ด้วยการพัฒนาอย่างรวดเร็วของ พีโรตีน สวิทยาศาสตร์ เทคโนโลยีการทำให้โปรตีนบริสุทธิ์มีบทบาทสำคัญเพิ่มขึ้นเรื่อยๆ ในด้านการวิจัยทางชีววิทยาและอุตสาหกรรมเทคโนโลยีชีวภาพ โดยเป็นเทคนิคหลักที่เกี่ยวข้องกับการรวมข้อมูลการเข้ารหัสของโปรตีนเป้าหมายเข้ากับเซลล์โฮสต์ผ่านวิธีการทางพันธุวิศวกรรม เพื่อให้สามารถชักนำให้โปรตีนผลิตโปรตีนที่ต้องการได้อย่างมีประสิทธิภาพ จากนั้นจึงดำเนินการตามขั้นตอนการทำงานในหลอดทดลองที่ซับซ้อนหลายขั้นตอนเพื่อให้ได้โปรตีนที่มีความบริสุทธิ์สูง การทำให้โปรตีนบริสุทธิ์ช่วยให้นักวิทยาศาสตร์สามารถแยกโปรตีนประเภทต่างๆ ได้ ซึ่งถือเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการศึกษาเชิงลึกเกี่ยวกับโครงสร้างและหน้าที่ของโปรตีน การพัฒนายาใหม่ การวินิจฉัยโรค และการส่งเสริมการประยุกต์ใช้เทคโนโลยีชีวภาพ เทคโนโลยีนี้ไม่เพียงแต่รับประกันความถูกต้องของการทดลองทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น แต่ยังขับเคลื่อนการพัฒนาวิทยาศาสตร์ชีวภาพอย่างต่อเนื่องอีกด้วย
รูปที่ 1 แผนผังของโครมาโทกราฟีแบบสัมพันธ์[1]
ในสาขาของวิศวกรรมโปรตีน แท็กฟิวชันทำหน้าที่เป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพ ซึ่งสามารถอำนวยความสะดวกในการทดลองต่างๆ ได้โดยการจับกับโปรตีนเป้าหมาย ฟังก์ชันของแท็กฟิวชันทั่วไปแสดงไว้ในตารางด้านล่างเพื่อใช้เป็นข้อมูลอ้างอิง อย่างไรก็ตาม เมื่อแท็กเหล่านี้ยังคงอยู่บนโปรตีนฟิวชันหลังจากทำหน้าที่เสริมเริ่มต้นเสร็จสิ้นแล้ว แท็กเหล่านี้อาจส่งผลเสียต่อการทดลองครั้งต่อไป เช่น ขัดขวางการทดลองภูมิคุ้มกันของสัตว์หรือส่งผลต่อกิจกรรมทางชีวภาพของโปรตีน ดังนั้น จึงมีความจำเป็นอย่างยิ่งที่จะต้องลบแท็กฟิวชันที่ไม่จำเป็นเหล่านี้ออก เพื่อให้แน่ใจว่าโปรตีนจะทำงานได้ตามปกติและการทดลองมีความแม่นยำ
ตารางที่ 1 บทนำเกี่ยวกับฟังก์ชันของแท็กฟิวชันทั่วไปและวิธีการแยกเอนไซม์
| แท็กฟิวชั่น | ขนาด (เคดีเอ- | การทำงาน | วิธีการแยกเอนไซม์ทั่วไป |
| ของเขา | 0.84 | เป็นประโยชน์สำหรับการชำระล้าง สามารถทำโปรตีนที่ละลายน้ำได้/รวมในร่างกายให้บริสุทธิ์ได้ | TEV โปรตีเอส |
| ธง | 1.01 | โปรตีนที่มีวัตถุประสงค์ในการผสมกับ Fความล่าช้า แท็กสามารถรับรู้ได้จากแอนติบอดีต่อ Fความล่าช้าเพื่อให้โปรตีนฟิวชั่นที่มี Fความล่าช้า สามารถตรวจจับและระบุแท็กได้ด้วยวิธี Western Blot, ELISA และวิธีอื่นๆ | เอนเทอโรคิเนส |
| ภาษีมูลค่าเพิ่ม | 26 | เพิ่มการละลายของโปรตีน สามารถทำได้เฉพาะโปรตีนที่ละลายน้ำได้เท่านั้น และป้องกันโปรตีนที่เป็นพิษ | ธรอมบิน |
| เอ็มบีพี | 44.4 | เพิ่มความสามารถในการละลายของโปรตีน และป้องกันโปรตีนที่เป็นพิษ | TEV โปรตีเอส |
| นุศา | 55 | เพิ่มความสามารถในการละลายของโปรตีน และป้องกันโปรตีนที่เป็นพิษ | ธรอมบิน |
| ซูโม่ | 11.2 | เพิ่มการละลายของโปรตีน ส่งเสริมโปรตีนจากโปรตีโอไลติก ไฮโดรไลซิสและปรับปรุงเสถียรภาพของโปรตีน | ซูโม่โปรตีเอส |
วันนี้ เรามีความยินดีที่จะแนะนำผลิตภัณฑ์ล้ำสมัยสำหรับการลบแท็กฟิวชันอย่างมีประสิทธิภาพและแม่นยำ - UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV ด้วยขั้นตอนการทดลองที่เรียบง่ายและใช้งานง่าย เอนไซม์ตัวนี้จึงสามารถแยกแท็กที่ไม่จำเป็นออกจากโปรตีนฟิวชันได้อย่างสะดวก จึงได้โปรตีนเป้าหมายที่มีความบริสุทธิ์สูง
UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV
TEV Protease เป็นโปรตีเอสที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการแยกแท็กฟิวชันโปรตีนรีคอมบิแนนท์ ซึ่งเป็นที่รู้จักจากคุณสมบัติจำเพาะของไซต์ที่สูง โดยจะจดจำลำดับกรดอะมิโน 7 ตัวอย่าง EXXYXQ↓(G/S) อย่างเคร่งครัด และแยกกลูตามีนและไกลซีนหรือเซอรีนได้อย่างแม่นยำ ลำดับกรดอะมิโน 7 ตัวที่พบมากที่สุดคือ Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln↓-Gly คุณสมบัติจำเพาะนี้ทำให้กระบวนการแปรรูปโปรตีนมีความแม่นยำและมีประสิทธิภาพ
รูปที่ 2 แผนผังแสดงกลไกการทำงานของโปรตีเอส TEV[2]
UCF.MEทีเอ็ม rTEV Protease คือโปรตีเอสรีคอมบิแนนท์ที่ผ่านการดัดแปลงพันธุกรรมและผ่านกระบวนการทำให้บริสุทธิ์อย่างละเอียด โปรตีเอสชนิดนี้ไม่เพียงแต่คงไว้ซึ่งกิจกรรมการทำงานทั้งหมดของเอนไซม์ TEV ตามธรรมชาติเท่านั้น แต่ยังมีเสถียรภาพและความจำเพาะที่ยอดเยี่ยมในช่วงอุณหภูมิที่กว้างขึ้นอีกด้วย การ กากตกค้างของ gDNA ของโฮสต์ ของตผลิตภัณฑ์ของเขาคือ มาก ต่ำ ช่วยให้มีประสิทธิภาพในการตัดแท็กฟิวชันโปรตีนที่สูงขึ้นในการใช้งานจริง และลดความเสี่ยงในการมีสารตกค้างจากภายนอกเข้ามาได้อย่างมีประสิทธิภาพ UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV แสดงกิจกรรมที่เหมาะสมที่สุดภายใต้สภาวะ pH 7.0 และ 30°C อย่างไรก็ตาม โปรตีเอสยังคงกิจกรรมได้แม้ภายใต้สภาวะที่หลากหลายด้วย pH 6.0-8.5 และอุณหภูมิ 4-30°C เพื่อตอบสนองความต้องการในการแปรรูปโปรตีนที่แตกต่างกัน ทั้งนี้ UCF.ME สมควรกล่าวถึงว่าทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV มีแท็ก 6×His ที่ปลาย N ซึ่งสามารถกำจัดออกได้อย่างมีประสิทธิภาพโดยเรซิน Ni-NTA จึงทำให้สามารถทำการบริสุทธิ์โปรตีนเป้าหมายได้อย่างแม่นยำ
จอแสดงผลประสิทธิภาพ
1. ประสิทธิภาพการแยกสูง: แท็กโปรตีนถูกแยกออกอย่างทั่วถึงยิ่งขึ้น
โดยใช้โปรตีนฟิวชั่น (3 μg) ที่มี UCF.MEทีเอ็ม ไซต์การแยกโปรตีเอส rTEV เป็นสารตั้งต้น UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV ที่ 10, 5 และ 3 U ถูกเติมลงไปตามลำดับ และปฏิกิริยาเกิดขึ้นที่อุณหภูมิ 30°C เป็นเวลา 1 ชั่วโมง ผลการแตกตัวถูกตรวจพบโดยอิเล็กโทรโฟรีซิสเจลอะกาโรส ผลแสดงให้เห็นว่า Yอีเซนของ UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV สามารถแยกย่อยสารตั้งต้นได้อย่างมีประสิทธิภาพเมื่อปริมาณอินพุตมากกว่า 3 U โดยมีประสิทธิภาพการแยกย่อยที่ >90%
รูปที่ 3 การตรวจสอบกิจกรรมการแยกส่วนของ UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV
2. สารตกค้าง gDNA ของโฮสต์ต่ำ: ลดความเสี่ยงในการนำสารตกค้างจากภายนอกเข้ามาได้อย่างมีประสิทธิภาพ
โดยการทดสอบโฮสต์ (อี.โคไล) สารตกค้าง gDNA ในชุดต่างๆ ของ UCF.MEทีเอ็ม rTEV Protease ผลการทดลองพบว่ามี gDNA ตกค้างของโฮสต์ของ UCF.MEทีเอ็ม rTEV Protease มีค่าต่ำกว่า <1 สำเนา/U มาก
รูปที่ 4 ผลลัพธ์ของปริมาณ gDNA ของโฮสต์ใน UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV
3. เงื่อนไขการใช้งานกว้าง: สามารถตอบสนองความต้องการในการแปรรูปโปรตีนที่แตกต่างกัน
โดยการตรวจสอบกิจกรรมการแยกส่วนของ UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV ภายใต้เงื่อนไขที่แตกต่างกัน ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV มีกิจกรรมที่แข็งแกร่งภายใต้สภาวะ 4-30°C ซึ่งสามารถตอบสนองความต้องการการใช้งานที่แตกต่างกันของลูกค้าได้
| เวลาตอบสนอง -ชม.- | กิจกรรมการแยกตัวภายใต้อุณหภูมิที่แตกต่างกัน --- | |||
| 4℃ | 16℃ | 21℃ | 30℃ | |
| 1 | 34 | 58 | 56 | 85 |
| 2 | 58 | 80 | 78 | 90 |
| 3 | 71 | 99 | 99 | 99 |
| 3.5 | 84 | 99 | 99 | 99 |
ย.อีเซนผลิตภัณฑ์โปรตีนตัดฟิวชันแท็กที่แนะนำ
| ผลิตภัณฑ์ ชื่อ | ผลิตภัณฑ์ เอ็นสีน้ำตาล | |
| ทีอีวี โปรตีเอส | UCF.MEทีเอ็ม โปรตีเอส rTEV | 20427อีเอส |
| เอนเทอโรคิเนส | เอนเทอโรคิเนส, รีคอมบิแนนท์ | 20395ES |
| ซูโม่โปรตีเอส | ซูโม่โปรตีเอส | 20410ES |
| 3C โปรตีเอส | 3C โปรตีเอส | 20409ES |
อ้างอิง：
[1] Parikh I , Cuatrecasas P . โครมาโตกราฟีแบบสัมพันธ์[J].Vox Sanguinis, 1972, 23(1-2):141-146.DOI:10.1159/000466530
[2] Paththamperuma C, หน้า R C. การทดสอบการดับฟลูออเรสเซนต์สำหรับกิจกรรมของโปรตีเอส TEV [J] ชีวเคมีวิเคราะห์ 2022, 659: 114954