1. Введение в историю
Стрептавидин — это биотин-связывающий белок, полученный из Streptomyces avidinii. Его неспецифическое связывание намного ниже, чем у авидина, и по сравнению с авидином яичного белка, который имеет чистый положительный заряд при нейтральном pH и содержит около 7% углеводов, стрептавидин обладает более благоприятными химическими свойствами, такими как почти полное отсутствие чистого заряда при нейтральном pH и отсутствие углеводов. Поэтому он широко используется в качестве альтернативы авидину.
2.Характеристики продукта
Структура тетрамера: Стрептавидин существует в виде гомотетрамера размером 66 кДа;
Высокая аффинность: Каждая молекула стрептавидина может высокоспецифично связываться с четырьмя молекулами биотина, при этом между ними наблюдается чрезвычайно сильное сродство;
Широкое применение: Константа диссоциации комплекса стрептавидин-биотин находится в наномолярном диапазоне, это свойство обычно используется в приложениях молекулярной биологии; в большинстве приложений его можно использовать взаимозаменяемо с белками антител;
Высококачественная экстракция: Получено путем очистки из Streptomyces avidinii;
Рисунок 1. Стрептавидин
Продукт Приложение
Применение 1: Очищенная смола со стрептавидином
1)Принцип примененияНа основе взаимодействия стрептавидина и биотина стрептавидин сильно сшит с 6% агарозой, а уникальный процесс приготовления придает ему более высокие физико-химические свойства, позволяя ему выдерживать более высокие давления. Он может достигать очистки целевого белка при относительно высоких скоростях потока, что делает его более подходящим для крупномасштабной промышленной очистки белка.
Рисунок 2. Принцип очистки стрептавидиновой смолы
2) Компания Yeasen стремится предоставить вам высокоэффективную продукцию для очистки более совершенных белков.
Рисунок 3. Белок, очищенный стрептавидиновой смолой.
3) Часто задаваемые вопросы| Вопрос | Возможная причина | Рекомендуемое решение |
| Обратное давление колонны слишком высокое | Упаковка заблокирована | Очистите смолу. |
| Лизисный буфер содержит мелкие твердые частицы, перед загрузкой рекомендуется профильтровать его через мембранный фильтр 0,22 мкм или 0,45 мкм или центрифугировать для удаления. | ||
| Образец слишком вязкий. | Образец содержит высокую концентрацию нуклеиновых кислот, увеличьте время лизиса до тех пор, пока вязкость не снизится, или добавьте ДНКазу I (конечная концентрация 5 мкг/мл), Mg2+ (конечная концентрация 1 мМ), инкубировать на льду в течение 10-15 минут | |
| Буфер слишком вязкий | Органические реагенты или реагенты, стабилизирующие белки (например, глицерин и т. д.), могут вызвать повышенное противодавление, снизить рабочую скорость потока. | |
| Нецелевой белок в компоненте элюирования | Чрезмерное расщепление денатурирует интересующий белок. | Используйте мягкие условия лизиса. Экспериментальные условия основаны на опыте. |
| Целевые белковые агрегаты для образования осадков | Добавьте ДТТ в раствор для предварительного лизиса клеток в конечной концентрации 1–10 мМ. | |
| Целевой белок не элюируется полностью | Объем элюирования слишком мал | Увеличьте объем элюента и уменьшите скорость потока элюирования. |
| Изменение pH элюирующего буфера | Используйте свежеприготовленный элюент. | |
| Время инкубации элюента недостаточно | Увеличьте время инкубации элюирующего буфера с гелем. |
Применение 2: Флуоресцентная группа и конъюгат фермента, меченые стрептавидином.
Рисунок 4. Различные конъюгированные стрептавидины
1) Ферментно-конъюгированные стрептавидины- Конъюгированный стрептавидин с пероксидазой хрена (HRP)
Ⅰ. Произведено из высокоочищенного стрептавидина и пероксидазы хрена с помощью специальной техники конъюгации;
Ⅱ.Поддерживает высокую удельную активность пероксидазы. Применение: иммуногистохимия (ИГХ), иммуноцитохимия (ИЦХ), гибридизация in situ (ISH) и т. д.
Рекомендуемая концентрация: 0,01–0,1 мкг/мл для WB (метод хемилюминесценции); 1–2 мкг/мл для ELISA, HC/ICC, WB (проявление окраски субстрата)
- Щелочная фосфатаза (ЩФ) Конъюгированный стрептавидин
Ⅰ. Подходит для твердофазного анализа, систем окрашивания тканей/клеток и блоттинга со специфической ковалентной связью;
Ⅱ.Конъюгат стабилен и высокоактивен.
Области применения: иммуногистохимия (ИГХ), иммуноцитохимия (ИЦХ), иммуноферментный анализ пятен (ELISPOT), иммуноферментный анализ сорбентов (ELISA), гибридизация in situ (ISH) и блоттинг.
Рекомендуемая концентрация: 1–2 мкг/мл для ИФА, ИГХ/ИКХ; 0,1–1 мкг/мл для ВБ
2) Стрептавидины, конъюгированные с флуорофором- Fluor® Стрептавидин, конъюгированный с флуоресцеином
Ⅰ.Рекомендуется для рутинной иммунофлюоресценции;
Ⅱ.Высокоочищенный с очень низкими характеристиками неспецифического связывания;
Ⅲ.Высокое сродство к биотину;
Области применения: иммунофлуоресценция (ИФ), гибридизация in situ (ИГ), проточная цитометрия (Flow Cyt).
Рекомендуемая концентрация: 0,5-2 мкг/мл (IF)
- DyLight™ Конъюгированный краситель стрептавидин
Ⅰ.Может использоваться для обнаружения биотинилированных вторых антител и других крупных молекул в иммунофлуоресценции, гибридизации in situ или проточной цитометрии;
Ⅱ.Высокоочищенный с очень низкими характеристиками неспецифического связывания;
Ⅲ.Чрезвычайно высокое сродство к биотину;
Ⅳ. Высокая фотостабильность, нечувствительность к pH и более яркая флуоресценция;
Области применения: иммунофлуоресценция (ИФ), гибридизация in situ (ИГ), проточная цитометрия (Flow Cyt).
Рекомендуемая концентрация: 0.5-2 мкг/мл (ИФ)
Информация о продукте
| Серия продуктов | Номер продукта | Название продукта | Спецификация |
| Стрептавидин | 35099ES | Стрептавидин (порошок) | 100 мг/1 г |
| 35101ES | Стрептавидин (5мг/мл) | 1 мг/5 мг/10 мг/100 мг/1 г | |
| Ферментно-конъюгированные стрептавидины | 35105ES | HRP-стрептавидин | 100 мкл |
| 35106ES | AP Стрептавидин | 100 мкл | |
| Стрептавидин с флуоресцентной меткой | 35102ES | DyLight 405™ Стрептавидин | 100 мкл |
| 35103ES | YSFluorТМ 488-конъюгированный стрептавидин | 100 мкл | |
| 35104ES | YSFluorТМ 647-конъюгированный стрептавидин | 100 мкл | |
| 35107ES | YSFluorТМ 584-конъюгированный стрептавидин | 100 мкл | |
| 35108ES | Стрептавидин, конъюгированный с Cy3 | 1 мг | |
| Серия очистки стрептавидина | 20512ES | Стрептавидин агарозная смола 6FF | 5 мл/5мл×5/100 мл |
| 20513ES | Хроматографическая колонка BiotSep Streptavidin 6FF, 1 мл | 1 мл/1мл×5 | |
| 20514ES | Хроматографическая колонка BiotSep Streptavidin 6FF, 5 мл | 5 мл/5 мл×5 |