Aerosolkontamination i operativ miljö som den vanligaste orsaken till falska positiva resultat i PCR-resultat: Den banbrytande upptäckten av Uracil DNA Glycosylase (UDG) av den amerikanska forskaren Lindahl i E. coli och Bacillus subtilis, och upprättandet av ett PCR-kontaminationssystem genom användning av UDG-enzym.
De kommersiellt tillgängliga UDG-enzymerna består i första hand av två typer: de vanliga UDG-enzymerna härrörande från Escherichia coli och Bacillus subtilis, och de termolabila UDG-enzymerna som kommer från psykrofila marina bakterier. De vanliga UDG-enzymerna uppvisar större värmebeständighet och bibehåller en liten mängd uracil-DNA-glykosylasaktivitet även efter behandling vid 95°C i 10 minuter, vilket kan leda till nedbrytning av målförstärkningsprodukter som innehåller dU. Dessutom, på grund av användningen av konstruerade bakteriestammar (såsom E. coli) för rekombinant uttryck av molekylära enzymer, finns det en viss mängd återstående genomiskt värd-DNA i dessa enzymer. Tillsammans med påverkan från tillverkningsmiljön och mänskliga källor är molekylära enzymprodukter mycket känsliga för DNA-kontamination. Under upptäckten av patogener kan kontaminerande DNA antingen maskera målnukleinsyror med låg förekomst eller detekteras tillsammans med dem, vilket påverkar tolkningen av resultaten.
Yeasen UCF.ME Uracil DNA Glycosylas (UDG/UNG), värmelabilt
Beskrivning
UCF.ME Uracil DNA Glycosylas (UDG/UNG), värmelabilt, 1 U/μL (Cat#14466ES) härrörande från psykrofila marina bakterier, är det ett ultralågt värmelabilt UDG-enzym som kallas UCF.ME. Användningen av denna produkt kan förhindra att den kvarvarande aktiviteten hos konventionella UDG-enzymer efter inaktivering bryter ned dU-innehållande amplifieringsprodukter vid rumstemperatur. Det förhindrar också bakgrundsbakterier som finns i molekylära enzymer från att orsaka falska positiva resultat i PCR-resultat. Därför är introduktionen av UCF.ME® ultralågt kvarvarande termolabilt UDG-enzym avgörande för att exakt identifiera infektiösa patogener och hjälpa till med den kliniska diagnosen av infektioner och infektionssjukdomar.
Produktfördelar
- Ultralåg rest av UCF.ME—E. coli genomisk DNA-rest <0,1 kopior/U;
- Låg nukleasrest – Inget kvarvarande exonukleas, nicking-enzym eller RNas;
- Stark smältningsförmåga—0,05 U/T kan smälta 105 kopior/T dU-DNA-produkter;
- God termolabilitet—Fullständig inaktivering under alla förhållanden på 50°C i 10 minuter, 55°C i 5 minuter eller 95°C i 5 minuter;
- Kompatibel med RT-qPCR-reaktionssystem—Ingen påverkan på detektionssystemet även vid höga ingångsnivåer (2U/20μL reaktionssystem).
（1）Protein renhet≥95%
Figur 1. Resultat för detektering av proteinrenhet (SDS-PAGE).
（2）Låga restnukleaser: inga resterande exonukleaser, nicking-enzymer eller RNaser
Figur 2. Nukleasrester testresultat
（3）E. coli genomisk DNA-rest < 0,1 kopior/U, resthalterna var signifikant lägre än det konventionella reagenset
Figur 3. E.coli genomiska DNA-rester testresultat
Figur 4. Totalt 0,05 U UDG-enzym kunde fullständigt smälta 10^5 kopior/T dU-DNA-produkter.
Figur 5. Efter 50℃，10min；55℃，5min； 55℃，10min；95℃，5min värmeinaktiveringsbehandling förlorade 14466ES matsmältningsförmågan.
Figur 6. RT-qPCR-blandning framställdes genom att använda två primingsonder av ORF1ab- och N-generna och 14466ES. När 14466ES injicerades i reaktionssystemet i mängden 2U/20μL, fanns det ingen hämning av RT-qPCR reaktion.
Produktrekommendation — Ultra-Low Residual PCR Enzyme Raw Materials Series
| Produktpositionering | Produktnamn | Katt |
| Kontaminering-Förebyggande av värmelabila UDG | UCF.ME Uracil DNA Glycosylas (UDG/UNG), värmelabilt, 1 U/μL | 14466ES |
| Varmstart Taq DNA Polymerase | Hieff UCF.ME Hotstart Sensitive Taq DNA-polymeras (5 U/μL) | 14314ES |
| Omvänt transkriptas | Hifair UCF.ME V omvänt transkriptas (200 U/μL) | 14608ES |
| Murin RNas-inhibitor | 14672ES |