Under de senaste åren, med den snabba utvecklingen av molekylärbiologiska tekniker, Nukleinsyrabaserade diagnostiska metoder har i stor utsträckning etablerats och tillämpats i stor utsträckning vid laboratorietester av mänskliga sjukdomar. Jämfört med andra nukleinsyraamplifieringstekniker erbjuder isotermisk amplifiering fördelarna av att vara snabb, effektiv och specifik och kräver ingen specialutrustning. Därför, sedan dess uppkomst, har det ansetts av många forskare som en detektionsmetod som potentiellt skulle kunna konkurrera med PCR.

Som ett resultat tror man att utvecklingen och tillämpningen av diagnostiska instrument och kit baserade på isotermisk amplifieringsteknologi kommer att representera en ny riktning för Point-of-Care Testing (POCT) inom molekylär diagnostik.

Introduktion till principerna för vanliga isotermiska amplifieringstekniker

1、Slingförmedlad isotermisk förstärkning

(LAMPA) Teknik

Princip:Loop-medierad isotermisk amplifiering (LAMP) använder Bst DNA-polymeras, som har strängförskjutningsaktivitet. Den designar fyra typer av specifika primrar som riktar sig till sex regioner av målgenen, vilket möjliggör effektiv, snabb och specifik amplifiering av målsekvensen under isotermiska förhållanden. Amplifieringen kan utföras vid en konstant temperatur på 60-65°C och inom 15-60 minuter, en nukleinsyraamplifiering på 10⁹ till 10¹⁰ tider kan uppnås.

Fördelar och tillämpningar:På grund av dess snabba reaktion, höga specificitet, enkla och lättmanövrerade utrustning och resultat som är lätta att tolka, har isotermisk amplifiering använts vid detektering av patogena bakterier, parasiter, virus, sjukdomar och genetiskt modifierade produkter. Det förväntas också användas i stor utsträckning inom klinisk diagnostik av infektionssjukdomar, miljöövervakning, livsmedelssäkerhet och andra områden. Det har blivit en idealisk metod lämplig för molekylär Point-of-Care-testning (POCT) plattformar.

Klassificering:LAMP-detektionsmetoder klassificeras i flera typer, inklusive turbidimetri, pH-indikatormetoder, fluorescerande färgämnen (såsom NHB, calcein, SYBR Green, Syto, etc.) och fluorescerande sondmetoder.

2、Recombinase Polymerase Amplification (RPA)-teknologi

Princip:Rekombinasenzymet, när det är bundet till primers, bildar ett protein-DNA-komplex som kan söka efter homologa sekvenser inom dubbelsträngat DNA. När väl primrarna har lokaliserat de homologa sekvenserna inträffar en strängbytesreaktion, vilket leder till bildning och initiering av DNA-syntes, vilket exponentiellt amplifierar målregionen på mallen. Den undanträngda DNA-strängen binder till enkelsträngsbindande (SSB) protein för att förhindra ytterligare förskjutning. I detta system initieras en synteshändelse av två motsatta primrar, främst beroende på aktiviteterna av rekombinaset, Bsu-enzymet och SSB-proteinet. Tekniken kan uppnå snabb detektering av målet av intresse inom 10-30 minuter vid temperaturer från 37 till 42°C.

Fördelar och tillämpningar:RPA skryter hög känslighet, stark specificitet, lågt beroende av specialiserad utrustning, och förmågan att integrera olika detekteringsformat. Den är särskilt lämplig för testning på gräsrotsnivå och i fält. RPA kan användas i stor utsträckning inom in vitro-diagnostik, djursjukdomar, livsmedelssäkerhet, biosäkerhet, jordbruk och andra områden.

Klassificering:RPA-detektionsmetoder är kategoriserade i flera typer, inklusive gelelektrofores, EXO-sondmetod, Fpg-sondmetod, lateralflödessticka (LF-RPA) och flockningsanalys, bland andra.

Presentation av produktprestanda

01 pH Sensitive Dye RT-LAMP Reagens

pH Sensitive Dye RT-LAMP använder ett visuellt färgämne som en känslig indikator, under isotermiska förhållanden på 60-65 ℃, för att fullborda enstegs RNA-nukleinsyraamplifiering med ett vattenbad med konstant temperatur eller en vanlig PCR-maskin. På bara 30 minuter kan färgförändringen efter reaktionen användas för att avgöra om en patogeninfektion är närvarande, med mer intuitiva resultat (positivt är orange-gult, negativt är magenta). Denna metod är lämplig för snabb testning av stora populationer.

Rekommenderade produkter:

RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit（13906ES）
RT-LAMP pH-känsligt färgämne kromogen version frystorkbart kit（13920ES）

Performance Showcase:

1.RT-LAMP/RPA mix Valguide

Produktklassificering	RT-LAMP mix			RPA-blandning
Produktnamn	RT-LAMP Dye Assay Kit (UDG plus)	RT-LAMP pH Sensitive Dyestuff Kit	RT-LAMP pH-känsligt färgämne kromogen version frystorkbart kit	Quick Fuse förstärkare
Produktens artikelnummer	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
Produktkategori	Fluorescerande färgämne	pH-känsligt färgämne	pH-känsligt färgämne	Sond
Produktkomponenter	2 komponenter Buffert, enzymblandning	3 komponenter Buffert, RT Enzyme, Bst Enzyme	4 komponenter Buffert、RT Enzyme、Bst Enzyme、Lyoprotektant	4 komponenter Buffert、Enzymmix、Magnesiumacetat
Stöd för frystorkning	Inga	Ja, utan lyoskyddsmedel	Ja, Innehåller Lyoprotectant	Inga

2.LAMP/RT-LAMP Enzymvalsguide

Produktklassificering	Bst-enzym		Omvänt transkriptas		UDG enzym
Produktnamn	Bst Plus	Lyofiliserad Bst Plus	Ⅲ Omvänt transkriptas	III omvänt transkriptas, Glycerolfri	UDG	UDG, Glycerolfri
Produktens artikelnummer	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
Enzymaktivitet	40 U/μL	60 U/μL	200 U/μL	600 U/μL	1 U/μL	1 U/μL
Produktkomponenter	3 komponenter	2 komponenter	2 komponenter	enkomponent	enda- komponent	enkomponent
Stöd för frystorkning	Inga	Ja	Inga	Ja	Inga	Ja

3、RPA-enzymvalsguide

Produktklassificering	Bsu	T4 X	T4 Y	SSB	CK	EXO
Produktnamn	Bsu	T4 UvsX	T4 UvsY	gp 32	Kreatinkinas	Exonukleas III
Produktens artikelnummer	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
Enzymaktivitet	5 U/μL	2 μg/μL	2 μg/μL	5 μg/μL	2 μg/μL	100 U/μL
Produktkomponenter	enkomponent	enkomponent	enkomponent	enkomponent	enkomponent	2 komponenter
Stöd för frystorkning	Inga	Inga	Inga	Inga	Inga	Inga