Введение в тег антитела
Антитела-теги используются для обнаружения и очистки последовательностей тегов на различных коммерческих векторах экспрессии для анализа и определения уровней экспрессии и функций целевых белков. Принцип их использования заключается в реакции антиген-антитело, где эти антитела-теги могут специфически связываться с соответствующими белками, слитыми с тегом. Вот краткий список некоторых распространенных белковых тегов, подходящих для использования с антителами-тегами:
Таблица 1. Введение в различные белковые теги
| Ярлык | Последовательность | Функции | Применимые сценарии |
| Флаг | ДИКДДДДК | 1. Небольшая молекулярная масса, не изменяет функцию белка слияния, более гидрофильный, чем аналогичные метки; 2. Содержит сайт распознавания энтерокиназы (DDDDK), который удобен для удаления метки при слиянии с N-концом целевого белка. | Подходит для очистки и обнаружения белков слияния с низким уровнем экспрессии в эукариотических системах экспрессии. |
| ГА | YPYDVPDYA | Получен из детерминанты поверхностного антигена гемагглютинина вируса гриппа; избегать использования в экспериментах, связанных с апоптотическими клетками. | Подходит для очистки и обнаружения белков. |
| Мик | Глу-Глн-Лис-Лей-Иль-Сер-Глю-Глю-Асп-Лей | Получен из человеческого протоонкогена Myc; избегать использования в экспериментах, связанных с человеческими клетками. | Обычно не используется для очистки белков, подходит для обнаружения. |
Продукты очистки антител Yeasen tag affinity изготавливаются из высококачественных моноклональных антител мыши IgG в качестве сырья. Благодаря процессу, называемому «ковалентное связывание», эти антитела направленно и эффективно связываются с агарозными матрицами или поверхностями наномагнитных шариков. Это не только снижает неспецифическое связывание белков, но и обеспечивает более высокую нагрузку антител на среду. Кроме того, он предоставляет продукты очистки антител tag, подходящие для различных требований очистки, включая различные смолы для очистки антител tag и иммуномагнитные шарики, облегчающие очистку меченых белков и эксперименты по иммунопреципитации с использованием ручных или автоматизированных методов.
Руководство по выбору продукта для очистки антител Yeasen Tag
| Серия продуктов | Серия очищающих смол | Серия иммуномагнитных шариков | |||||
| Номер продукта | 20584ES | 20586ES | 20587ES | 20565ES | 20566ES | 20567ES | 20564ES |
| Название продукта | Анти-HA MagBeads | Анти-MycMagBeads | |||||
| Лиганды | Высококачественные мышиные моноклональные антитела IgG | Высококачественные мышиные моноклональные антитела против GFP/Flag/HA/Myc | |||||
| Связывающая способность белка | ≥1,1 мг белка слияния с меткой-флагом/мл геля ≥1,5 мг белка слияния, меченого HA/мл геля ≥0,9 мг белка слияния с меткой Myc/мл геля | ≥0,8 мг белка слияния с меткой GFP/мг бусины ≥0,6 мг белка слияния с флагом/мг гранул ≥0,4 мг белка слияния, помеченного HA/мг гранул ≥0,5 мг белка слияния с меткой Myc/мг бусины
| |||||
| Матрица | 4% сшитый агарозный гель | Магнитные шарики на основе кремния | |||||
| Размер частиц | 45-165 мкм | 200 нм | |||||
| Преимущества | Низкое неспецифическое связывание, высокая емкость | Высокая чистота, высокая емкость, высокая специфичность, удобное использование с магнитной стойкой | |||||
| Рекомендуемые приложения | Аффинная очистка меченых слитых белков в любом масштабе, иммунопреципитация (ИП) | Иммунопреципитация (ИП), Коиммунопреципитация (КОИП) | |||||
Тестовые данные
1. Сравнительный тест очистки геля Anti-Flag Affinity Gel (20584ES) и геля бренда S*.
Рисунок 1. Сравнительный тест геля Anti-Flag Yeasen (a) и Brand S* (b) Изображение геля
M: Белковый маркер; 1: Предколоночный лизат белков Flag-N, M, C; 2: Постколоночный пермеат белков Flag-N, M, C; 3: Элюция (элюция при pH 2,7); 4: Элюция (элюция при pH 12)
2. Стрелки на рисунке ниже указывают на целевые меченые белки, а три полосы сверху вниз после непосредственного кипячения магнитных частиц представляют собой BSA, тяжелую цепь антитела и легкую цепь антитела.
Фигура 2. Очистка белков с метками флага с помощью Anti-Flag MagBeads
1: Лизат E. coli, содержащий Flag-меченый белок 10 мкл; 2: Супернатант после инкубации лизата E. coli, содержащего Flag-меченый белок, с магнитными частицами 10 мкл; 3: Прямое кипячение Flag-меченого белка с Anti-Flag MagBeads 10 мкл; 4: Прямое кипячение Anti-Flag MagBeads; 5: Маркер
3.
Фигура 3. Очистка белков с меткой GFP с помощью Anti-GFP MagBeads
1: Лизат E. coli, содержащий белок с меткой GFP, 10 мкл; 2: Супернатант после инкубации лизата E. coli, содержащего белок с меткой GFP, с магнитными частицами, 10 мкл; 3: Прямое кипячение белка с меткой GFP с Anti-GFP MagBeads, 10 мкл; 4: Прямое кипячение Anti-GFP MagBeads; 5: Маркер
Информация о продукте
| Название продукта | Номер продукта | Спецификация |
| 20584ES03/08/25 | 1 мл/5 мл/25 мл | |
| 20586ES03/08/25 | 1 мл/5 мл/25 мл | |
| 20587ES03/08/25 | 1 мл/5 мл/25 мл | |
| 20565ES03/08 | 1 мл/5 мл | |
| Анти-HA MagBeads | 20566ES03/08 | 1 мл/5 мл |
| Anti-Myc MagBeads | 20567ES03/08 | 1 мл/5 мл |
| 20564ES03/08 | 1 мл/5 мл |