—Verlicht uw blotmembraan, binnen handbereik!
ECL-reagentia, bekend als chemiluminescentiesubstraten voor mierikswortelperoxidase (HRP), zijn momenteel de meest gevoelige reagentia die worden gebruikt bij Western blotting-detectie. Veelvoorkomende problemen met ECL-reagentia op de markt zijn onder meer quenching, hoge achtergrond, instabiliteit en moeite met het detecteren van eiwitten met een lage abundantie, wat de uiteindelijke experimentele resultaten kan beïnvloeden.
Producteigenschappen
- Uitstekende gevoeligheid — Detectie van antigenen van picogram tot laag-femtogramniveau.
- Hogere signaal-ruisverhouding — Nauwkeurige luminescerende substraten verminderen achtergrondruis.
- Meer antilichaam-efficiënt — Geoptimaliseerde substraatsystemen voor hogere antilichaambindingsaffiniteit.
- Hoge kosten-prestatieverhouding — Hogere prestaties voor een lagere prijs.
- Uitstekende stabiliteit — Nieuwe oxidanten zorgen voor stabiele opslag bij 4°C gedurende maximaal een jaar.
Productprincipe
Het kernprincipe van ECL-reagensdetectie is de luminescentie van oxidatiereacties: Luminol, het hoofdbestanddeel van het luminescentiesubstraat, wordt geoxideerd door H2O2 onder alkalische omstandigheden door de katalyse van mierikswortelperoxidase (HRP), waarbij een geëxciteerde-toestand-intermediair van 3-amino-ftaalzuur wordt gevormd. Wanneer het terugkeert naar de grondtoestand, worden fotonen uitgezonden, met een maximale emissiegolflengte van 425 nm. Deze fotonsignalen kunnen worden vastgelegd door röntgenfilm of CCD-beeldvormingsapparaten.
Selectiegids
Welk product moet u dus kiezen voor uw experiment?
Tabel 1.ECL-reagentiaselectiegids
| | Verbeterde ECL Verbeterd type | Super-ECL Ultragevoelig type | SuperDura Duurzaam type | MaxiSignaal Type met ultrahoge gevoeligheid |
| Toepasselijke monsters | Doelwit met een hoge overvloed, routinematige eiwitmonsters | Doelwit met lage overvloed, beperkte monsters | Doelwit met lage overvloed, beperkte monsters | Doelwit met extreem lage overvloed, kostbare monsters |
| Detectiegevoeligheid | Gemiddeld picogramniveau | Laag picogramniveau | Gemiddeld femtogramniveau | Laag femtogramniveau |
| Signaalduur | < 2 uur | < 12 uur | < 24 uur | < 8 uur |
| Toepasselijk detectiesysteem | Alle reagentia zijn geschikt voor röntgenfilm, CCD-beeldvormingsapparatuur | |||
| Primaire antilichaamverdunningsconcentratie | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10.000 | 1:1000-1:50.000 | 1:5000-1:100.000 |
| Secundaire antilichaamverdunningsconcentratie | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10.000
| 1:50.000-1:250.000 | 1:100.000-1:500.000 |
| Aanbevolen membraan | NC-membraan | NC-membraan of PVDF-membraan | NC-membraan of PVDF-membraan | NC-membraan of PVDF-membraan |
| Opslagstabiliteit | Kamertemperatuur gedurende 1 jaar | 4°C gedurende 1 jaar, kamertemperatuur gedurende een half jaar | ||
| Voordelen | Sterkste signaal binnen hetzelfde gevoeligheidsniveau | Hoogste prijs-kwaliteitverhouding, geschikt voor de meeste WB-experimenten | Langste signaalduur, uitermate geschikt voor meervoudige belichtingen | Uitstekende gevoeligheid, uitermate geschikt voor detectie van sporeneiwitten |
Let op: De aanbevolen antilichaamverdunningsconcentratie is gebaseerd op een antilichaamvoorraadconcentratie van 1 mg/ml.
Producttoepassing
Figuur 1. Vergelijking van detectie-effecten tussen
Figuur 2. Vergelijking van detectie-effecten tussen
Figuur 3.Vergelijking van detectie-effecten tussen
Gepubliceerde literatuur
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucine-tRNA-synthase-2-expressieve B-cellen dragen bij aan immuno-evasie bij colorectale kanker. Immunity. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D, et al. Structuur en techniek van miniatuur Acidibacillus sulfuroxidans Cas12f1[J]. Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709. DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. Macrophage IRX3 bevordert dieet-geïnduceerde obesitas en metabolische ontsteking. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (IF:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. Poorten van hippocampusritmes en geheugen door synaptische plasticiteit in remmende interneuronen. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Prijsvoordeel
Figuur 7.Prijsvergelijking van
Veelgestelde vragen
| Problemen die zijn opgetreden | Oorzaakanalyse | Aanbevolen oplossingen |
| Film heeft omgekeerde beelden | Film heeft omgekeerde beelden | Film heeft omgekeerde beelden |
| De film heeft bruine of gele banden | ||
| Fluorescentie-blussing | De werkingstijd is te lang, het membraan droogt geleidelijk uit | Voorkom dat het membraan uitdroogt |
| Verontreiniging van plasticfolie, ontwikkelaar of fixeermiddel | Ontwikkel goede experimentele gewoontes | |
| Onvoldoende HRP in het reactiesysteem | Verhoog HRP-gelabeld materiaal | |
| Geen banden of zwak signaal op film | Lage overdrachtsefficiëntie | Verbeter de overdrachtsefficiëntie, gebruik voor het beoordelen een voorgekleurde marker |
| Onvoldoende of niet-passende antigeen/antilichaam | Verhoog de hoeveelheid antigeen/antilichaam of selecteer het juiste antigeen/antilichaam | |
| Problemen met röntgenfilm | Als de röntgenfilm na belichting volledig zwart (niet transparant) is, betekent dit dat de film volledig belicht is; gebruik een nieuwe röntgenfilm | |
| Problemen met ontwikkelaars/fixers | Belicht een film vooraf om te controleren; als er problemen zijn, vervang deze dan met een nieuwe ontwikkelaar/fixer | |
| Overmatige HRP in het reactiesysteem | Verdun HRP-gelabeld materiaal | |
| Hoge achtergrond | Primaire en secundaire antilichaamconcentraties te hoog | Verminder de antilichaamconcentratie, verleng de blokkeringstijd |
| Antilichamen niet grondig gereinigd | Verhoog het aantal wasbeurten | |
| Onvolledige blokkering | Optimaliseer blokkeringsvoorwaarden | |
| Verkeerde blokkeermiddel gebruikt | Gebruik een ander blokkeringsmiddel | |
| Overbelichting | Verkort de belichtingstijd | |
| Slechte antilichaamspecificiteit | Vervang door hoogwaardige antilichamen | |
| Overmatige HRP in het reactiesysteem | Verdun HRP-gelabeld materiaal | |
| Banden met lege plekken | Hoge concentratie antigeen en secundair antilichaam | Verdun het monster en laat de gel opnieuw lopen, of koel de gemengde chromogene oplossing en breng deze aan op het membraan voor een onmiddellijke, snelle ontwikkeling. |
| Onregelmatige bandvorm | Luchtbellen tijdens de overdracht of ongelijkmatige hydratatie met methanol (voor PVDF-membranen) | Optimaliseer de overdrachtsvoorwaarden. |
| Filmspots | Aggregaten van HRP-gelabeld materiaal | Filter HRP-gelabeld materiaal met een 0,2 μm membraan |
| Niet-specifieke banden | Overmatige HRP in het reactiesysteem | Verdun HRP-gelabeld materiaal |
| SDS veroorzaakt niet-specifieke eiwitbinding | Gebruik geen SDS in de experimentele procedure | |
| Slechte antilichaamspecificiteit | Vervang door hoogwaardige antilichamen | |
| Onvoldoende blokkering | Verleng de blokkeringstijd of gebruik een ander blokkeringsmiddel |
Bestel Informatie
| Productnaam | Productnummer | Specificatie |
| Super ECL-detectiereagens | 36208ES60/76 | 100 ml/50 ml |
| Verbeterde ECL Chemiluminescentie Substraat Kit | 36222ES60/76 | 100 ml/500 ml |
| SuperSignal SuperDura Extended Duration-substraat | 36223ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |
| SuperSignal MaxiSignal Maximale Gevoeligheid Substraat | 36224ES10/60/70/76 | 10 ml/100 ml/200 ml/500 ml |