Isotermisk nukleinsyraamplifieringsteknologi kan kategoriseras i många typer baserat på olika amplifieringsprinciper. Den vanligaste och mest använda metoden är Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP)-teknologin utvecklad av japanska forskare inklusive Notomi år 2000. Den tekniska egenskapen hos LAMP är designen av fyra primers riktade mot sex regioner på målgenen, med användning av ett strängförskjutande typ Bst DNA-polymeras för att utföra amplifieringsreaktionen vid en konstant temperatur på ~65°C. Detta ger en 10:a9-1010-faldig förstärkning inom 15-60 minuter.
Bst DNA-polymeraset är kärnenzymet i LAMPs isotermiska amplifieringsteknologi. Den har stark termisk stabilitet, strängförskjutningsaktivitet och polymerasaktivitet, vilket möjliggör snabb, effektiv och specifik amplifiering av mallen under konstanta temperaturförhållanden. Till skillnad från PCR, som kräver termiska denatureringscykler för amplifiering, kan hela LAMP-experimentet slutföras inom en timme utan behov av sådana cykler.
Produktfördelar
Glycerolfritt enzym, lämpligt för lyofilisering
Omgivningstemperaturtransport, vilket minskar kostnaderna
Stark strängförskjutningsaktivitet, känslig och stabil
Snabb återfuktning, lätt att använda
Prestandahöjdpunkter
01 Fluorescerande färgmetoden Applicering
1、Hög känslighet och bra specificitet
I RT-LAMP fluorescerande färgämnesförstärkningssystemet är amplifieringsprestandan för den lyofiliserade pulverkakan 14405ES överensstämmande med den för det flytande Bst-enzymet (inklusive glycerol och glycerolfritt), och båda kan detektera 100 % vid en känslighet på 50 kopior/T. Specificiteten är god, utan detektion i 48 brunnar av NTC (Negative Template Control).
2、 Bra termisk accelererad stabilitet
I det fluorescerande färgämnesamplifieringssystemet RT-LAMP utsattes det lyofiliserade pulvret för lagringsbehandlingar vid 45°C i 7 dagar, 45°C i 15 dagar respektive rumstemperatur i 19 dagar. Efter termisk acceleration förblev produktens prestanda överensstämmande med den för den flytande versionen av glycerolfritt Bst-enzym, och ingen topp observerades i NTC (Negative Template Control).
3、Stöder återfrysning efter acceleration
I det fluorescerande färgämnesamplifieringssystemet RT-LAMP utsattes det lyofiliserade pulvret för lagringsbehandlingar vid 45°C under 7 dagar respektive 45°C under 15 dagar. Det lyofiliserade pulvret efter termisk accelerationsbehandling utsattes sedan för en andra omgång av lyofilisering (inklusive ett enda enzym och RT-LAMP-reagens). Experiment visar att efter den accelererade behandlingen och den andra lyofiliseringen förblir produktens prestanda överensstämmande med den för den flytande versionen av glycerolfritt Bst-enzym, och ingen topp observerades i NTC (Negative Template Control). Produktens stabilitet är god och stödjer sekundär frystorkning och acceleration efter sekundär frystorkning.
02 pH kolorimetrisk metod Applicering
1、Hög känslighet och bra specificitet
I det kolorimetriska amplifieringssystemet RT-LAMP kan amplifieringskänsligheten för den lyofiliserade pulverkakan 14405ES nå 50 kopior/T (100 % detektionshastighet), och specificiteten är god, utan detektion i 24 brunnar av NTC (Negative Template Control).
2、 Bra termisk accelererad stabilitet
I RT-LAMP pH kolorimetriska amplifieringssystemet undersöktes den termiskt accelererade stabiliteten för det lyofiliserade pulvret 14405ES vid 45°C i 15 dagar, stabiliteten efter sekundär lyofilisering efter acceleration (rehydrering efter acceleration vid 45°C i 7 dagar) och lagringsstabiliteten efter återhydrering (20 dagar) efter återhydrering. Experimenten indikerar att 14405ES-produkten har god stabilitet, utan inverkan på produktens prestanda efter termisk acceleration, och stödjer sekundär lyofilisering efter acceleration.
Utvalda produktrekommendationer
| Produkttyp | Produkt funktion | Produktnamn | Artikelnummer |
| RT-LAMP Mix | Fluorescerande färgämne | RT-LAMPA Färga Analysera Kit (UDG Plus) | 13762ES |
| pH-indikator | RT-LAMPA pH Känslig Färgämne Utrustning | 13906ES | |
| Lyofiliserbar pH-indikator | RT-LAMPA pH Känslig Färga Kromogen Version Frystorkbar Utrustning | 13920ES | |
| Bst-enzym | Glycerol | Hieff® Bst Plus DNA Polymeras (40 U/μL) | 14402ES |
| Glycerolfri | Lyofiliserad Bst Plus DNA Polymeras (60 U/μL, glycerolfri) | 14405ES | |
| Buffert | Basic Buffer (fri från färgämnen etc.) | 10× Hieff® Bst Plus DNA Polymeras Buffert | 15441ES |