Молекулярная диагностическая технология отличается от различных методов обнаружения своей исключительной чувствительностью и специфичностью. Однако традиционные жидкие диагностические реагенты страдают от недостатков, таких как высокие транспортные расходы и ограниченный срок хранения, что ограничивает их полезность. В ответ на меняющиеся потребности рынка и технологические достижения появились лиофилизированные молекулярные диагностические реагенты для тестирования. Лиофилизированные продукты обладают рядом преимуществ по сравнению с традиционными жидкими реагентами для тестирования, в том числе:
- Стабилен при комнатной температуре. - трехмерная структура фиксирована, что может обеспечить стабильность фермента и реакционной системы при комнатной температуре. Нет необходимости в транспортировке по холодовой цепи и хранении в холодильниках или холодильных камерах, что может продлить срок годности продуктов.
- Легко использовать- Нет необходимости в повторном замораживании и размораживании, дозировании жидкости и т.п.
- Снижение стоимости- Отсутствие необходимости в холодильной цепи транспортировки и замороженном хранении, что существенно снижает затраты на транспортировку и хранение.
- Высокая точность- В одной реакции используется один лиофилизированный микроядро, что позволяет снизить погрешность состава при приготовлении реагентов, сократить время работы, предотвратить потерю биологической активности при приготовлении жидкости и существенно повысить точность.
- Гибкое использование- Количество образцов не ограничено, можно загрузить один образец.
Обычные молекулярные ферменты или премиксы часто включают высокие концентрации глицерина в качестве криопротекторного агента и стабилизатора. Однако присутствие глицерина в реагенте может нарушить структурную целостность воды, что затрудняет эффективное удаление воды. Это, в свою очередь, оказывает пагубное влияние на структуру и стабильность лиофилизированного продукта. Поэтому при выборе лиофилизированного продукта рекомендуется выбирать реагенты без глицерина.
Кроме того, в приложениях, которые особенно чувствительны к составу реагентов, таких как цифровая ПЦР, использование ферментов высокой концентрации без глицерина может дополнительно смягчить влияние глицерина на реакцию цифровой ПЦР. Такой подход не только минимизирует помехи, но и расширяет потенциал для оптимизации системы реагентов для обнаружения цифровой ПЦР.
YEASEN Без глицерина молекулярный ферментный раствор
Компания YEASEN создала комплексную платформу для исследований, разработок и производства неглицериновых молекулярных ферментов и осуществила крупномасштабное производство множества неглицериновых молекулярных ферментов посредством выбора материалов, контроля окружающей среды, оптимизации процесса и обеспечения качества.
- Испытание процесса диализа
Оптимизация процесса диализа для фиксированного объема фермента глицерина:
- Скрининг оптимального диализного буфера для различных молекулярных ферментов;
- Поиск стабильных растворов для хранения различных молекулярных ферментов, позволяющих осуществлять длительное хранение при температуре 4℃ или -20℃.
- Усиление процесса фильтрации тангенциального потока
На основе скрининга процесса диализа можно определить оптимальные компоненты буфера диализа и их оптимальные решения для хранения. Впоследствии для замены буфера раствора можно использовать процесс фильтрации тангенциальным потоком (также известный как UFDF).
Решающие факторы в разработке процесса фильтрации тангенциального потока вращаются вокруг выбора формулы раствора для хранения, формулы промывочного и фильтрационного раствора, а также трансмембранного давления и скорости потока, применяемых во время фильтрации. YEASEN разработал стандартизированный подход к фильтрации тангенциального потока, позволяющий быстро определять объемы промывки и фильтрации и временные параметры на основе желаемого содержания глицерина в целевом молекулярном ферменте. Этот подход помогает экономить как материалы, так и время.
- Контроль качества
Различные процессы подготовки, описанные выше, разработаны для удовлетворения разнообразных требований к разным объемам и типам продукции. Для оценки стабильности продукта в различных партиях и в рамках одного процесса YEASEN разработала комплексную систему характеристики параметров производительности. Эта система позволяет проводить тщательную оценку влияния мер без глицерина с разных точек зрения. Методы характеристики включают в себя количественную оценку белка, оценку активности ферментов (скорость восстановления), анализ содержания глицерина, оценку содержания защитного агента и оценку производительности ферментов, среди прочего.
Молекулярные ферментные продукты YEASEN без глицерина
YEASEN приняла метод молекулярной ферментной подготовки без глицерина для производства ферментов без содержания глицерина из тех, которые изначально содержали глицерин. В настоящее время мы можем поставлять значительные объемы ферментного сырья без глицерина, подходящего для приложений qPCR/RT-qPCR и LAMP/RT-LAMP. Это сырье предназначено для сублимационной сушки в диагностических тестах, при этом сохраняя тот же уровень качества и производительности, что и их жидкие аналоги.
Молекулярные ферментные продукты без глицерина
Премиксы для ПЦР были приготовлены с использованием ЙЕСЕН 14316ES E-Taq ДНК-полимераза и соответствующие ферменты без глицерина, соответственно, и шаблон 105, 104 и 103 Копии/мл были амплифицированы в то же время. Результаты показали, что эффект амплификации 14316ES без глицерина соответствовал эффекту глицеринсодержащего аналог. Ускоренный тест стабильности 14316ES был проведен при 37℃. Результаты показали, что характеристики расширения 14316ES соответствовали характеристикам неускоренного контроля после 54 дней ускоренной обработки при 37℃. Приведенные выше результаты показали, что не было никакой разницы в характеристиках фермента без глицерина и содержащего глицерин аналог, и стабильность была хорошей.
- Продукты лиофилизации ОТ-ПЦР: ускоренные при 50℃ в течение 25 дней, продукты лиофилизации имеют стабильную морфологию и производительность.
Yeasen 14316ES был приготовлен в виде предварительно смешанного раствора RT-qPCR, который был подвергнут сублимационной сушке и испытан на ускоренную стабильность при 50℃ в течение 25 дней. В то же время, 105, 104 и 103 Было амплифицировано 300 копий/мл псевдовирусного шаблона нового коронавируса.Результаты показали, что морфология продукта, значение Ct и значение флуоресценции не претерпели существенных изменений до и после сублимационной сушки, а сублимационный продукт имел хорошую стабильность.
Рисунок 4: Данные ускоренного испытания стабильности лиофилизированных продуктов ОТ-ПЦР- Продукты сублимационной сушки RT-LAMP: ускоренные при 45℃ в течение 30 дней, продукты сублимационной сушки имеют стабильную морфологию и характеристики.
Премикс RT-LAMP был приготовлен с использованием YEASEN 14405ES и 11297ES, а испытание производительности проводилось после сублимационной сушки. Положительная реакционная лунка была оранжевой, а отрицательная реакционная лунка была пурпурной, что показало большой контраст, и результат был четко интерпретирован. Кроме того, морфология сублимированных продуктов существенно не изменилась после 30 дней ускорения при 45℃. Результаты показали, что сублимированный продукт был стабилен по форме и производительности.
Информация о продукте
| Классификация | Наме | Номер по каталогу |
| Ферментные продукты без глицерина для qPCR/RT-qPCR | Набор Hifair™ Lyo Multiplex One Step RT-qPCR -11831ES | 11831ES |
| 14316ES | ||
| 11301ES | ||
| 10707ES | ||
| 10703ES | ||
| Ферментные продукты без глицерина для RT-LAMP | Обратная транскриптаза Hifair® III, 600 ед./мкл, без глицерина | 11297ES |
| Лиофилизированная ДНК-полимераза Bst Plus (60 ед./мкл, без глицерина) | 14405ES |