Proteinelektrofores är en proteinanalysteknik. Proteiner är negativt eller positivt laddade i en buffert och flyttar till anoden i ett elektriskt fält som kallas elektrofores. Olika proteinmolekyler har olika elektroforetisk rörlighet. En mycket viktig del av proteinelektrofores är gelberedning. Konventionell gelberedning tar ofta flera timmar, och det finns även problem som vätskeläckage, ojämn gel och luftbubblor. Förutom besväret med förberedelse kommer råmaterialreagensen också att ha viss toxicitet, vilket kommer att skada limdispenserns kropp, och utseendet på prefabricerat lim kan lösa dessa problem. Så vad är den grundläggande principen för proteinelektrofores, och vad är funktionen och principen för prefabricerade gel?

1. Vilken är grundprincipen för proteinelektrofores?
2. Vilken funktion och princip har prefabricerat lim?
3. Introduktion av prefabricerat lim från Yeasen
4. Vanliga frågor
5. Produktdetaljer

1. Vilken är grundprincipen för proteinelektrofores?

De flesta biologiska makromolekyler, såsom proteiner och nukleinsyror, har katjoniska och anjoniska grupper, som kallas zwitterjoner. Zonelektroforesmetoden där partiklarna är dispergerade i lösningen och stärkelsegelen, agar- eller agarosgelen, polyakrylamidgelen etc. som bärande medium kallas gelelektrofores. Polyakrylamidgelelektrofores är en elektroforesmetod där bäraren är en polyakrylamidgel. Man tror att storleken på porstorleken hos polyakrylamidgelen kontrolleras för att polymerisera, och proteinerna separeras genom verkan av en liknande molekylsikt.

Proteinelektrofores inkluderar två former, nativ polyakrylamidgelelektrofores (Native-PAGE) och natriumdodecylsulfat-polyakrylamidgelelektrofores (SDS-PAGE). Native-PAGE håller proteiner intakta under elektrofores och separerar dem i en gradient baserat på deras molekylvikt, form och medföljande laddning. Å andra sidan separerar SDS-PAGE proteiner enligt molekylvikten för deras underenheter. SDS är ett anjoniskt rengöringsmedel. Som ett denatureringsmedel och ett solubiliseringsmedel kan det bryta intramolekylära och intermolekylära vätebindningar, vika molekyler och förstöra de sekundära och tertiära strukturerna hos proteinmolekyler. Som ett starkt reduktionsmedel kan merkaptoetanol, ditiotreitol, bryta disulfidbindningarna mellan cysteinrester. Efter tillsats av reduktionsmedlet och SDS till provet och gelén depolymeriseras molekylerna till polypeptidkedjor och de depolymeriserade aminosyrasidokedjorna och SDS kombineras till protein-SDS-miceller. Den negativa laddningen av protein-SDS-miceller överstiger proteinets ursprungliga laddning, vilket eliminerar laddningsskillnaden och strukturskillnaden mellan olika molekyler. Rörligheten hos proteinet beror endast på proteinets molekylmassa, och proteinets molekylmassa kan bestämmas genom att jämföra den med en standard för känd molekylmassa.

2. Vilken funktion och princip har prefabricerat lim?

Jämfört med traditionella handgjutna geler, prefabricerade proteingeler kan undvika kontakt med ett stort antal giftiga reagenser, spara mycket tid och effektivt lösa problemet med stora skillnader i handgjutna geler.

Gelen består av två olika gellager, det övre lagret är en staplingsgel och det undre lagret är en separerande gel. Stacking gel är också känd som stapling gel.Gelkoncentrationen är relativt liten och porstorleken är relativt stor. Provet tillsätts till staplingsgelen och koncentreras i en smal zon genom migreringen av gelén med stor porstorlek. Separerande gel, även känd som elektroforesgel, har vanligtvis en liten porstorlek, och val av lämplig gelkoncentration kan göra provkomponenterna väl separerade.

Separerande geler kan delas in i fixerade geler och gradientgeler. Koncentrationen av polyakrylamid är 8%, 10%, 12%, 15%, 4% till 12% och 4% till 20%. De fyra första är prefabricerade geler med en fast koncentration, och de två sista är gradientgeler. Koncentrationerna representerar intervallet av isolerade proteinmolekylvikter. Gelgradienter bildas av gradientblandare. En högkoncentrerad akrylamidlösning tillsätts till glasplattan, och sedan minskar koncentrationen av lösningen i en gradient, och porstorleken på gelén är större upptill och mindre i botten. Den fixerande gelén kan bara separera proteiner inom sitt separationsområde, varken för stora eller för små. Gradientgeler har inte denna begränsning, där stora molekyler separeras i toppen och små molekyler separeras i botten. Eftersom porstorleken på gradientgelen gradvis blir mindre har den en koncentrerande effekt på proteinet nära porstorleken att proteinet inte kan penetrera, så en mycket smal zon kommer att bildas efter elektrofores. Proteiner med små skillnader i molekylvikt kan ofta inte separeras på fixerade geler utan kan lösas upp på gradientgeler.

3. Introduktion av prefabricerat lim från Yeasen

YEASEN Precast Protein Plus Gel innehåller gradientkoncentration och fast koncentration kan en mängd olika koncentrationer möta behoven för olika proteinelektrofores. Den framställs genom en unik gelberedningsprocess och har en utmärkt elektroforetisk effekt. Den är kompatibel med alla typer av elektroforestankar på marknaden (Bio-RAD, Tanon, Life, etc.) och har fördelarna med bred anpassningsförmåga, hög upplösning, hög stabilitet, tydliga och enhetliga band, etc.

3.1 YEASEN Precast Protein Plus Gel uppgradera till en plastskiva, bättre kvalitet!

Lätt att använda: redo att användas; Riv av den självhäftande tejpen från botten av plastskivan

Brett utbud av applikationer: kompatibel med denaturerat protein och naturligt protein

Klart band: specialbehandlingen av plastplattor minskar proteinadsorptionen avsevärt

Tidsbesparande: experimentet kan slutföras på 18 minuter snabbast

Kvalitetssäkring: strikt stabilitetssäkring mellan serier

Lång hållbarhet: kan förvaras vid 4 ℃ i 12 månader

3.2 Följande parametrar kan hjälpa dig att välja lämplig gelserie

Elektroforesbuffertsystem: denaturerad proteinrunningsbuffert eller naturlig proteinrunningsbuffert

Antal brunnar och provladdning: 10 eller 15 brunnar, den maximala provstorleken var 70 μL respektive 40 μL

gelkoncentration: 8%, 10%, 12%, 15%, 4%-12%, 4%-20%

Tabell 1.Gelkoncentration och linjär separationsområde

3.3 Data visar

Figur 1. Data visar

Figur 2. Data visar

4. Vanliga frågor

F1: Måste precasten gel placeras vid 4℃? Spelar det någon roll om du låter den stå i rumstemperatur ett tag?

A: Rekommenderad 4℃, kan lagras i 12 månader. Förvara inte under 0 ℃, kan förvaras i rumstemperatur (25 ℃) i 30 dagar.

F2: Hur väljer man mellan gradientkoncentration och fast koncentration? Vad är den minsta molekylvikten för protein separerat av prefabricerade gel?

S: Storleken på proteinseparationen av prefabriceringen gel är relaterad till dess koncentration, och motsvarande separationsintervall visas i figuren ovan.

Fast koncentration prefabricerad gel har bättre upplösning. Gradientkoncentration prefabricerad gel har ett bredare separationsområde och ett bredare användningsområde; Kunder bör välja lämplig koncentration efter sina egna behov.

Vår 4%-20% gradient förtillverkade gel (Katt#36250, Katt#36256) har ett brett separationsintervall för proteiner så låga som 3,5 kDa.

Figur 3. Prefabricerad gradient geldata

F3: Gör precasten gel måste vara utrustad med din speciella buffert? Kan du göra din buffert?

S: YEASEN specialbuffert (Cat#36236, Cat#36237) och prefabricerad geltillämpbarheten är bättre. Blanda inte med andra buffertar. Bufferten kan beredas genom att köpa reagens, men kunder behöver använda vår formel, som finns i den relevanta precasten gel instruktioner.

F4: Hur man skiljer mellan separerande gel och koncentrerad gel? Är det nödvändigt för sektionsspänningselektrofores?

S: De två komponenterna är desamma, men koncentrationen är inte densamma, det blotta ögat kan inte skilja; Höjden på koncentrerat lim är 1,5 cm.

Nej, elektrofores vid 150 V rekommenderas, och det krävs 30-40 minuter för att slutföra experimentet.

F5: Är din precast gel lämplig för alla typer av elektroforestankar på marknaden?

A: Ja, vår precast gel är lämplig för alla typer av elektroforestankar på marknaden,

Bio-rad Mini-Protean (II/3 /Tetra System) och Tanon VE180 (Observera den omvända monteringen av tätningsremsan);

Life Technology Novex Mini-cell (används med speciell baffel);

Annan gelplatta bredd i 10 cm elektroforestank.

5. Produktdetaljer

Produkterna som tillhandahålls av Yeasen är följande:

Tabell 2.Produktdetaljer