Руководство по выбору маркера ДНК

----Чистый фон, стабильные узоры полос, точные размеры

ДНК-маркеры представляют собой комбинацию фрагментов ДНК с разной молекулярной массой. Их основное применение — совместная миграция с образцом ДНК в электрофорезе в агарозном геле для разделения молекул ДНК. Сравнивая размер и яркость полос образца с полосами ДНК-маркера, можно приблизительно оценить молекулярную массу и концентрацию образца ДНК в растворе. YEASEN ДНК-маркеры охватывают диапазон молекулярной массы от 100 п.н. до 15 к.п.н., что соответствует потребностям большинства экспериментов.

Характеристики продукта

  1. Высокая стабильность, может храниться при комнатной температуре в течение 3-6 месяцев;
  2. Чистый фон, стабильные узоры полос и точные размеры;
  3. Содержит референтные полосы с известными концентрациями для легкого позиционирования и полуколичественного анализа;
  4. Включает загрузочный буфер для прямого электрофореза, удобно и быстро;
  5. Поставляется с 5-кратным загрузочным буфером для загрузки образцов.

Схема электрофореза

Внимание!

  1. Способ хранения: стабильное хранение при комнатной температуре в течение 3–6 месяцев; в течение более длительного периода хранить при температуре 4°C или -20°C.
  2. ДНК-маркер подходит для анализа полос ДНК в электрофорезе в агарозном геле и не рекомендуется для использования в электрофорезе в полиакриламидном геле.
  3. Выбор концентрации геля и буферного раствора:

Концентрация агарозы

Эффективный диапазон разделения (bp)

Рекомендуемый буфер

0,5%

2000-50000

1×ТАЕ

0,8%

800-10 000

1×ТАЕ

1.0%

400-8000

1×ТАЕ

1,2%

300-7000

1×ТАЕ

1,5%

200-3000

1×ТАЕ/0,5×ТБЭ

2.0%

100-2000

1×ТАЕ/0,5×ТБЭ

3.0%

25-1000

0,5×ТБЭ

【Примечание】: Для больших фрагментов выберите гель с низкой концентрацией и используйте буферную систему TAE для электрофореза; для маленьких фрагментов выберите гель с высокой концентрацией и используйте буферную систему TBE для электрофореза.

  1. Выбор окрасок нуклеиновых кислот:

EB (бромид этидия) — высокочувствительный флуоресцентный краситель с максимальной длиной волны возбуждения 302 нм, который можно использовать для наблюдения за нуклеиновыми кислотами в агарозных и полиакриламидных гелях. EB интеркалирует с основаниями в нуклеиновых кислотах и, как известно, токсичен.

YeaRed (кат. № 10202ES76) и YeaGreen (кат. № 10204ES76) — новые нетоксичные красители нуклеиновых кислот с уникальной маслянистой молекулярной структурой, которые не могут проникать через клеточные мембраны и попадать в клетки, не являются легколетучими или сублимируемыми и, таким образом, не вдыхаются людьми, что обеспечивает безопасность экспериментатора.Результаты теста Эймса также показывают, что YeaRed и YeaGreen не обладают мутагенностью в концентрациях окрашивания геля, что делает их безопасной и нетоксичной альтернативой высококанцерогенному EB. Кроме того, YeaRed имеет те же спектральные характеристики, что и EB, поэтому он может прекрасно заменить EB без изменения существующей системы визуализации.

Вопросы и ответы

В1: Почему полосы ДНК-маркера с высокой молекулярной массой тянутся и плохо разделяются?

A1: Нуклеиновый краситель недостаточно связывается с ДНК-маркером. Поскольку полосы с высокой молекулярной массой требуют больше нуклеинового красителя, если краситель не насыщен, то полосы с высокой молекулярной массой более подвержены эффектам миграции, что приводит к перетаскиванию и плохому разделению. Рекомендуется уменьшить количество используемого ДНК-маркера (его можно разбавить водой в 5 раз, а затем загрузить 8-10 мкл) или увеличить концентрацию нуклеинового красителя.

В2: Почему нет полос или они слабые для ДНК?

А2:

  1. Недостаточная загрузка ДНК, увеличьте количество загруженной ДНК;
  2. Полоса ДНК вышла из геля;
  3. Полоса ДНК скрыта следящим красителем;
  4. Краситель нуклеиновой кислоты в гель не добавлялся;
  5. Агарозный гель хранился слишком долго, рекомендуется приготовить и использовать его немедленно.

В3: Почему полосы ДНК-маркера размыты?

А3:

  1. Частичная деградация ДНК, проверьте, не слишком ли теплые условия хранения;
  2. Напряжение во время электрофореза слишком низкое, что приводит к диффузии полос ДНК. Рекомендуется запускать гель при напряжении 110 В-130 В более 45 мин;
  3. Неправильная концентрация агарозного геля, приготовьте гель в соответствии с рекомендуемой концентрацией в руководстве;
  4. Качество агарозного геля плохое, рекомендуется приготовить новый.

В4: Почему полосы образца кажутся разного размера по сравнению с полосами ДНК-маркера?

А4:

  1. Миграция ДНК связана не только с фактическим размером, но и с тем, сочетается ли она с белками, ионным состоянием, структурой ДНК, гелем и другими факторами. Скорость электрофоретической миграции нуклеиновых кислот связана с соотношением ДНК/краситель, и когда количество красителя нуклеиновой кислоты недостаточно, это может привести к большим ошибкам скорости миграции;
  2. Если образец содержит высокую концентрацию ионов соли, это также может привести к значительным ошибкам миграции;
  3. Если количество загруженного образца значительно отличается от количества полос ДНК-маркера или если объемы существенно различаются, это также может привести к более серьезным ошибкам миграции.

Информация о заказе

Ориентация на продукт

Название продукта

Номер продукта

Технические характеристики

ДНК-маркер

ДНК-маркер GoldBand DL2000

10501ES60/80

100 Т/10×100 Т

ДНК-маркер GoldBand DL5000

10504ES60/80

100 Т/10×100 Т

ДНК-лестница GoldBand 100bp

10507ES60/80

100 Т/10×100 Т

GoldBand 1 кб ДНК-лестница

10510ES60/80

100 Т/10×100 Т

Расследование