SDS-PAGE). Native-PAGE houdt eiwitten intact tijdens elektroforese en scheidt ze in een gradiënt op basis van hun molecuulgewicht, vorm en bijbehorende lading. Aan de andere kant scheidt SDS-PAGE eiwitten op basis van het molecuulgewicht van hun subeenheden. SDS is een anionisch detergent. Als denaturerend en oplossend middel kan het intramoleculaire en intermoleculaire waterstofbruggen verbreken, moleculen vouwen en de secundaire en tertiaire structuren van eiwitmoleculen vernietigen. Als sterk reductiemiddel kan mercaptoethanol, dithiothreitol, de disulfidebindingen tussen cysteïneresiduen verbreken. Na het toevoegen van het reductiemiddel en SDS aan het monster en de gel, worden de moleculen gedepolymeriseerd tot polypeptideketens en worden de gedepolymeriseerde aminozuurzijketens en SDS gecombineerd tot proteïne-SDS-micellen. De negatieve lading van proteïne-SDS-micellen overschrijdt de oorspronkelijke lading van het proteïne, waardoor het ladingsverschil en het structurele verschil tussen verschillende moleculen worden geëlimineerd. De mobiliteit van het proteïne hangt alleen af ​​van de moleculaire massa van het proteïne en de moleculaire massa van het proteïne kan worden bepaald door deze te vergelijken met een standaard van bekende moleculaire massa.

2. Wat is de functie en het principe van geprefabriceerde lijm?

Vergeleken met traditionele handgegoten gels, prefab proteïnegels kan contact met een groot aantal giftige reagentia vermijden, veel tijd besparen en effectief het probleem van grote verschillen in handgegoten gels oplossen.

De gel bestaat uit twee verschillende gellagen, de bovenste laag is een stapelgel en de onderste laag is een scheidingsgel. Stapelgel wordt ook wel stacking gel genoemd.De gelconcentratie is relatief klein en de poriegrootte is relatief groot. Het monster wordt toegevoegd aan de stapelgel en geconcentreerd in een smalle zone door de migratie van de gel met grote poriën. Scheidingsgel, ook wel elektroforesegel genoemd, heeft meestal een kleine poriegrootte en door de juiste gelconcentratie te selecteren, kunnen de monstercomponenten goed worden gescheiden.

Scheidingsgels kunnen worden onderverdeeld in vaste gels en gradiëntgels. De concentratie van polyacrylamide is 8%, 10%, 12%, 15%, 4% tot 12% en 4% tot 20%. De eerste vier zijn voorgegoten gels met een vaste concentratie en de laatste twee zijn gradiëntgels. De concentraties vertegenwoordigen het bereik van geïsoleerde molecuulgewichten van eiwitten. Gelgradiënten worden gevormd door gradiëntmengers. Een acrylamide-oplossing met een hoge concentratie wordt toegevoegd aan de glasplaat en vervolgens neemt de concentratie van de oplossing af in een gradiënt en is de poriegrootte van de gel groter aan de bovenkant en kleiner aan de onderkant. De fixerende gel kan alleen eiwitten scheiden binnen zijn scheidingsbereik, niet te groot en niet te klein. Gradiëntgels hebben deze beperking niet, waarbij grote moleculen aan de bovenkant worden gescheiden en kleine moleculen aan de onderkant. Omdat de poriegrootte van de gradiëntgel geleidelijk kleiner wordt, heeft het een concentrerend effect op het eiwit in de buurt van de poriegrootte die het eiwit niet kan penetreren, waardoor er na elektroforese een zeer smalle zone ontstaat. Eiwitten met kleine verschillen in moleculair gewicht kunnen vaak niet worden gescheiden op vaste gels, maar kunnen wel worden opgelost op gradiëntgels.

3. Introductie van geprefabriceerde lijm geleverd door Yeasen

Yeasen Voorgegoten Proteïne Plus Gel bevat gradiëntconcentratie en vaste concentratie, een verscheidenheid aan verschillende concentraties kan voldoen aan de behoeften van verschillende proteïne-elektroforese. Het wordt bereid door een uniek gelbereidingsproces en heeft een uitstekend elektroforetisch effect. Het is compatibel met alle soorten elektroforesetanks op de markt (Bio-RAD, Tanon, Life, enz.) en heeft de voordelen van brede aanpasbaarheid, hoge resolutie, hoge stabiliteit, heldere en uniforme banden, enz.

3.1 Yeasen Voorgegoten Proteïne Plus Gel Upgrade naar een plastic bord, betere kwaliteit!

Eenvoudig in gebruik: klaar voor gebruik; scheur de plakband van de onderkant van het plastic bord

Breed scala aan toepassingen: compatibel met gedenatureerd eiwit en natuurlijk eiwit

Duidelijke band: de speciale behandeling van kunststofplaten vermindert de eiwitadsorptie aanzienlijk

Tijdbesparend: het experiment kan in het snelste geval in 18 minuten worden afgerond

Kwaliteitsborging: strikte inter-batch stabiliteitsgarantie

Lange houdbaarheid: kan bewaard worden bij 4℃ voor 12 maanden

3.2 De volgende parameters kunnen u helpen bij het kiezen van de juiste gelserie

Elektroforese buffersysteem: gedenatureerde proteïne-loopbuffer of natuurlijke proteïne-loopbuffer

Aantal putjes en monsterlading: 10 of 15 putjes, de maximale monstergrootte was respectievelijk 70 μL en 40 μL

gelconcentratie: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

Tabel 1.Gelconcentratie en bereik van lineaire scheiding

3.3 Gegevens tonen

Figuur 1. Gegevens tonen

Figuur 2. Gegevens tonen

4. Veelgestelde vragen

Vraag 1: Moet de prefab gel op 4℃ worden geplaatst? Maakt het uit als je het een tijdje op kamertemperatuur laat staan?

A: Aanbevolen 4℃, kan 12 maanden bewaard worden. Niet bewaren onder 0℃, kan 30 dagen bewaard worden bij kamertemperatuur (25℃).

Q2: Hoe kies je tussen gradiëntconcentratie en vaste concentratie? Wat is het minimale molecuulgewicht van proteïne gescheiden door precast gel?

A: De grootte van de eiwitscheiding door de prefab gel is gerelateerd aan de concentratie en het bijbehorende scheidingsbereik wordt weergegeven in de bovenstaande afbeelding.

Vaste concentratie prefab gel heeft een betere resolutie. Gradiëntconcentratie prefab gel heeft een breder scheidingsbereik en een breder scala aan toepassingen; Klanten moeten de juiste concentratie kiezen op basis van hun eigen behoeften.

Onze prefab-constructie met een helling van 4%-20% gel (Cat#36250, Cat#36256) heeft een breed scheidingsbereik voor eiwitten van slechts 3,5 kDa.

Figuur 3. Helling prefab gelgegevens

V3: Is de prefab gel Moeten worden uitgerust met uw speciale buffer? Kunt u uw buffer maken?

A: Yeasen speciale buffer (Cat#36236, Cat#36237) en geprefabriceerd gel-toepasbaarheid zijn beter. Niet mengen met andere buffers. De buffer kan worden bereid door reagentia te kopen, maar klanten U moet onze formule gebruiken, die u in de relevante prefab-documentatie kunt vinden gel-instructies.

Vraag 4: Hoe onderscheid je het verschil tussen scheidingsgel en scheidingsgel? en geconcentreerde gel? Is het nodig voor sectionele spanningselektroforese?

A: De twee componenten zijn hetzelfde, maar de concentratie is niet hetzelfde, het blote oog kan het niet onderscheiden; de hoogte van de geconcentreerde lijm is 1,5 cm.

Nee, elektroforese bij 150 V wordt aanbevolen en het experiment duurt 30-40 minuten.

V5: Is uw prefab gel geschikt voor alle soorten elektroforesetanks op de markt?

A: Ja, onze prefab gel is geschikt voor alle soorten elektroforesetanks op de markt,

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra-systeem) en Tanon VE180 (Let op de omgekeerde montage van de afdichtstrip);

Life Technology Novex Mini-cel (gebruikt met speciale baffle);

Andere gelplaatbreedte in 10 cm elektroforesetank.

5. Productdetails

De producten die door Yeasen zijn als volgt:

Tabel 2.Productdetails