1. Achtergrond Inleiding
Streptavidine is een biotinebindend eiwit afkomstig van Streptomyces avidinii. De niet-specifieke binding is veel lager dan die van avidine, en vergeleken met eiwitavidine, dat een netto positieve lading heeft bij neutrale pH en ongeveer 7% koolhydraten bevat, heeft streptavidine gunstigere chemische eigenschappen zoals bijna geen netto lading bij neutrale pH en geen koolhydraten. Daarom wordt het veel gebruikt als alternatief voor avidine.
2. Productkenmerken
Tetrameerstructuur: Streptavidine bestaat als een homotetrameer met een grootte van 66 kDa;
Hoge affiniteit:Elk molecuul streptavidine kan zich zeer specifiek binden aan vier moleculen biotine, met een extreem sterke affiniteit tussen hen;
Brede toepassingen: De dissociatieconstante van het streptavidine-biotinecomplex ligt in het nanomolaire bereik, een eigenschap die vaak wordt gebruikt in toepassingen in de moleculaire biologie; in de meeste toepassingen kan het door elkaar worden gebruikt met antilichaamproteïnen;
Hoogwaardige extractie: Verkregen door zuivering van Streptomyces avidinii;
Figuur 1. Streptavidine
Product Sollicitatie
Toepassing 1: Gezuiverde hars met streptavidine
1) ToepassingsbeginselGebaseerd op de interactie tussen streptavidine en biotine, is streptavidine sterk gecrosslinkt aan 6% agarose, en het unieke bereidingsproces geeft het hogere fysisch-chemische eigenschappen, waardoor het hogere druk kan weerstaan. Het kan zuivering van het doeleiwit bereiken bij relatief hoge stroomsnelheden, waardoor het geschikter is voor grootschalige industriële eiwitzuivering.
Figuur 2. Zuiveringsprincipe van streptavidinehars
2)
Figuur 3. Eiwit gezuiverd door streptavidinehars
3) Veelgestelde vragen| Vraag | Mogelijke reden | Aanbevolen oplossing |
| De tegendruk van de kolom is te hoog | Verpakking is geblokkeerd | Maak de hars schoon. |
| Lysisbuffer bevat kleine vaste deeltjes. Het wordt aanbevolen om deze te filteren met een 0,22 μm of 0,45 μm filtermembraan voordat u ze laadt, of te centrifugeren om ze te verwijderen. | ||
| Het monster is te viskeus. | Het monster bevat een hoge concentratie nucleïnezuren, verleng de lysistijd totdat de viscositeit is verlaagd of voeg DNase I (eindconcentratie van 5 μg/ml), Mg toe2+ (eindconcentratie van 1 mM), 10-15 minuten op ijs incuberen | |
| Buffer is te viskeus | Organische reagentia of proteïnestabiliserende reagentia (zoals glycerol, enz.) kunnen een verhoogde tegendruk veroorzaken en de bedrijfsstroomsnelheid verlagen. | |
| Eiwit zonder doel in elutiecomponent | Overmatige splitsing denatureert het eiwit van belang | Gebruik milde lysisomstandigheden. Experimentele omstandigheden zijn gebaseerd op ervaring. |
| Het doelwit-eiwit aggregeert om neerslag te produceren | Voeg DTT toe aan de pre-celllysisoplossing in een uiteindelijke concentratie van 1-10 mM. | |
| Het doeleiwit wordt niet volledig geëlueerd | Het elutievolume is te klein | Vergroot het eluensvolume en verlaag de elutiestroomsnelheid. |
| De pH van de elutiebuffer verandert | Gebruik vers bereid eluens | |
| De incubatietijd van het eluens is niet voldoende | Verleng de incubatietijd van de elutiebuffer met de gel. |
Toepassing 2: Fluorescerende groep en enzymconjugaat gelabeld streptavidine.
Figuur 4. Verschillende geconjugeerde streptavidinen
1) Enzymgeconjugeerde streptavidinen- Mierikswortelperoxidase (HRP) geconjugeerde streptavidine
Ⅰ.Geproduceerd door zeer zuivere streptavidine en mierikswortelperoxidase via een speciale conjugatietechniek;
Ⅱ.Behoudt de hoge specifieke activiteit van peroxidase. Toepassingen: Immunohistochemie (IHC), Immunocytochemie (ICC), In situ hybridisatie (ISH), etc.
Aanbevolen concentratie: 0,01-0,1 µg/ml voor WB (chemiluminescentiemethode); 1-2 µg/ml voor ELISA, HC/ICC, WB (substraatkleurontwikkeling)
- Alkalische fosfatase (AP) geconjugeerde streptavidine
Ⅰ. Geschikt voor vaste-fase-analyse, weefsel-/celkleuringssystemen en blot-toepassingen, met specifieke covalente binding;
Ⅱ.Het conjugaat is stabiel en zeer actief.
Toepassingen: Immunohistochemie (IHC), Immunocytochemie (ICC), Enzyme-Linked Immunospot Assay (ELISPOT), Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA), In situ hybridisatie (ISH) en blot-toepassingen.
Aanbevolen concentratie: 1-2 µg/ml voor ELISA, IHC/ICC; 0,1-1 µg/ml voor WB
2) Fluorofoor-geconjugeerde streptavidinen- Fluor® Fluoresceïne Geconjugeerde Streptavidine
Ⅰ.Aanbevolen voor routinematige immunofluorescentie;
Ⅱ.Zeer gezuiverd met zeer lage niet-specifieke bindingseigenschappen;
Ⅲ.Hoge affiniteit voor biotine;
Toepassingen: Immunofluorescentie (IF), In situ hybridisatie (ISH), Flowcytometrie (Flow Cyt).
Aanbevolen concentratie: 0,5-2 µg/ml (IF)
- DyLight™ Kleurstof Geconjugeerde Streptavidine
Ⅰ.Kan worden gebruikt voor het detecteren van gebiotinyleerde tweede antilichamen en andere grote moleculen in immunofluorescentie-, in situ-hybridisatie- of flowcytometrietoepassingen;
Ⅱ.Zeer gezuiverd met zeer lage niet-specifieke bindingseigenschappen;
Ⅲ.Extreem hoge affiniteit voor biotine;
Ⅳ.Hoge fotostabiliteit, pH-ongevoelig en helderdere fluorescentie;
Toepassingen: Immunofluorescentie (IF), In situ hybridisatie (ISH), Flowcytometrie (Flow Cyt).
Aanbevolen concentratie: 0.5-2 µg/ml (indien)
Productinformatie
| Productserie | Productnummer | Productnaam | Specificatie |
| Streptavidine | 35099ES | Streptavidine (poeder) | 100mg/1g |
| 35101ES | Streptavidine (5 mg/ml) | 1 mg/5 mg/10 mg/100 mg/1 g | |
| Enzym-geconjugeerde streptavidinen | 35105ES | HRP Streptavidine | 100 μL |
| 35106ES | AP Streptavidine | 100 μL | |
| Fluorescerend gelabelde streptavidine | 35102ES | DyLight 405™ Streptavidine | 100 μL |
| 35103ES | YSfluorTM 488-geconjugeerde streptavidine | 100 μL | |
| 35104ES | YSfluorTM 647-geconjugeerde streptavidine | 100 μL | |
| 35107ES | YSfluorTM 584-geconjugeerde streptavidine | 100 μL | |
| 35108ES | Cy3-geconjugeerde streptavidine | 1mg | |
| Streptavidine zuiveringsserie | 20512ES | Streptavidine Agarose Hars 6FF | 5 ml/5 ml×5/100 ml |
| 20513ES | BiotSep Streptavidine 6FF Chromatografiekolom, 1ML | 1 ml/1 ml×5 | |
| 20514ES | BiotSep Streptavidine 6FF Chromatografiekolom, 5ML | 5 ml/5 ml×5 |