Технология изотермической амплификации нуклеиновых кислот может быть разделена на множество типов на основе различных принципов амплификации. Наиболее распространенным и широко применяемым методом является технология изотермической амплификации Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP), разработанная японскими учеными, включая Notomi, в 2000 году. Технической особенностью LAMP является разработка четырех праймеров, нацеленных на шесть областей целевого гена, с использованием ДНК-полимеразы Bst типа вытеснения цепи для проведения реакции амплификации при постоянной температуре 60~65°C. Это позволяет достичь 109-1010-кратное усиление в течение 15-60 минут.
Bst ДНК-полимераза является основным ферментом в технологии изотермической амплификации LAMP. Она обладает высокой термостабильностью, активностью смещения цепи и полимеразной активностью, что обеспечивает быструю, эффективную и специфическую амплификацию шаблона в условиях постоянной температуры. В отличие от ПЦР, которая требует циклов термической денатурации для амплификации, весь эксперимент LAMP может быть завершен в течение одного часа без необходимости в таких циклах.
Преимущества продукта
Фермент без глицерина, подходит для лиофилизации
Транспортировка при температуре окружающей среды, снижение затрат
Сильная активность смещения нитей, чувствительная и стабильная
Быстрая регидратация, простота эксплуатации
Основные показатели производительности
01 Применение метода флуоресцентного красителя
1. Высокая чувствительность и хорошая специфичность.
В системе амплификации флуоресцентного красителя RT-LAMP эффективность амплификации лиофилизированного порошкового осадка 14405ES согласуется с эффективностью жидкого фермента Bst (включая глицерин и без глицерина), и оба могут обнаруживать 100% при чувствительности 50 копий/T. Специфичность хорошая, без обнаружения в 48 лунках NTC (отрицательный контроль шаблона).
2. Хорошая термоустойчивость
В системе амплификации флуоресцентного красителя RT-LAMP лиофилизированный порошок подвергался хранению при температуре 45°C в течение 7 дней, 45°C в течение 15 дней и комнатной температуре в течение 19 дней соответственно. После термического ускорения характеристики продукта оставались такими же, как у жидкой версии фермента Bst без глицерина, и пик в NTC (отрицательный шаблонный контроль) не наблюдался.
3. Поддержка повторной заморозки после ускорения.
В системе амплификации флуоресцентного красителя RT-LAMP лиофилизированный порошок подвергался хранению при температуре 45°C в течение 7 дней и 45°C в течение 15 дней соответственно. Лиофилизированный порошок после обработки термическим ускорением затем подвергался второму раунду лиофилизации (включая один фермент и реагенты RT-LAMP). Эксперименты показывают, что после ускоренной обработки и второй лиофилизации характеристики продукта остаются такими же, как у жидкой версии фермента Bst без глицерина, и пик в NTC (отрицательный шаблонный контроль) не наблюдался. Стабильность продукта хорошая, что поддерживает вторичную лиофилизацию и ускорение после вторичной лиофилизации.
02 Применение метода колориметрии pH
1. Высокая чувствительность и хорошая специфичность.
В системе колориметрической амплификации RT-LAMP pH чувствительность амплификации лиофилизированного порошкового препарата 14405ES может достигать 50 копий/T (100% уровень обнаружения), а специфичность хорошая, без обнаружения в 24 лунках NTC (отрицательный контроль шаблона).
2. Хорошая термоустойчивость
В системе колориметрической амплификации RT-LAMP pH исследовалась термоускоренная стабильность лиофилизированного порошка 14405ES при 45°C в течение 15 дней, стабильность после вторичной лиофилизации после ускорения (регидратация после ускорения при 45°C в течение 7 дней) и стабильность при хранении после регидратации (хранение при -20°C в течение 7 дней после регидратации). Эксперименты показывают, что продукт 14405ES обладает хорошей стабильностью, без влияния на эксплуатационные характеристики продукта после термического ускорения, и поддерживает вторичную лиофилизацию после ускорения.
Рекомендуемые рекомендации по продуктам
| Тип продукта | Функция продукта | Название продукта | Номер товара |
| RT-ЛАМП Микс | Флуоресцентный краситель | РТ-ЛАМПА Краситель Анализ Комплект (UDG) Плюс) | 13762ES |
| Индикатор pH | РТ-ЛАМПА рН Чувствительный Красители Набор | 13906ES | |
| Лиофилизированный индикатор pH | РТ-ЛАМПА рН Чувствительный Краситель Хромогенный Версия Сублимируемая Набор | 13920ES | |
| Bst Фермент | Глицерин | Hieff® Бст Плюс ДНК Полимераза (40 Ед/мкл) | 14402ES |
| Без глицерина | Лиофилизированный Бст Плюс ДНК Полимераза (60 Ед/мкл, без глицерина) | 14405ES | |
| Буфер | Основной буфер (без красителей и т.п.) | 10× Hieff® Бст Плюс ДНК Полимераза Буфер | 15441ES |