Чтобы предоставить больше вариантов лечения для пациентов с диабетом, в начале 21 века появились некоторые новые препараты для лечения диабета, такие как аналоги глюкагоноподобного пептида-1 (GLP-1). Семаглутид, как один из репрезентативных препаратов аналогов GLP-1, в многочисленных клинических исследованиях доказал свою эффективность в контроле уровня сахара в крови при сочетании с различными пероральными гипогликемическими препаратами и может помочь пациентам похудеть, снизить систолическое давление и улучшить функцию β-клеток поджелудочной железы. Его три формулы (гипогликемическая инъекция Ozempic, пероральный гипогликемический препарат Rybelsus и инъекция для снижения веса Wegovy) превысили 20 миллиардов долларов продаж в 2023 году. Благодаря своим выдающимся показателям в снижение уровня сахара в крови и потеря веса, отрасль ожидает, что семаглутид сохранит высокие темпы продаж в течение некоторого времени, привлекая множество компаний к конкуренции за место на рынке!
Основная структура цепи семаглутида представляет собой промежуточный полипептид Arg34GLP-1(9-37) из 29 аминокислот или промежуточный полипептид Arg34GLP-1(11-37) из 27 аминокислот. Производство и изготовление этого промежуточного полипептида в основном включают методы химического синтеза и биопрепарата. По сравнению с химическим синтезом биопрепарат прорвался через узкое место в производительности и больше подходит для крупномасштабного непрерывного производства, что может дополнительно снизить производственные затраты и принести более существенные экономические выгоды.
Таблица 1. Примеры методов биопрепарирования промежуточных полипептидов семаглутида
| Метод биопрепарирования (Пример 1)
| Метод биопрепарирования (Пример 2)
| |
| Синтез генов | Синтезировать последовательность белка слияния, включая пептид слияния, сайт расщепления энтерокиназой и последовательность основной молекулы-мишени | Синтезировать тандемную последовательность экспрессии с последовательностью гена GLP-1(9-37) |
| Инженерные Бактерии Строительство | Ввести в E. coli для создания рекомбинантных генно-инженерных бактерий | Ввести в E. coli для создания рекомбинантных генно-инженерных бактерий |
| Экспрессия белка слияния | Оптимизируя последовательность пептида слияния, изменяя изоэлектрическую точку и гидрофильность белка и т. д., можно эффективно увеличить экспрессию белка слияния.
| После индукции ферментации высокой плотности получается тандемный экспрессирующий белок с тельцами включения, экспрессирующий GLP-1(9-37), а рефолдинг дает растворимый белок. |
| Промежуточное приобретение пептида | После того, как белок слияния подвергается расщеплению энтерокиназой, очистке и другим этапам, может быть получен промежуточный полипептид семаглутида Arg34GLP-1(9-37) | Растворимый белок может быть получен после прохождения двухэтапного ферментативного расщепления ферментом Kex2 и карбоксипептидазой B, а также этапов очистки для получения промежуточного полипептида семаглутида GLP-1(9-37). |
Энтерокиназа или фермент Kex2 в сочетании с карбоксипептидазой B является ключевым ферментом для основной пептидной цепи семаглутида (метод биопрепарата), а эффект разрезания фермента и стоимость имеют решающее значение для производства.Компания Yisheng Biology стремится поставлять стабильное ферментное сырье для фармацевтических компаний, предлагая высококачественные ферменты и полные стандарты контроля качества, чтобы помочь клиентам улучшить производственные мощности и стабильность партий, снизить затраты и быстро выйти на рынок. рынок.
Йесен общее решение для семаглутида
1.Рекомбинантная энтерокиназа
Рекомбинантная энтерокиназа (рЭК) представляет собой субъединицу легкой цепи кишечной энтерокиназы быка высокой чистоты, которая имеет ту же специфическую активность фермента разрезания, что и естественно извлеченная энтерокиназа, с сайтом разрезания Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, способным удалять белок слияния, расположенный на N-конце белка, для удаления ненужных тегов слияния, и является обычно выбираемой протеазой для N-концевого слияния. Она имеет низкий уровень нерегулярного разрезания других остатков.
В настоящее время компания Yisheng предлагает рекомбинантные энтерокиназы из разных источников, разных марок и с бирками His или без них на выбор клиентов.
Рекомбинантный Йезен Бычий Enterokinase, His, Expressed in Yeast — это высокоочищенная, высокоактивная и высокоспецифичная бычья энтерокиназа, экспрессируемая секрецией Pichia pastoris. Она может эффективно расщеплять белки слияния в широком диапазоне pH (4,5–9,5) и широком диапазоне температур, и все еще обладает частичной активностью под действием различных детергентов и денатурантов. Этот продукт имеет His-тег, который можно легко удалить с помощью Ni2+ аффинной колонки после реакции разрезания, что значительно упрощает последующий процесс очистки.
Функции
Высокая специфичность: Специфическая протеаза, разрезающая карбоксильный конец лизина, содержащего четыре аспарагиновые кислоты: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;
Высокая чистота: Никаких других протеаз, никакого неспецифического разрезания;
Не животного происхождения: Рекомбинантное производство, отсутствие экзогенного вирусного заражения, отсутствие использования в процессе производства сырья животного происхождения;
Стабильное качество: Серийное производство может обеспечить стабильное и непрерывное серийное производство; отсутствие различий между партиями, стабильное качество;
Достаточная вместимость: Ферментер объемом 500 л может получить ~50 МЕ энтерокиназы, у Yeasen есть различные ферментеры систем объемом 5–1500 л для удовлетворения различных требований клиентов на разных этапах производства партии продукта;
Поставка продукции разного сорта: Продукция классов R&D (20395ES), GMP (20396ES), GMP соответствует системе менеджмента качества ISO 13485.
Тестовые данные
Тест на активность энтерокиназы:
Рисунок 1. Эффект ферментативного резания Йесен энтерокиназа (20395ES) согласуется с Конкурент N
Примечание: Положительный субстрат (20391ES) представляет собой слитый белок, состоящий из двух специфических белковых последовательностей, соединенных DDDDK (сайт распознавания и разрезания энтерокиназы), с общей молекулярной массой около 64,6 кДа, который может быть специфически разрезан на два независимых белковых фрагмента энтерокиназой с молекулярными массами около 27,9 кДа и 36,6 кДа соответственно. Этот продукт, как субстрат энтерокиназы, может быть использован для полуколичественного или качественного определения активности фермента рекомбинантной или натуральной энтерокиназы.
Тест на чистоту энтерокиназы:
Примечание: Теоретическое значение энтерокиназы составляет 22,7 кДа. Из-за эффекта гликозилирования после экспрессии в Pichia pastoris SDS-PAGE показывает, что молекулярная масса целевого белка составляет около 40 кДа. Как правило, гликозилированные полосы будут иметь слегка размытую полосу, идущую вверх (как показано на правом рисунке). Наша компания также может предоставить дегликозилирующий фермент Endo H (Cat#20414) для клиентов, чтобы дегликозилировать и запустить гель для измерения чистоты (как показано на левом рисунке).
Тест на специфичность разрезания энтерокиназы:
Рисунок 3. Йесен Энтерокиназа (20395ES) обладает меньшим неспецифическим разрезанием, чем импортный конкурент N
Примечание: При тех же условиях, Йесен Для испытаний ферментной резки использовались энтерокиназа (20395ES) и энтерокиназа импортного конкурента N. Результаты показывают, что после очистки неспецифические примеси резки, полученные Йесен энтерокиназа (20395ES) значительно ниже, чем у импортного конкурента N.
Повторное замораживание-оттаивание энтерокиназы, ускоренный тест на стабильность:
Рисунок 4. Йесен Повторное замораживание-оттаивание энтерокиназы (20395ES), ускоренный тест на стабильность показывает, что активность фермента существенно не изменилась.
Примечание: Энтерокиназа Yeasen (20395ES) была выбрана случайным образом из 2 партий, замораживание-оттаивание повторено 10 раз, 20 раз, активность фермента существенно не изменилась по сравнению с исходной активностью фермента.
При хранении при температуре 25°C в течение 7, 16, 32 дней, при температуре 37°C в течение 7, 14 дней активность фермента существенно не изменилась по сравнению с исходной активностью фермента.
2.Рекомбинантный фермент Kex2, карбоксипептидаза B
Таблица 2. Рекомбинантный фермент Kex2 Yeasen, карбоксипептидаза B. Руководство по выбору продукта
| Номер продукта | 20418ES | 20417ES |
| Продукт Имя | Рекомбинантная протеаза Kex2, экспрессированная в дрожжах
| Рекомбинантный CPB, экспрессированный в E.coli
|
| Класс продукта | класс GMP | класс GMP |
| Источник | Рекомбинантная экспрессия из Pichia pastoris | Рекомбинантная экспрессия из E. кишечная палочка |
| Активность | ≥10,0 ед./мг про
| ≥170 Единицы USP/мг про
|
| Место расщепления | Специфически распознает и расщепляет пептидные связи на концевой карбоксильной группе двухосновных аминокислот, таких как Arg-Arg, Lys-Arg | Специфически гидролизует белки на аминоконцевой стороне основных аминокислот (лизин, аргинин, гистидин) на С-конце |
| Применение продукта | 1. Процесс расщепления ферментов при производстве пептидных препаратов. 2. Ферментативное расщепление белков и пептидное картирование, секвенирование и т. д. | 1. Производство рекомбинантного инсулина и его аналогов. 2.Определение аминокислот на С-конце белков. 3. Удаление гистидиновых меток на С-конце белков. 4. Производство других рекомбинантных пептидных веществ. 5. Ферментативный синтез некоторых специальных соединений. |
Фермент Kex2 в сочетании с карбоксипептидазой B: требования к процессу тандемной экспрессии, высокий выход промежуточного продукта семаглутида после разрезания ферментом
Иоблегчить База по производству ферментов класса GMP
База по производству сверхчистых молекулярных ферментов, сертифицированная по стандарту ISO - UCF.ME, оснащенный промышленным оборудованием очистки AKTA и физико-химического анализа, столитровыми ферментационными установками высокой плотности, десятитысячными стандартными чистыми цехами и автоматизированными производственными линиями. Он обладает системами ферментации и очистки различных спецификаций, включая 5 л, 10 л, 30 л, 100 л, 500 л и 1500 л, с возможностью масштабирования производства с 5 л до 1500 л в области индустриализации молекулярных ферментов, полностью удовлетворяя основные потребности в сырье для ферментов клиентов на разных этапах, таких как исследования и разработки, пилотный масштаб и крупномасштабное производство.
Компания Yeasen располагает сильной научно-исследовательской группой и передовой базой по производству ферментов, постоянно повышая качество и производительность ключевых ферментов для производства семаглутида (рекомбинантной энтерокиназы) за счет постоянных технологических инноваций и оптимизации, предлагая градиентные цены для различных спецификаций с целью удовлетворения различных потребностей клиентов на разных этапах производства.
Рекламная информация о продукте
| Название продукта | Номер продукта | Спецификация | Розничная цена ($) | Рекламный Цена($) |
| Рекомбинантная бычья энтерокиназа, His, экспрессированная в дрожжах | 20395ES60/76/90/ 92/94 | 100 У/500 У/ 5000 У/ 100 КУ/ 1 МЕ(1000 КУ) | 45/115/ 825/ 12000/ 360000 | 45/115/ 585/ 5600/ 19600 |
Сопутствующая информация о продукте
| Название продукта | Номер продукта | Спецификация |
| 20391ES03/11 | 1 мг/ 4 мг | |
| Рекомбинантная протеаза Kex2, экспрессированная в дрожжах | 20418ES60 | 100 мкг |
| 20417ES03/10 | 1 мг/10 мг | |
| 20414ES92/97 | 10000 ЕД/50000 ЕД |