В последние годы, в связи с быстрым развитием методов молекулярной биологии, Методы диагностики на основе нуклеиновых кислот широко распространены и широко применяются в лабораторных исследованиях заболеваний человека. По сравнению с другими методами амплификации нуклеиновых кислот изотермическая амплификация имеет такие преимущества, как скорость, эффективность и специфичность, а также отсутствие необходимости в специализированном оборудовании. Поэтому с момента своего появления она рассматривалась многими учеными как метод обнаружения, который потенциально мог бы конкурировать с ПЦР.

В результате предполагается, что разработка и применение диагностических инструментов и наборов на основе технологии изотермической амплификации откроет новое направление для тестирования в местах оказания медицинской помощи (POCT) в молекулярной диагностике.

Введение в принципы основных технологий изотермического усиления

1. Изотермическая амплификация с петлевой регуляцией

(ЛАМПА) Технология

Принцип:Изотермическая амплификация с петлей (LAMP) использует ДНК-полимеразу Bst, которая обладает активностью смещения цепи. Она разрабатывает четыре типа специфических праймеров, нацеленных на шесть областей целевого гена, что позволяет эффективно, быстро и специфично амплифицировать целевую последовательность в изотермических условиях. Амплификация может проводиться при постоянной температуре 60-65°C, и в течение 15-60 минут амплификация нуклеиновой кислоты 10⁹ до 10¹⁰ раз может быть достигнуто.

Преимущества и применение：Из-за быстрая реакция, высокая специфичность, простота и удобство в эксплуатации оборудования, а также легкость интерпретации результатов, изотермическое усиление было применено при обнаружении патогенные бактерии, паразиты, вирусы, болезни и генетически модифицированные продукты. Также ожидается, что он будет широко использоваться в клинической диагностике инфекционных заболеваний, мониторинге окружающей среды, безопасности пищевых продуктов и других областях. Он стал идеальным методом, подходящим для молекулярного тестирования в месте оказания помощи (POCT) платформы.

Классификация：Методы обнаружения LAMP подразделяются на несколько типов, включая турбидиметрию, методы индикаторов pH, методы флуоресцентных красителей (таких как NHB, кальцеин, SYBR Green, Syto и т. д.) и методы флуоресцентных зондов.

2. Технология амплификации рекомбиназной полимеразы (RPA)

Принцип:Фермент рекомбиназа, будучи связанным с праймерами, образует комплекс белок-ДНК, который может искать гомологичные последовательности в двухцепочечной ДНК. После того, как праймеры обнаружили гомологичные последовательности, происходит реакция обмена цепями, приводящая к образованию и инициированию синтеза ДНК, который экспоненциально усиливает целевую область на матрице. Смещенная цепь ДНК связывается с белком одноцепочечного связывания (SSB), чтобы предотвратить дальнейшее смещение. В этой системе событие синтеза инициируется двумя противоположными праймерами, в первую очередь полагаясь на активность рекомбиназы, фермента Bsu и белка SSB. Технология может обеспечить быстрое обнаружение интересующей цели в течение 10-30 минут при температурах от 37 до 42 °C.

Преимущества и применение：RPA может похвастаться высокая чувствительность, высокая специфичность, низкая зависимость от специализированного оборудованияи возможность интеграции различных форматов обнаружения. Он особенно подходит для тестирования в местах оказания медицинской помощи на низовом уровне и в полевых условиях. RPA может широко применяться в диагностике in vitro, болезнях животных, безопасности пищевых продуктов, биобезопасности, сельском хозяйстве и других областях.

Классификация：Методы обнаружения RPA подразделяются на несколько типов, включая гель-электрофорез, метод зонда EXO, метод зонда Fpg, метод латерального потока (LF-RPA) и флокуляционный анализ, а также другие.

Демонстрация эффективности продукта

01 pH-чувствительные красители RT-LAMP Реагенты

pH Sensitive Dye RT-LAMP использует визуальный краситель в качестве чувствительного индикатора в изотермических условиях 60-65℃ для завершения одноэтапной амплификации РНК-нуклеиновой кислоты с использованием водяной бани с постоянной температурой или стандартного ПЦР-аппарата. Всего за 30 минут изменение цвета после реакции может быть использовано для определения наличия патогенной инфекции с более наглядными результатами (положительный результат — оранжево-желтый, отрицательный — пурпурный). Этот метод подходит для быстрого тестирования больших популяций.

Рекомендуемые продукты：

Набор красителей RT-LAMP pH Sensitive (13906ES)
RT-LAMP pH-чувствительный краситель хромогенная версия комплект для замораживания-высушивания (13920ES)

Демонстрация производительности：

1.Руководство по выбору смеси RT-LAMP/RPA

Классификация продукции	RT-ЛАМПОВЫЙ микс			РПА микс
Название продукта	Набор для анализа красителей RT-LAMP (UDG plus)	Набор красителей RT-LAMP pH Sensitive	RT-LAMP pH-чувствительный краситель хромогенная версия комплект для замораживания-высушивания	Усилитель быстрого предохранителя
Номер товара	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
Категория продукта	Флуоресцентный краситель	pH-чувствительный краситель	pH-чувствительный краситель	Зонд
Компоненты продукта	2 компонента Смесь буфера и фермента	3 компонента Буфер, фермент RT, фермент Bst	4 компонента Буфер, фермент RT, фермент Bst, лиопротектор	4 компонента Буфер, Ферментная смесь, Ацетат магния
Поддерживается сублимационная сушка	Нет	Да, без лиопротектора	Да, содержит лиопротектор	Нет

2.Руководство по выбору фермента LAMP/RT-LAMP

Классификация продукции	Bst Фермент		Обратная транскриптаза		Фермент УДГ
Название продукта	Бст Плюс	Лиофилизированный Bst Plus	Ⅲ Обратная транскриптаза	III Обратная транскриптаза, Без глицерина	УДГ	UDG, без глицерина
Номер товара	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
Активность ферментов	40 ЕД/мкл	60 ЕД/мкл	200 ЕД/мкл	600 ЕД/мкл	1 ЕД/мкл	1 ЕД/мкл
Компоненты продукта	3 компонента	2 компонента	2 компонента	однокомпонентный	одинокий- компонент	однокомпонентный
Поддерживается сублимационная сушка	Нет	Да	Нет	Да	Нет	Да

3. Руководство по выбору ферментов RPA

Классификация продукции	Бсу	Т4 Х	Т4 Y	ССБ	СК	ЭКЗО
Название продукта	Бсу	T4 UvsX	T4 UvsY	гп 32	Креатинкиназа	Экзонуклеаза III
Номер товара	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
Активность ферментов	5 ЕД/мкл	2 мкг/мкл	2 мкг/мкл	5 мкг/мкл	2 мкг/мкл	100 ЕД/мкл
Компоненты продукта	однокомпонентный	однокомпонентный	однокомпонентный	однокомпонентный	однокомпонентный	2 компонента
Поддерживается сублимационная сушка	Нет	Нет	Нет	Нет	Нет	Нет