—Осветите свою блот-мембрану кончиками пальцев!
Реагенты ECL, известные как хемилюминесцентные субстраты для пероксидазы хрена (HRP), в настоящее время являются наиболее чувствительными реагентами, используемыми в обнаружении вестерн-блоттинга. Распространенные проблемы с реагентами ECL на рынке включают гашение, высокий фон, нестабильность и сложность обнаружения белков с низким содержанием, что может повлиять на конечные результаты эксперимента.
Yeasen Biotech собрала выдающихся научных исследователей в области иммунодетекции. Строго контролируя качество сырья люминола и постоянно совершенствуя формулу усилителей и стабилизаторов, мы разработали четыре типа реагентов ECL для удовлетворения потребностей различных экспериментов. К ним относятся улучшенные, сверхчувствительные, долговечные и сверхчувствительные продукты. Они не только отвечают требованиям обнаружения целевых белков от низкого до высокого содержания, но и усиливают интенсивность люминесценции, не влияя на эксперимент, что приводит к более четким изображениям.
Характеристики продукта
- Превосходная чувствительность — Обнаружение антигенов в концентрациях от пикограммов до фемтограммов.
- Более высокое отношение сигнал/шум — Точные люминесцентные подложки снижают фоновый шум.
- Более эффективные антитела — Оптимизированные системы субстратов для более высокой аффинности связывания антител.
- Высокое соотношение цены и производительности — Более высокая производительность по более низкой цене.
- Отличная стабильность — Новые окислители обеспечивают стабильное хранение при температуре 4°С до одного года.
Принцип продукта
Основным принципом обнаружения реагента ECL является люминесценция от реакций окисления: люминол, основной компонент люминесцентного субстрата, окисляется H2O2 в щелочных условиях посредством катализа пероксидазой хрена (HRP), образуя возбужденное промежуточное состояние 3-аминофталевой кислоты. Когда он возвращается в основное состояние, испускаются фотоны с максимальной длиной волны излучения 425 нм. Эти фотонные сигналы могут быть зафиксированы рентгеновской пленкой или устройствами формирования изображений на основе ПЗС.
Руководство по выбору
В настоящее время Yeasen предлагает четыре типа ECL-продуктов, каждый из которых обладает уникальными характеристиками, что позволяет полностью удовлетворить потребности пользователей в иммуноблоттинге.
Итак, какой продукт выбрать для эксперимента?
Таблица 1.Руководство по выбору реагентов ECL
| Йесен | Улучшенный ECL Улучшенный тип | Супер ECL Сверхчувствительный тип | СуперДура Прочный тип | МаксиСигнал Тип сверхвысокой чувствительности |
| Применимые образцы | Цель с высокой численностью, обычные образцы белка | Цель с низкой численностью, ограниченные выборки | Цель с низкой численностью, ограниченные выборки | Цель с крайне низкой численностью, ценные образцы |
| Чувствительность обнаружения | Средний уровень пикограмм | Низкий уровень пикограмм | Средний уровень фемтограммы | Низкий уровень фемтограммы |
| Длительность сигнала | < 2 ч. | < 12 ч. | < 24 ч. | < 8 ч. |
| Применимая система обнаружения | Все реагенты подходят для рентгеновской пленки и устройств формирования изображений на ПЗС. | |||
| Концентрация разбавления первичных антител | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10,000 | 1:1000-1:50,000 | 1:5000-1:100,000 |
| Концентрация разбавления вторичных антител | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10,000
| 1:50,000-1:250,000 | 1:100,000-1:500,000 |
| Рекомендуемая мембрана | NC мембрана | Мембрана NC или мембрана PVDF | Мембрана NC или мембрана PVDF | Мембрана NC или мембрана PVDF |
| Стабильность при хранении | Комнатная температура в течение 1 года | 4°C в течение 1 года, комнатная температура в течение полугода | ||
| Преимущества | Самый сильный сигнал среди устройств с одинаковым уровнем чувствительности | Наилучшее соотношение цены и качества, подходит для большинства экспериментов с ВБ | Самая большая длительность сигнала, отлично подходит для многократной экспозиции | Превосходная чувствительность, отлично подходит для обнаружения следов белка |
Примечание: Рекомендуемая концентрация разбавления антител основана на концентрации исходного раствора антител 1 мг/мл.
Применение продукта
Реагенты Yeasen ECL демонстрируют лучшие результаты использования по сравнению с продукцией других марок того же уровня.
Рисунок 1. Сравнение эффектов обнаружения между Yeasen ECL Ultra-Sensitive Substrate Super и эквивалентным субстратом Pico марки T.
Рисунок 2. Сравнение эффектов обнаружения между сверхчувствительным субстратом Yeasen ECL MaxiSignal и эквивалентным субстратом других марок West Femto.
Рисунок 3.Сравнение эффектов обнаружения между Yeasen ECL Durable Substrate SuperDura и эквивалентными субстратами других марок West Dura.
Опубликованная литература
[1]Ван З., Лу З., Линь С. и др. В-клетки, экспрессирующие лейцин-тРНК-синтазу-2, способствуют иммуноуклонению колоректального рака. Иммунитет. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z, Liu D, Pan D и др. Структура и инженерия миниатюрных Acidibacillus sulfuroxidans Cas12f1[J]. Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-023-00995-4(IF:38)
[3] Яо Дж., У Д., Чжан Ч. и др. Макрофаг IRX3 способствует ожирению, вызванному диетой, и метаболическому воспалению. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (IF:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G и др. Управление ритмами гиппокампа и памятью с помощью синаптической пластичности в тормозных интернейронах. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Ценовое преимущество
Рисунок 7.Сравнение цен на продукцию Yeasen ECL с продукцией других брендов того же уровня
Часто задаваемые вопросы
| Возникшие проблемы | Анализ причин | Рекомендуемые решения |
| Фильм имеет обратные изображения | Фильм имеет обратные изображения | Фильм имеет обратные изображения |
| На пленке имеются коричневые или желтые полосы | ||
| Тушение флуоресценции | Время работы слишком долгое, мембрана постепенно высыхает | Предотвращает высыхание мембраны |
| Загрязнение пластиковой упаковки, проявителя или фиксажа | Развивайте хорошие экспериментальные привычки | |
| Недостаточное количество HRP в реакционной системе | Увеличить количество материала, маркированного HRP | |
| На пленке нет полос или слабый сигнал | Низкая эффективность передачи | Улучшите эффективность переноса, используйте предварительно окрашенный маркер для оценки |
| Недостаточное или несоответствующее количество антигена/антитела | Увеличьте количество антигена/антитела или выберите соответствующий антиген/антитело | |
| Проблемы с рентгеновской пленкой | Если после экспонирования рентгеновская пленка полностью черная (не прозрачная), это означает, что пленка полностью экспонирована; используйте новую рентгеновскую пленку. | |
| Проблемы с разработчиком/исправителем | Предварительно экспонируйте пленку для проверки; если есть проблемы, замените ее новым проявителем/фиксажем. | |
| Избыток HRP в реакционной системе | Разбавленный материал, меченый HRP | |
| Высокий фон | Слишком высокая концентрация первичных и вторичных антител | Уменьшить концентрацию антител, увеличить время блокировки |
| Антитела не были тщательно очищены | Увеличьте количество стирок | |
| Неполная блокировка | Оптимизировать условия блокировки | |
| Использован неправильный блокирующий агент | Используйте другой блокирующий агент | |
| Передержка | Сократить время воздействия | |
| Низкая специфичность антител | Заменить на высококачественные антитела | |
| Избыток HRP в реакционной системе | Разбавленный материал, меченый HRP | |
| Полосы с пустыми местами | Высокая концентрация антигена и вторичных антител | Разбавьте образец и повторно прогоните гель или охладите смешанный хромогенный раствор и нанесите его на мембрану для немедленного быстрого проявления. |
| Неправильная форма полосы | Пузырьки воздуха при переносе или неравномерная гидратация метанолом (для мембран ПВДФ) | Оптимизировать условия передачи. |
| Рекламные ролики | Агрегаты материала, меченого HRP | Фильтрация материала, меченого HRP, с мембраной 0,2 мкм |
| Неспецифические полосы | Избыток HRP в реакционной системе | Разбавленный материал, меченый HRP |
| SDS вызывает неспецифическое связывание белков | Не используйте SDS в экспериментальной процедуре. | |
| Низкая специфичность антител | Заменить на высококачественные антитела | |
| Неадекватная блокировка | Увеличьте время блокировки или используйте другой блокирующий агент |
Информация о заказе
| Название продукта | Номер продукта | Спецификация |
| Супер ECL-детекторный реагент | 36208ES60/76 | 100 мл/50 мл |
| Улучшенный набор хемилюминесцентных субстратов ECL | 36222ES60/76 | 100 мл/500 мл |
| Субстрат повышенной длительности действия SuperSignal SuperDura | 36223ES10/60/70/76 | 10 мл/100 мл/200 мл/500 мл |
| SuperSignal MaxiSignal Максимальная чувствительность субстрата | 36224ES10/60/70/76 | 10 мл/100 мл/200 мл/500 мл |