För att ge fler behandlingsalternativ för diabetespatienter uppstod några nya diabetesläkemedel i början av 2000-talet, såsom glukagonliknande peptid-1 (GLP-1) analoger. Semaglutid, som ett av de representativa läkemedlen för GLP-1-analoger, har i flera kliniska prövningar visat sig effektivt kontrollera blodsockret i kombination med olika orala hypoglykemiska läkemedel, och kan hjälpa patienter att gå ner i vikt, minska systoliskt tryck och förbättra bukspottkörtelns β-cellfunktion. Dess tre formuleringar (hypoglykemisk injektion Ozempic, oral hypoglykemisk medicin Rybelsus och viktminskningsinjektion Wegovy) översteg 20 miljarder USD i försäljning 2023. På grund av dess enastående prestanda i blodsockerminskning och viktminskning, branschen förväntar sig att Semaglutide kommer att bibehålla ett starkt försäljningsmomentum under en tid, vilket lockar många företag att konkurrera om layout!
Huvudkedjestrukturen för Semaglutid är en 29-aminosyror intermediär polypeptid Arg34GLP-1(9-37) eller en 27-aminosyror intermediär polypeptid Arg34GLP-1(11-37). Produktionen och tillverkningen av denna intermediära polypeptid inkluderar huvudsakligen kemisk syntes och biopreparationsmetoder. Jämfört med kemisk syntes har bioberedningen brutit igenom kapacitetsflaskhalsen och är mer lämplig för storskalig kontinuerlig produktion, vilket ytterligare kan minska produktionskostnaderna och ge mer betydande ekonomiska fördelar.
Tabell 1. Exempel på biopreparationsmetoder för semaglutid-intermediära polypeptider
| Biopreparationsmetod (Exempel 1)
| Biopreparationsmetod (Exempel 2)
| |
| Gensyntes | Syntetisera en fusionsproteinsekvens, inklusive en fusionspeptid, enterokinasklyvningsställe och målhuvudmolekylsekvensen | Syntetisera en tandemexpressionssekvens med GLP-1(9-37)-gensekvensen |
| Engineering Bakteriekonstruktion | Inför i E. coli för att konstruera rekombinanta manipulerade bakterier | Inför i E. coli för att konstruera rekombinanta manipulerade bakterier |
| Fusionsproteinuttryck | Genom att optimera fusionspeptidsekvensen, ändra den isoelektriska punkten och hydrofilicitet för proteinet, etc., ökas uttrycket av fusionsproteinet effektivt.
| Efter induktion av högdensitetsjäsning erhålls ett tandemexpressionsinklusionskroppsprotein som uttrycker GLP-1(9-37), och återveckningen ger ett lösligt protein |
| Mellanliggande peptidförvärv | Efter att fusionsproteinet har genomgått enterokinasklyvning, rening och andra steg kan semaglutid-intermediärpolypeptiden Arg34GLP-1(9-37) erhållas | Det lösliga proteinet kan erhållas efter att ha genomgått tvåstegs enzymklyvning med Kex2-enzym och karboxipeptidas B, och reningssteg, för att erhålla semaglutid-intermediärpolypeptiden GLP-1(9-37) |
Enterokinas eller Kex2-enzym kombinerat med karboxipeptidas B är ett nyckelenzym för den huvudsakliga peptidkedjan av Semaglutid (biopreparationsmetod), och enzymskärningseffekten och kostnaden är avgörande för produktionen.Yisheng Biology har åtagit sig att tillhandahålla stabila enzymråvaror för läkemedelsföretag, erbjuda högkvalitativa enzymer och kompletta kvalitetskontrollstandarder för att hjälpa kunder att förbättra produktionskapaciteten och batchstabiliteten, minska kostnaderna och snabbt komma in marknaden.
Yeasen totallösning för Semaglutid
1.Rekombinant enterokinas
Rekombinant enterokinas (rEK) är en subenhet för lätt kedja av enterokinas från nötkreatur med hög renhet, som har samma specifika skärande enzymaktivitet som naturligt extraherat enterokinas, med ett skärställe av Asp-Asp-Asp-Asp-Lys, som kan ta bort fusionsproteinet som ligger vid proteinets N-terminal för att ta bort onödiga fusionstaggar som ofta används för N-terminala fusionstaggar, och är en fusions-terminal. Den har en låg nivå av oregelbunden skärning på andra rester.
Yisheng erbjuder för närvarande rekombinanta enterokinaser från olika källor, olika kvaliteter och med His-taggar eller inte för kunder att välja mellan.
Yeasen rekombinant Bovin Enterokinas, His, uttryckt i jäst är ett högrenhet, högaktivitet och mycket specifikt bovint enterokinas uttryckt av Pichia pastoris-sekretion. Det kan effektivt klyva fusionsproteiner inom ett brett pH-intervall (4,5-9,5) och ett brett temperaturintervall, och har fortfarande partiell aktivitet under olika detergenter och denatureringsmedel. Denna produkt har en His-tagg, som enkelt kan tas bort genom Ni2+ affinitetskolonn efter skärningsreaktionen, vilket avsevärt förenklar den efterföljande reningsprocessen.
Drag
Hög specificitet: Ett specifikt proteas som skär vid karboxyländen av lysin innehållande fyra asparaginsyror: Asp-Asp-Asp-Asp-Lys;
Hög renhet: Inga andra proteaser, ingen ospecifik skärning;
Inget animaliskt ursprung: Rekombinant produktion, ingen exogen viral kontaminering, ingen användning av några animaliska råvaror i produktionsprocessen;
Stabil kvalitet: Batchproduktion kan säkerställa stabil och kontinuerlig batchproduktion; inga parti-till-batch-skillnader, stabil kvalitet;
Tillräcklig kapacitet: 500L fermentor kan få ~50 MU enterokinas, Yeasen har 5L-1500L olika systemfermentorer för att möta olika kundkrav i olika stadier för produktsatskrav;
Produktförsörjning av olika kvalitet: FoU-klass (20395ES), GMP-klass (20396ES), GMP-klassade produkter uppfyller ISO 13485 kvalitetsledningssystem.
Testdata
Enterokinasaktivitetstest:
Figur 1. Den enzymskärande effekten av Yeasen enterokinas (20395ES) överensstämmer med Konkurrent N
Notera: Det positiva substratet (20391ES) är ett fusionsprotein som består av två specifika proteinsekvenser sammankopplade med DDDDK (enterokinasigenkänning och skärningsställe), med en total molekylvikt på cirka 64,6 kDa, som specifikt kan skäras i två oberoende proteinfragment av enterokinas, med molekylvikter på cirka 9 kD.6aDa resp. Denna produkt, som ett enterokinassubstrat, kan användas för semikvantitativ eller kvalitativ enzymaktivitetsdetektion av rekombinant eller naturligt enterokinas.
Enterokinas renhetstest:
Notera: Det teoretiska värdet för enterokinas är 22,7 kDa. På grund av glykosyleringseffekten efter uttryck i Pichia pastoris visar SDS-PAGE att molekylvikten för målproteinet är cirka 40 kDa. I allmänhet kommer de glykosylerade banden att ha ett något diffust band som löper uppåt (som visas i den högra figuren). Vårt företag kan också tillhandahålla deglykosyleringsenzym Endo H (Cat#20414) för kunder att deglykosylera och köra gel för att mäta renhet (som visas i den vänstra bilden).
Enterokinasskärningsspecificitetstest:
Figur 3. Yeasen enterokinas (20395ES) har mindre ospecifik skärning än importkonkurrent N
Obs: Under samma förhållanden, Yeasen enterokinas (20395ES) och importkonkurrenten N:s enterokinas användes för enzymskärningstester. Resultaten visar att efter rening, de ospecifika skärande föroreningar som produceras av Yeasen enterokinas (20395ES) är betydligt lägre än importkonkurrenten N.
Enterokinas upprepad frys-upptining, accelererat stabilitetstest:
Figur 4. Yeasen enterokinas (20395ES) upprepade frys-upptining, accelererat stabilitetstest visar att enzymaktiviteten inte förändrades signifikant.
Obs: Yeasen enterokinas (20395ES) valde slumpmässigt ut 2 satser, upprepad frysning-tining 10 gånger, 20 gånger, enzymaktiviteten förändrades inte signifikant från den initiala enzymaktiviteten.
Förvaring vid 25°C i 7, 16, 32 dagar, 37°C i 7, 14 dagar, enzymaktiviteten förändrades inte signifikant från den initiala enzymaktiviteten.
2. Rekombinant Kex2-enzym, karboxipeptidas B
Tabell 2. Yeasen Recombinant Kex2 Enzyme, Carboxypeptidase B Product Selection Guide
| Produktnummer | 20418ES | 20417ES |
| Produkt Namn | Rekombinant Kex2-proteas, uttryckt i jäst
| Rekombinant CPB, uttryckt i E.coli
|
| Produktklass | GMP betyg | GMP betyg |
| Källa | Rekombinant uttryck från Pichia pastoris | Rekombinant uttryck från E. coli |
| Aktivitet | ≥10,0 enheter/mg pro
| ≥170 USP-enheter/mg pro
|
| Klyvningsplats | Känner specifikt igen och klyver peptidbindningar vid karboxylsyraterminalen av dibasiska aminosyror såsom Arg-Arg, Lys-Arg | Hydrolyserar specifikt proteiner vid den aminoterminala sidan av basiska aminosyror (lysin, arginin, histidin) vid C-terminalen |
| Produktapplikation | 1. Process enzymklyvning i peptidläkemedelsproduktion. 2. Enzymatisk nedbrytning av proteiner och peptidkartläggning, sekvensering m.m. | 1. Produktion av rekombinant insulin och dess analoger. 2.Bestämning av aminosyror vid C-terminalen av proteiner. 3. Avlägsnande av histidintaggar vid C-terminalen av proteiner. 4. Produktion av andra rekombinanta peptidsubstanser. 5. Enzymatisk syntes av vissa speciella föreningar. |
Kex2-enzym kombinerat med karboxipeptidas B: Tandemexpressionsprocesskrav, högt utbyte av semaglutid-mellanprodukt efter enzymskärning
Ylätta GMP Grade Enzyme Production Base
ISO-certifierad Ultra-Clean Molecular Enzyme Production Base - UCF.ME, utrustad med AKTA-renings- och fysikalisk-kemisk analysutrustning av industriell kvalitet, hundra-liters högdensitetsjäsningsenheter, rena verkstäder i tiotusenklass och automatiserade produktionslinjer. Det har jäsnings- och reningssystem med olika specifikationer, inklusive 5L, 10L, 30L, 100L, 500L och 1500L, med förmågan att skala upp produktionen från 5L till 1500L inom området för molekylär enzymindustrialisering, till fullo tillgodoseende av kärnstadierna, såsom kunders behov av forskning och utveckling av enzymer i efterföljande skala och i pilotskala av råvaror, enzymutveckling, storskalig produktion.
Yeasen har ett starkt FoU-team och en avancerad enzymproduktionsbas, som kontinuerligt förbättrar kvaliteten och kapaciteten hos nyckelenzymer för semaglutidproduktion (rekombinant enterokinas) genom kontinuerlig teknisk innovation och optimering, och erbjuder gradientprissättning för olika specifikationer för att möta kundernas olika behov i olika produktionsstadier.
Information om kampanjprodukter
| Produktnamn | Produktnummer | Specifikation | Listpris ($） | PR Pris ($） |
| 20395ES60/76/90/ 92/94 | 100 U/500 U/ 5000 U/ 100 KU/ 1 MU(1000 KU) | 45/115/ 825/ 12000/ 360 000 | 45/115/ 585/ 5600/ 19600 |
Relaterad produktinformation
| Produktnamn | Produktnummer | Specifikation |
| 20391ES03/11 | 1 mg/4 mg | |
| Rekombinant Kex2-proteas, uttryckt i jäst | 20418ES60 | 100 μg |
| 20417ES03/10 | 1 mg/10 mg | |
| 20414ES92/97 | 10 000 U/50 000 U |