Рисунок 1. Структура сывороточного альбумина человека. ^[1]

3.Применение Рэкомбинантный Сэрум Албумин

3.1 Альбумин — это бессывороточная добавка к питательной среде.

Альбумин является важным компонентом многих систем культивирования клеток без сыворотки, например, для клеток гибридомы и клеток яичника китайского хомячка (СНО).Альбумин может быть включен в клеточные каркасы для обеспечения клеток необходимыми питательными веществами и источником факторов роста, способствуя выживанию и пролиферации клеток. Человеческий сывороточный альбумин используется в качестве добавки к среде культивирования клеток для поддержания роста и здоровья клеток, используемых в производстве моноклональных антител, рекомбинантных белков и других биологических продуктов. Альбумин также может сделать среду культивирования клеток более стабильной и контролируемой, снижая изменчивость от партии к партии и риски загрязнения, связанные с сывороткой животного происхождения.

3.2 Культура клеток млекопитающих

Альбумин связывает широкий спектр биоактивных веществ, что делает его ключевой транспортной молекулой. Альбумин также удаляет активные формы кислорода, которые вредны для выживания клеток. Эти свойства делают альбумин отличным выбором для стимулирования роста клеток и поддержания различных эукариотических клеток in vitro. Рекомбинантный человеческий альбумин хорошо подходит для различных типов стволовых, первичных и производственных клеток, включая иммунные клетки, VERO, мезенхимальные стволовые клетки, HEK293, диплоидные клетки, CHO и другие типы клеток.

3.3. Производство и приготовление вакцины

HSA является важным компонентом для стабилизации вакцин, обеспечивая множество преимуществ для различных типов вакцин, включая живые ослабленные вирусы, инактивированные или убитые вирусы, вирусоподобные частицы и субъединичные вакцины. Одним из примечательных свойств HSA является его способность покрывать как гидрофобные, так и гидрофильные поверхности, тем самым предотвращая нежелательную неспецифическую адсорбцию вакцин на протяжении всего их жизненного цикла, от производства до формулирования и хранения. Благодаря своей связывающей способности, способной как к ионным, так и к гидрофобным взаимодействиям, HSA может защищать открытые поверхности вакцин от нежелательной агрегации и образования частиц, которые в противном случае могли бы поставить под угрозу эффективность вакцины.

3.4 Диагностика заболеваний in vitro/in vivo

HSA является биомаркером различных заболеваний, включая рак, ревматоидный артрит, ишемию, заболевания печени, ожирение и диабет.

3.5 Применение человеческого сывороточного альбумина в терапии стволовыми клетками

Альбумин уже давно является важным компонентом сред для культивирования клеток. Его способность стимулировать рост различных типов клеток хорошо документирована, включая мезенхимальные стволовые клетки (МСК), эмбриональные стволовые клетки (ЭСК), индуцированные плюрипотентные стволовые клетки (ИПСК) и иммунные клетки. В культуре клеток альбумин — это не просто источник питательных веществ. Он действует как многофункциональный резервуар, защищая необходимые металлы и другие молекулярные объекты, тем самым создавая оптимальную среду для непрерывного роста и жизнеспособности клеток.

Помимо применения в клеточной культуре, альбумин может также использоваться для криоконсервации стволовых клеток. Поверхностная покрывающая способность альбумина обеспечивает безопасность клеток во время процесса замораживания. Кроме того, буферная способность альбумина поддерживает баланс pH, необходимый для целостности клеток, в то время как его стабилизирующая способность удерживает клетки в суспензии, тем самым продлевая их жизнеспособность во время криоконсервации.

Кроме того, альбумин может использоваться в качестве носителя лекарственных препаратов для продления времени циркуляции лекарственных препаратов в организме и повышения их эффективности.

4.Механизм действия альбумина в питательной среде

4.1 Связывающие жирные кислоты

Альбумин является носителем 99% неэтерифицированных жирных кислот (ЖК) в плазме. Альбумин имеет 7 высокоаффинных и более 20 низкоаффинных участков связывания ЖК. Жирные кислоты, такие как линолевая кислота, линоленовая кислота и олеиновая кислота, нерастворимы в водном растворе и должны доставляться в клетки с помощью молекул-носителей. Циркулирующий альбумин обычно может переносить 1 или 2 свободные жирные кислоты. Связывание жирных кислот также помогает стабилизировать альбумин. Как добавка для клеточной культуры активность альбумина частично зависит от конкретных жирных кислот, которые он связывает и доставляет в клетки.

4.2 Связывание ионов металлов

Ионы металлов являются важными компонентами для клеточной культуры. HSA является ключевым транспортером для ключевых ионов металлов Cu2+ и Zn2+. Кроме того, атомы меди могут подвергаться моновалентным окислительно-восстановительным реакциям и катализировать образование свободных радикалов, делая медь цитотоксичной. In vivo внеклеточные ионы меди связываются с альбумином, ослабляя потенциальную токсичность меди. Каждая молекула альбумина имеет высокоаффинный участок связывания меди, и когда медь связана с этим участком, она не будет участвовать в окислительно-восстановительных реакциях, связанных со свободными радикалами. Альбумин также может связывать другие двухвалентные катионы, такие как Ca, Mg, Mn, Cd, Co и Ni.

4.3 Антиоксидантные свойства HSA

Антиоксидантная активность HSA в основном обусловлена ​​окислительно-восстановительными свойствами четырех основных участков связывания металлов. Свободная Cu 2+, Fe 2+ и другие ионы металлов реагируют с кислородом, образуя ROS , который также может взаимодействовать с H2O2, образуя вредные гидроксильные радикалы. С другой стороны, связывание альбумина с ионами металлов ограничивает способность этих ионов участвовать в генерации ROS.

Промышленные культуры эукариотических клеток, проводимые в биореакторах, содержат растворенный кислород и свободные металлы, такие как железо, медь, кобальт и никель, которые производят ROS, разрушающие клеточные мембраны. Добавление BSA или HSA снижает давление ROS, что приводит к получению здоровых клеточных культур. С другой стороны, связывание альбумина с этими металлами, особенно медью, цинком, ванадием и селеном, способствует поглощению этих металлов клетками, стимулирует рост культуры и значительно улучшает производство рекомбинантных белков в эукариотических клетках.

4.4 Связывание пиридоксаля

Аминокислоты являются ключевыми компонентами сред для культивирования клеток. Пиридоксаль и его производное 5' пиридоксальфосфат (PLP) могут неферментативно реагировать с аминокислотами и образовывать основания Шиффа. Эти основания Шиффа очень нестабильны и при контакте с ионами металлов приводят к деградации аминокислот и ингибированию роста клеток. Свободная фракция пиридоксаля секвестрируется путем связывания с альбумином, что предотвращает реакцию пиридоксаля с аминокислотами in vitro и их разрушение.

4.5 Связывание рибофлавина

Рибофлавин — еще один фактор, который реагирует со свободными аминокислотами и разрушает их. В водном растворе рибофлавин может связываться с триптофаном, образуя комплекс. При освещении этот комплекс распадается на токсичные продукты. Альбумин может связываться с рибофлавином и его фосфатом (флавинмонофосфатом) и защищать их от разрушения. Альбумин имеет один сайт связывания триптофана.

5.Характеристики продукта

Компания Yeasen поставляет различные виды рекомбинантного сывороточного альбумина, в том числе человеческого, мышиного, крысиного, обезьяньего и других видов.