การแนะนำ
ชุดทดสอบยีนรายงานลูซิเฟอเรสเป็นเครื่องมือหลักที่ขาดไม่ได้ในการพัฒนายา มีบทบาทสำคัญในกระบวนการสำคัญ เช่น การคัดกรองปริมาณมาก การประเมินประสิทธิภาพ และการตรวจสอบเป้าหมาย เนื่องจากชุดทดสอบนี้สามารถตรวจสอบการแสดงออกของยีนและการถ่ายทอดสัญญาณแบบเรียลไทม์ การประยุกต์ใช้เทคโนโลยีนี้ช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพการคัดกรองและการประเมินยาอย่างมีนัยสำคัญ ช่วยเร่งการค้นพบและพัฒนายาใหม่ๆ
หลักการตรวจจับยีนรายงานลูซิเฟอเรส
เทคโนโลยีการตรวจจับยีนรายงานลูซิเฟอเรสช่วยให้สามารถวิเคราะห์เชิงปริมาณของกิจกรรมลูซิเฟอเรสของหิ่งห้อยได้โดยเร่งปฏิกิริยาออกซิเดชันของลูซิเฟอรินเป็นออกซิลูซิเฟอรินและสร้างการเรืองแสง เทคโนโลยีนี้มีมูลค่าการนำไปใช้ที่สำคัญในด้านการตรวจสอบยีนเป้าหมายของไมโครอาร์เอ็นเอและการควบคุมกิจกรรมการถอดรหัสของโปรโมเตอร์ โดยการแทรกองค์ประกอบควบคุมของยีนเป้าหมายที่อยู่เหนือและใต้ยีนลูซิเฟอเรสเพื่อสร้างพลาสมิดรายงานลูซิเฟอเรส เซลล์สามารถถ่ายโอนยีนและรับการกระตุ้นหรือการบำบัดที่เกี่ยวข้องได้ จากนั้น โดยการสลายเซลล์และการวัดกิจกรรมของลูซิเฟอเรส การเปลี่ยนแปลงกิจกรรมขององค์ประกอบควบคุมภายใต้เงื่อนไขการกระตุ้นที่แตกต่างกันสามารถประเมินได้ จึงทำให้เข้าใจกลไกการควบคุมของยีนได้ลึกซึ้งยิ่งขึ้น การแสดงออก.
ความแตกต่างระหว่างการใช้งานการตรวจจับลูซิเฟอเรสแบบเดี่ยวและแบบคู่
การทดสอบยีนรายงานแบ่งออกเป็นการทดสอบยีนรายงานลูซิเฟอเรสเดี่ยวและการทดสอบยีนรายงานลูซิเฟอเรสคู่ ในการใช้งานเฉพาะ คุณจะพิจารณาได้อย่างไรว่าการทดลองใช้ระบบตรวจจับลูซิเฟอเรสเดี่ยวหรือลูซิเฟอเรสคู่ มาดูความแตกต่างกัน
ระบบทดสอบรายงานลูซิเฟอเรสเดี่ยว
จำนวนยีนรายงาน: ยีนรายงานหิ่งห้อยลูซิเฟอเรสตัวเดียว
ประเภทการถ่ายโอนยีน: พลาสมิดยีนรายงานตัวเดียว หลังการถ่ายยีน การคัดเลือกยาจะถูกใช้เพื่อสร้างสายเซลล์ยีนรายงานที่มีเสถียรภาพที่แสดงลูซิเฟอเรส
กระบวนการตรวจจับ: เพียงแค่ตรวจจับสัญญาณหิ่งห้อยลูซิเฟอเรสก็เพียงพอแล้ว การทำงานง่าย ระยะเวลาตรวจจับสั้น เหมาะสำหรับการคัดกรองยาปริมาณมาก
การวิเคราะห์สถานการณ์การใช้งาน: โดยปกติแล้วจะทำผ่านการสร้างสายเซลล์โมโนโคลนัลที่มีการแสดงออกเกินที่เสถียร เนื่องจากระดับการแสดงออกของสายเซลล์เหล่านี้ค่อนข้างเสถียรและสม่ำเสมอ โดยไม่มีอิทธิพลของการเปลี่ยนแปลงในการทดลองอันเนื่องมาจากประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนและความมีชีวิตของเซลล์ การดำเนินการนั้นง่ายดาย และเนื่องจากตรวจจับได้เฉพาะสัญญาณลูซิเฟอเรสของหิ่งห้อยเท่านั้น การวิเคราะห์ข้อมูลจึงสะดวกยิ่งขึ้น เมื่อรวมกับข้อดีของเวลาในการตรวจจับที่สั้น จึงเหมาะอย่างยิ่งสำหรับการคัดกรองยาที่มีปริมาณงานสูง และตอบสนองความต้องการในการตรวจจับตัวอย่างขนาดใหญ่
ระบบตรวจจับยีน Dual-Luciferase Reporter
รายงานปริมาณยีน: ยีนรายงานคู่ของหิ่งห้อยลูซิเฟอเรสและเรนิลลาลูซิเฟอเรส
ประเภทการถ่ายโอน: การถ่ายโอนยีนร่วมของพลาสมิดยีนรายงานสองตัว โดยส่วนใหญ่ผ่านการถ่ายโอนยีนชั่วคราว
กระบวนการตรวจจับ: จำเป็นต้องตรวจจับสัญญาณหิ่งห้อยก่อน จากนั้นจึงตรวจจับสัญญาณเรนิลลา จากนั้นจึงใช้อัตราส่วนของทั้งสอง (ไฟร์ฟลาย/เรนิลลา) ในการคำนวณข้อมูลขั้นสุดท้าย
การวิเคราะห์สถานการณ์การใช้งาน: โดยทั่วไปแล้วจะทำผ่านการถ่ายโอนยีนชั่วคราว โดยมีการถ่ายโอนยีนร่วมของพลาสมิดที่มียีน Renilla luciferase เป็นข้อมูลอ้างอิงภายใน ซึ่งถือเป็นเกณฑ์มาตรฐานสำหรับการทดลอง จึงช่วยลดการรบกวนจากปัจจัยภายนอก เช่น ความสามารถในการมีชีวิตของเซลล์และประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีน โดยการคำนวณอัตราส่วนทำให้สามารถแก้ไขความแปรผันของจำนวนเซลล์ ประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีน และกิจกรรมของเซลล์ได้ ทำให้ผลการทดลองมีความแม่นยำมากขึ้น ถือเป็นเครื่องมือสำคัญในด้านการควบคุมการแสดงออกของยีน เส้นทางการถ่ายโอนสัญญาณ และการคัดกรองยา
ซีรีย์ผลิตภัณฑ์
| ชื่อสินค้า | ไบโอ-วันสเต็ป | มั่นคง-ก้าวหนึ่ง | ไบรท์-วันสเต็ป |
| รหัสสินค้า | |||
| สถานการณ์การใช้งาน และคุณลักษณะ | ชุดนี้ให้ความสมดุลระหว่างความเข้มของสัญญาณและความเสถียร โดยรักษาความเข้มของสัญญาณให้ค่อนข้างสูงในขณะที่รักษาความเข้มของสัญญาณให้ค่อนข้างคงที่ตลอดช่วงระยะเวลาหนึ่ง | ครึ่งชีวิตสามารถอยู่ได้นานกว่า 5 ชั่วโมง โดยเฉพาะอย่างยิ่งภายใน 2 ชั่วโมงแรก การเปลี่ยนแปลงค่าการเรืองแสงจะน้อยมาก เหมาะสำหรับการทดสอบปริมาณงานสูงพิเศษหรือการทดสอบแผ่น 384 หลุม | ความไวสูงและความเข้มของสัญญาณสูง เหมาะสำหรับการทดลองที่ต้องการความไวสูง |
| สัญญาณครึ่งชีวิต | 60 นาที | 5 ชม. | 30 นาที |
| ลักษณะการทำงาน | ก้าวหนึ่ง | ก้าวหนึ่ง | ก้าวหนึ่ง |
ข้อดีของผลิตภัณฑ์
ครึ่งชีวิตของสัญญาณยาวนาน: ครึ่งชีวิตของสัญญาณสามารถอยู่ได้นานถึง 5 ชั่วโมง ตอบสนองความต้องการของการทดลองปริมาณสูง และหลีกเลี่ยงความแตกต่างของสัญญาณที่เกิดจากความแตกต่างของเวลาระหว่างหลุมแรกและหลุมสุดท้ายอันเนื่องมาจากจำนวนตัวอย่างที่มาก ทำให้มั่นใจได้ว่าผลลัพธ์จะเสถียรและเชื่อถือได้มากขึ้น
สัญญาณการเรืองแสงที่แข็งแกร่ง: ค่าสัญญาณสามารถเข้าถึงลำดับขนาด 8 ทำให้มีหน้าต่างการตรวจจับที่กว้างและสนับสนุนข้อมูลที่แข็งแกร่งสำหรับการคัดกรองยาในระยะเริ่มต้นและการประเมินประสิทธิผล
ใช้งานง่าย: การทำงานเพียงขั้นตอนเดียวช่วยหลีกเลี่ยงขั้นตอนการทดลองที่ซับซ้อน เพียงเติมสารเคมีตรวจจับและรอ 5 นาทีก่อนสตาร์ทเครื่องเพื่อตรวจจับ
ตัวเลือกต่างๆ: มีผลิตภัณฑ์ 3 ชนิดให้เลือกตามสถานการณ์การใช้งานที่แตกต่างกัน ซึ่งสามารถเลือกได้ตามข้อกำหนดการทดลองสำหรับค่าสัญญาณและความเสถียรของสัญญาณ
ข้อมูลผลิตภัณฑ์
01 การเปรียบเทียบประสิทธิภาพของ
การตรวจสอบชุดทดสอบสามประเภท ได้ดำเนินการกับสายเซลล์ที่แสดงลูซิเฟอเรสของหิ่งห้อยอย่างเสถียร และผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าผลิตภัณฑ์ Bright-One Step มีค่าสัญญาณที่สูงกว่า ผลิตภัณฑ์ Steady-One Step มีอายุครึ่งชีวิตของสัญญาณยาวนานขึ้นและสัญญาณที่เสถียรยิ่งขึ้น ผลิตภัณฑ์ Bio-One Step ไม่เพียงแต่มีค่าสัญญาณที่สูงเท่านั้น แต่ยังคงรักษาอายุครึ่งชีวิตของสัญญาณที่ยาวนานขึ้นอีกด้วย
รูปที่ 1 การเปรียบเทียบประสิทธิภาพการทำงานสำหรับ
02
เมื่อใช้งาน
รูปที่ 2 การเปรียบเทียบ
03
รูปที่ 3.การทดสอบแช่แข็ง-ละลายซ้ำๆ
ขั้นตอนการปฏิบัติงาน
01 การถ่ายโอนเซลล์
เติมสารเคมีลงในสารแขวนลอยของเซลล์โดยตรง จากนั้นปิเปตขึ้นและลง 5 ครั้งเพื่อให้แน่ใจว่าผสมกันอย่างทั่วถึง รอ 5 นาทีเพื่อให้เซลล์แตกสลายอย่างสมบูรณ์
02 การโหลดตัวอย่าง
ปิเปต 100 μL ของส่วนผสม (สารเคมีตรวจจับ + อาหารเพาะเลี้ยงเซลล์) ลงในแต่ละหลุมของแผ่นตรวจจับ
03 การตรวจจับฟลูออเรสเซนต์
ตั้งค่าพารามิเตอร์บนเครื่องอ่านแผ่น วางแผ่นตรวจจับลงในเครื่องอ่านแผ่น เขย่าเป็นเวลาสองสามวินาที จากนั้นดำเนินการตรวจจับ
รายการสินค้า
| หมวดหมู่สินค้า
| ชื่อสินค้า | รหัสสินค้า | ข้อมูลจำเพาะผลิตภัณฑ์ |
| ชุดทดสอบยีนรายงานลูซิเฟอเรส | 11411ES60/80/81 | 100ตัน/10×100ตัน/1000ตัน | |
| 11413ES60/80/81 | 100ตัน/10×100ตัน/1000ตัน | ||
| 11412ES60/80/81 | 100ตัน/10×100ตัน/1000ตัน | ||
| ชุดทดสอบยีนรีพอร์ตเตอร์ลูซิเฟอเรสแบบคู่
| 11402ES60/80 | 100ตัน/1000ตัน | |
| 11405ES60/80 | 100ตัน/1000ตัน |