Bakgrundsbeskrivning
Proteinrening är processen att isolera målproteinet från de totala proteinerna i det experimentella provet samtidigt som målproteinets biologiska aktivitet och kemiska integritet bibehålls. Under konstruktionen av vektorer är det, förutom några nödvändiga uttryckselement, också nödvändigt att överväga kodonoptimering och valet av taggar. Att välja rätt tagg är inte bara fördelaktigt för proteinrening och främjande av proteinlöslighet utan bör inte heller påverka strukturen och funktionen hos proteinet och nedströmsapplikationer. Det här avsnittet fokuserar på att introducera His och GST-taggar.
Tabell 1. His och GST Tag Introduktion
| Märka | Storlek kDa | Sekvens | Renhet | Löslighet | Tag borttagning | Tag Cleavage Enzyme |
| Hans | ~0,84 | HHHHHH | + | + | Ej obligatoriskt | TEV proteas
|
| moms | 26 | Består av 211 aminosyror | ++ | ++ | Nödvändig | 3C Protease/PSP |
His Tag Protein Affinity Purification
HisSep Ni-NTA Agarose Resin är baserat på starkt tvärbunden agarosgel som matris, kemiskt kopplad med tetrakoordinerad nitrilotriättiksyra (NTA) som ligand, och efter kelatbildning av nickeljoner (Ni)2+), bildar den en mycket stabil oktaedrisk struktur med nickeljoner i mitten av oktaedern. Denna struktur kan skydda nickeljoner från attacker av små molekyler. Jämfört med Ni-IDA-harts är det mer stabilt och tål vissa koncentrationer av reduktionsmedel, denatureringsmedel eller kopplingsmedel under svåra förhållanden. Jämfört med Ni-TED-harts har det en större adsorptionskapacitet för målproteiner. Det har blivit ett av de oumbärliga hartserna för att rena His-märkta proteiner i laboratorier.
Figur 1. Produktprincipdiagrammet för His harts.
Tabell 2. Yeasen Hans urvalsguide för reningsprodukter
| Produktnummer | 20502ES | 20503ES | 20504ES/20505ES | 20561ES |
| Produktnamn | HisSep Ni-NTA Agarose Resin | HisSep Ni-NTA Agarose Resin 6FF | HisSep Ni-NTA 6FF kromatografikolonn, 5 mL / 1 mL | HisSep Ni-NTA MagBeads |
| Matris | Tvärbunden 6% Agarose Gel | Mycket tvärbunden 6% Agarose Gel | Mycket tvärbunden 6% Agarose Gel | Magnetiska agarosmikrosfärer |
| Tryckmotstånd | 0,1 MPa, 1 bar | 0,3 MPa, 3 bar | 0.3 MPa, 3 bar | N/A |
| Kapacitet | ＞40 mg 6×His-märkt protein/ml matris | ＞40 mg 6×His-märkt protein/ml matris | > 40 mg 6×His-märkta protein/mL magnetiska pärlor | |
| Reningsförslag | Matris med medeltryckmotstånd, lämplig för inkubationsmetod, gravitationskolonn småskalig rening | Matris med högtrycksbeständighet, kan användas för industriell storskalig proteinrening med proteinreningsinstrument | Snabb och bekväm proteinrening genom magnetisk separation | |
| Tolerans | 8 M urea, 6 M saltsyra, 0,5-1 mM DTT, 1 mM EDTA, etc. | |||
| Ansökan | His-märkt proteinrening är förstahandsvalet, hög belastning, genomsnittlig tolerans, speciellt lämplig för reningssystem för prokaryota uttryck | |||
Bilaga: HisSep Ni-NTA MagBeads (Cat#20561ES) Produktegenskaper
- Jämfört med traditionella förpackade kolonner och hartser finns det inget behov av multipel centrifugering av prover och kontroll av provflödet, vilket kraftigt minskar reningstiden.
- Enstegsrening kan uppnå en renhet på mer än 95 % av målproteinet.
- Högt målproteinutbyte: utbytet kan nå 70-80%.
- Kan återanvändas upp till 5 gånger.
- Lätt att justera koncentrationen och volymen av målproteinet.
- Liten proteinförlust och ingen risk för proteindenaturering eller utfällning.
GST Tag Protein Affinity Purification Media
GST-tag-proteinaffinitetskromatografi använder den kovalenta affiniteten mellan GST-fusionsprotein och fixerad glutation (GSH) genom svavelbindningar, och renar baserat på principen om GSH-utbyteseluering. I denna rening kombineras en glutation med gelens arm genom en svavelbindning, och sedan används den specifika verkanskraften mellan glutation och glutation S-transferas (dvs GST-taggen) för att få det GST-märkta fusionsproteinet att kombineras med armens glutation på gelén, och därigenom separera det märkta proteinet från andra proteiner. Glutation har vanligtvis oxiderad form GSSG och reducerad form GSH. När vi använder GSH-eluering kommer GSH att konkurrera med gelens glutation för att kombineras med fusionsproteinet och därigenom eluera målproteinet.
GSTSep Glutathione Agarose Resin är ett GST-tag-proteinreningsharts, strukturellt tillverkat genom att kemiskt kovalent kombinera reducerat glutation med 6% agarosgel som matris genom en 12-atoms arm. Denna design har avsevärt förbättrat reningseffektiviteten för hartset, vilket gör att det kan bära mer än 20 mg GST-fusionsprotein per milliliter medium. Produkten har god specificitet och kostnadsprestanda och kan användas för att rena olika glutation S-transferaser, glutationberoende proteiner och glutationrekombinanta derivat i ett steg.
Tabell 3. Yeasen GST Purification Product Selection Guide
| Produktnummer | 20507ES | 20508ES | 20509ES/20510ES | 20562ES |
| Produktnamn | GSTSep Glutation Agarose Resin | GSTSep Glutation Agarose Resin 4FF | GSTSep Glutation 4FF kromatografikolonn, 1 mL / 5 mL | GSTSep Glutation MagBeads |
| Matris | Tvärbunden 6% Agarose Gel | Mycket tvärbunden 4% Agarose Gel | Mycket tvärbunden 4% Agarose Gel | Magnetiska agarosmikrosfärer |
| Tryckmotstånd | 0,1 MPa, 1 bar | 0,3 MPa, 3 bar | 0,3 MPa, 3 bar | N/A |
| Kapacitet | >20 mg GST-protein (40 kDa)/ml matris | >10 mg GST-protein (40 kDa)/ml matris | 5-10 mg GST-tag fusionsprotein/ml magnetiska pärlor | |
| Ansökan | Hög belastning, Matrix med medeltryckmotstånd, lämplig för inkubationsmetod, gravitationskolonn småskalig rening, rekommenderas för kunder i laboratorieskala | Användning Låg belastning, hög matristryckmotstånd, kan användas för industriell storskalig proteinrening med proteinreningsinstrument, lättare att skala upp | Lägsta belastning, snabb och bekväm proteinrening genom magnetisk separation | |
Bilaga: GSTSep Glutathione MagBeads (Cat#20562ES) Produktegenskaper
- Rena målproteiner med hög renhet direkt från biologiska prover genom magnetisk separation i ett steg, vilket avsevärt förenklar reningsprocessen och förbättrar reningseffektiviteten, lämplig för bekväm GST-fusionsproteinrening inom vetenskaplig forskning och industriella områden.
- Genom att använda denna magnetiska pärla för GST Pull-down-experiment, eftersom magnetisk separation inte kräver flera centrifugering och långa inkubationstider, är operationen enklare, snabbare och mer automatiserad jämfört med traditionella kromatografimetoder.
Produktinformation
| Produktpositionering | Produktnamn | Produktnummer | Specifikation |
| His Tag Protein Purification | HisSep Ni-NTA Agarose Harts | 20502ES10/50/60 | 10 ml/50 ml/100 ml |
| HisSep Ni-NTA Agarose Harts 6FF | 20503ES10/50/60 | 10 ml/50 ml/100 ml | |
| HisSep Ni-NTA 6FF kromatografikolonn, 5 ml | 20504ES08/25 | 5 mL/5x5 mL | |
| HisSep Ni-NTA 6FF kromatografikolonn, 1 ml | 20505ES03/08 | 1 mL/5x1 mL | |
| HisSep Ni-NTA MagBeads | 20561ES08/25 | 5 ml/25 ml | |
| GST Tag-proteinrening | GSTSep Glutation Agarose Resin | 20507ES10/50/60 | 10 ml/50 ml/100 ml |
| GSTSep Glutation Agarose Resin 4FF | 20508ES10/50/60 | 10 ml/50 ml/100 ml | |
| GSTSep Glutathione 4FF kromatografikolonn, 1 ml | 20509ES03/08 | 1 mL/5x1 mL | |
| GSTSep Glutathione 4FF kromatografikolonn, 5 ml | 20510ES08/25 | 5 mL/5x5 mL | |
| GSTSep Glutathione MagBeads | 20561ES08/25 | 5 ml/25 ml |