— Lys upp ditt blot-membran, till hands!
ECL-reagens, kända som kemiluminiscerande substrat för pepparrotsperoxidas (HRP), är för närvarande de mest känsliga reagensen som används vid Western blotting-detektion. Vanliga problem med ECL-reagenser på marknaden inkluderar släckning, hög bakgrund, instabilitet och svårigheter att upptäcka proteiner med låg förekomst, vilket kan påverka de slutliga experimentella resultaten.
Yeasen Biotech har samlat framstående vetenskapliga forskare inom området immunodetektion. Genom att strikt kontrollera kvaliteten på luminolråmaterial och kontinuerligt förbättra formuleringen av förstärkare och stabilisatorer, har vi utvecklat fyra typer av ECL-reagenser för att möta behoven i olika experiment. Dessa inkluderar förbättrade, ultrakänsliga, hållbara och ultrahögkänsliga produkter. De uppfyller inte bara detektionskraven för målproteiner från låg till hög förekomst utan förbättrar också luminescensintensiteten utan att påverka experimentet, vilket resulterar i tydligare bilder.
Produktegenskaper
- Fantastisk känslighet — Detektion av antigener från pikogram till låga femtogramnivåer.
- Högre signal-brus-förhållande — Exakta självlysande substrat minskar bakgrundsljudet.
- Mer antikroppseffektiv — Optimerade substratsystem för högre antikroppsbindningsaffinitet.
- Högt kostnads-prestandaförhållande — Högre prestanda till ett lägre pris.
- Utmärkt stabilitet — Nya oxidanter säkerställer stabil lagring vid 4°C i upp till ett år.
Produktprincip
Kärnprincipen för ECL-reagensdetektering är luminescensen från oxidationsreaktioner: Luminol, huvudkomponenten i det luminescerande substratet, oxideras av H2O2 under alkaliska förhållanden genom katalys av pepparrotsperoxidas (HRP), vilket bildar en exciterad mellanprodukt av 3-aminoftalsyra. När den återgår till grundtillståndet emitteras fotoner, med en maximal emissionsvåglängd på 425 nm. Dessa fotonsignaler kan fångas av röntgenfilm eller CCD-avbildningsenheter.
Urvalsguide
Yeasen erbjuder för närvarande fyra typer av ECL-produkter, var och en med sina unika egenskaper, för att till fullo möta behoven hos användarnas immunblottingapplikationer.
Så vilken produkt ska du välja för ditt experiment?
Tabell 1.ECL Reagensvalsguide
| Yeasen | Förbättrad ECL Förbättrad typ | Super ECL Ultrakänslig typ | SuperDura Hållbar typ | MaxiSignal Typ med ultrahög känslighet |
| Tillämpliga prover | Mål med hög överflöd, rutinmässiga proteinprover | Mål med låg förekomst, begränsade prover | Mål med låg förekomst, begränsade prover | Mål med extremt låg förekomst, värdefulla prover |
| Detektionskänslighet | Medium pikogramnivå | Låg pikogramnivå | Medium femtogramnivå | Låg femtogramnivå |
| Signallängd | < 2 timmar | < 12 timmar | < 24 timmar | < 8 timmar |
| Tillämpligt detektionssystem | Alla reagenser är lämpliga för röntgenfilm, CCD-avbildningsenheter | |||
| Koncentration av primär antikroppsutspädning | 1:1000-1:4000 | 1:1000-1:10,000 | 1:1000-1:50,000 | 1:5000-1:100,000 |
| Sekundär antikroppsutspädningskoncentration | 1:1000-1:4000 | 1:2000-1:10,000
| 1:50 000-1:250 000 | 1:100 000-1:500 000 |
| Rekommenderat membran | NC membran | NC-membran eller PVDF-membran | NC-membran eller PVDF-membran | NC-membran eller PVDF-membran |
| Lagringsstabilitet | Rumstemperatur i 1 år | 4°C i 1 år, rumstemperatur i ett halvår | ||
| Fördelar | Den starkaste signalen med samma känslighetsnivå | Högsta kostnad-prestanda-förhållande, lämplig för de flesta WB-experiment | Längsta signallängd, extremt lämplig för flera exponeringar | Utmärkt känslighet, extremt lämplig för spårproteindetektion |
Obs: Den rekommenderade utspädningskoncentrationen av antikroppar är baserad på en stamkoncentration av antikroppar på 1 mg/ml.
Produktapplikation
Yeasen ECL-reagenser har bättre användningseffekter jämfört med andra märkens produkter på samma nivå.
Figur 1. Jämförelse av detektionseffekter mellan Yeasen ECL Ultra-Sensitive Substrate Super och varumärke Ts ekvivalenta substrat Pico.
Figur 2. Jämförelse av detektionseffekter mellan Yeasen ECL Ultra-High Sensitivity Substrate MaxiSignal och andra märkens ekvivalenta substrat West Femto.
Figur 3.Jämförelse av detektionseffekter mellan Yeasen ECL Durable Substrate SuperDura och andra märkens motsvarande substrat West Dura.
Publicerat Litteratur
[1]Wang Z, Lu Z, Lin S, et al. Leucin-tRNA-syntas-2-uttryckande B-celler bidrar till immunoevasion av kolorektal cancer. Immunitet. 2022;55(6):1067-1081.e8. doi:10.1016/j.immuni.2022.04.017(IF:43.474)
[2] Wu Z , Liu D , Pan D , et al.Structure and engineering of miniatureAcidibacillus sulfuroxidansCas12f1[J].Nature Catalysis, 2023, 6(8):695-709.DOI:10.1038/s41929-0283-409:953-40IF:
[3] Yao J, Wu D, Zhang C, et al. Makrofagen IRX3 främjar dietinducerad fetma och metabolisk inflammation. Nat Immunol. 2021;22(10):1268-1279. doi:10.1038/s41590-021-01023-y (IF:25.606)
[4] He X, Li J, Zhou G, et al. Gating av hippocampus rytmer och minne genom synaptisk plasticitet i hämmande interneuroner. Neuron. 2021;109(6):1013-1028.e9. doi:10.1016/j.neuron.2021.01.014(IF:17.173)
Prisfördel
Bild 7.Prisjämförelse av Yeasen ECL-produkter med andra märkens produkter på samma nivå
Vanliga frågor
| Problem som uppstått | Orsaksanalys | Rekommenderade lösningar |
| Filmen har omvända bilder | Filmen har omvända bilder | Filmen har omvända bilder |
| Filmen har bruna eller gula band | ||
| Fluorescenssläckning | Drifttiden är för lång, membranet torkar gradvis | Förhindra att membranet torkar ut |
| Kontaminering av plastfolie, framkallare eller fixeringsmedel | Utveckla goda experimentella vanor | |
| Otillräckligt HRP i reaktionssystemet | Öka HRP-märkt material | |
| Inga band eller svag signal på filmen | Låg överföringseffektivitet | Förbättra överföringseffektiviteten, använd förfärgad markör för bedömning |
| Otillräckligt eller felmatchat antigen/antikropp | Öka mängden antigen/antikropp eller välj lämplig antigen/antikropp | |
| Problem med röntgenfilm | Om röntgenfilmen är helt svart (inte genomskinlig) efter exponering, indikerar det att filmen är helt exponerad; använda en ny röntgenfilm | |
| Problem med utvecklare/fixare | Förexponera en film för att kontrollera; om det finns problem, ersätt med ny utvecklare/fixer | |
| Överdriven HRP i reaktionssystemet | Späd HRP-märkt material | |
| Hög bakgrund | Primära och sekundära antikroppskoncentrationer för höga | Minska antikroppskoncentrationen, förläng blockeringstiden |
| Antikroppar inte rengjorda noggrant | Öka antalet tvättar | |
| Ofullständig blockering | Optimera blockeringsförhållanden | |
| Fel blockeringsmedel används | Använd ett annat blockeringsmedel | |
| Överexponering | Minska exponeringstiden | |
| Dålig antikroppsspecificitet | Ersätt med högkvalitativa antikroppar | |
| För mycket HRP i reaktionssystemet | Späd ut HRP-märkt material | |
| Band med tomma fläckar | Hög koncentration av antigen och sekundär antikropp | Späd provet och kör gelén igen, eller kyl den blandade kromogena lösningen och applicera den på membranet för omedelbar snabb utveckling. |
| Oregelbunden bandform | Luftbubblor under överföring eller ojämn hydrering med metanol (för PVDF-membran) | Optimera överföringsförhållandena. |
| Filmfläckar | Aggregat av HRP-märkt material | Filtrera HRP-märkt material med ett 0,2 μm membran |
| Ospecifika band | Överdriven HRP i reaktionssystemet | Späd HRP-märkt material |
| SDS som orsakar ospecifik proteinbindning | Använd inte säkerhetsdatablad i den experimentella proceduren | |
| Dålig antikroppsspecificitet | Ersätt med högkvalitativa antikroppar | |
| Otillräcklig blockering | Öka blockeringstiden eller använd ett annat blockeringsmedel |
Beställningsinformation
| Produktnamn | Produktnummer | Specifikation |
| Super ECL-detektionsreagens | 36208ES60/76 | 100 ml/50 ml |
| Enhanced ECL Chemiluminescent Substrate Kit | 36222ES60/76 | 100 ml/500 ml |
| SuperSignal SuperDura Extended Duration Substrat | 36223ES10/60/70/76 | 10 mL/100 mL/200 mL/500 mL |
| SuperSignal MaxiSignal Maximal Sensitivity Substrat | 36224ES10/60/70/76 | 10 mL/100 mL/200 mL/500 mL |