Аэрозольное загрязнение рабочей среды как наиболее частая причина ложноположительных результатов ПЦР: новаторское открытие урацил-ДНК-гликозилазы (УДГ) американским ученым Линдалем в E. coli и Bacillus subtilis и создание системы предотвращения загрязнения ПЦР посредством использования фермента УДГ с дУТФ.
Коммерчески доступные ферменты UDG в основном состоят из двух типов: обычные ферменты UDG, полученные из Escherichia coli и Bacillus subtilis, и термолабильные ферменты UDG, полученные из психрофильных морских бактерий. Обычные ферменты UDG проявляют большую термостойкость, сохраняя небольшое количество урацил-ДНК-гликозилазной активности даже после обработки при 95°C в течение 10 минут, что может привести к деградации целевых продуктов амплификации, содержащих dU. Кроме того, из-за использования сконструированных бактериальных штаммов (таких как E. coli) для рекомбинантной экспрессии молекулярных ферментов, в этих ферментах присутствует определенное количество остаточной геномной ДНК хозяина. В сочетании с влиянием производственной среды и человеческих источников, молекулярные ферментные продукты очень восприимчивы к загрязнению ДНК. Во время обнаружения патогенов загрязняющая ДНК может либо маскировать малораспространенные целевые нуклеиновые кислоты, либо обнаруживаться рядом с ними, тем самым влияя на интерпретацию результатов.
Yeasen UCF.ME Урацил ДНК гликозилаза (UDG/UNG), термолабильная
Описание
Урацил-ДНК-гликозилаза UCF.ME (UDG/UNG), термолабильная, 1 ед./мкл (кат. № 14466ES) Полученный из психрофильных морских бактерий, это фермент UDG с ультранизким остаточным термолабильным содержанием, известный как UCF.ME. Использование этого продукта может предотвратить остаточную активность обычных ферментов UDG после инактивации от деградации продуктов амплификации, содержащих dU, при комнатной температуре. Он также предотвращает ложноположительные результаты ПЦР фоновыми бактериями, присутствующими в молекулярных ферментах. Поэтому введение фермента UDG с ультранизким остаточным содержанием UCF.ME® имеет решающее значение для точной идентификации инфекционных патогенов и оказания помощи в клинической диагностике инфекций и инфекционных заболеваний.
Преимущества продукта
- Сверхнизкий остаток геномной ДНК UCF.ME — E. coli <0,1 копий/U;
- Низкий остаток нуклеазы — отсутствие остаточной экзонуклеазы, никирующего фермента или РНКазы;
- Высокая способность к перевариванию — 0,05 U/T может переваривать 105 копий/T продуктов dU-ДНК;
- Хорошая термолабильность — полная инактивация при любых условиях: 50°C в течение 10 минут, 55°C в течение 5 минут или 95°C в течение 5 минут;
- Совместимость с системами реакции ОТ-ПЦР в реальном времени — отсутствие влияния на систему обнаружения даже при высоких уровнях входного сигнала (реакционная система 2U/20 мкл).
（1）Чистота белка ≥95%
Фигура 1. Результаты определения чистоты белка (SDS-PAGE)
（2）Низкий уровень остаточных нуклеаз: отсутствие остаточных экзонуклеаз, ферментов никования или РНКаз
Фигура 2. Результаты теста на остатки нуклеазы
（3）Остаток геномной ДНК E. coli < 0,1 копий/U, уровни остатков были значительно ниже, чем у обычного реагента
Фигура 3. Результаты теста на остатки геномной ДНК E.coli
Фигура 4. Всего 0,05 ед. фермента УДГ может полностью переварить 10^5 копий/т продуктов dU-ДНК.
Рисунок 5. После тепловой инактивации при 50℃，10 мин; 55℃，5 мин; 55℃，10 мин; 95℃，5 мин 14466ES утратил способность к перевариванию.
Рисунок 6. Смесь ОТ-ПЦР была приготовлена с использованием двух прайминговых зондов генов ORF1ab и N и 14466ES. Когда 14466ES был введен в реакционную систему в количестве 2U/20 мкл, не было никакого ингибирования ОТ-ПЦР реакция.
Рекомендации по продукту — Серия сырья для ПЦР-ферментов с ультранизким остаточным содержанием
| Позиционирование продукта | Название продукта | Кот |
| Термолабильный UDG, предотвращающий загрязнение | UCF.ME Урацил ДНК гликозилаза (UDG/UNG), термолабильная, 1 U/мкл | 14466ES |
| Горячий старт Taq ДНК-полимеразы | Hieff UCF.ME Hotstart Sensitive Taq ДНК-полимераза (5 ед./мкл) | 14314ES |
| Обратная транскриптаза | Обратная транскриптаза Hifair UCF.ME V (200 ед./мкл) | 14608ES |
| Ингибитор мышиной РНКазы | 14672ES |