การวินิจฉัยทางโมเลกุลเป็นวิธีการและกระบวนการในการวินิจฉัยโรคหรือภาวะต่างๆ ของมนุษย์โดยเฉพาะ โดยการตรวจสอบการมีอยู่ ข้อบกพร่อง หรือการแสดงออกที่ผิดปกติของยีนภายในร่างกายหรือยีนภายนอก (เชื้อก่อโรค) ภายในร่างกายมนุษย์โดยใช้โมเลกุลของดีเอ็นเอ อาร์เอ็นเอ หรือโปรตีนเป็นวัสดุในการวินิจฉัย เทคโนโลยีการวินิจฉัยทางโมเลกุลหลัก ได้แก่ ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส (PCR), การไฮบริดิเซชันแบบฟลูออเรสเซนต์อินซิทู (FISH), ชิปยีน และเทคโนโลยีการจัดลำดับยีน เมื่อเปรียบเทียบกับเทคโนโลยีไฮบริดิเซชันและการจัดลำดับปริมาณงานสูง ข้อได้เปรียบหลักของเทคโนโลยี PCR คือ ความไวที่สูงกว่า ความจำเพาะที่แข็งแกร่งกว่า ใช้งานง่าย และเผยแพร่ได้ง่าย แม้ว่าเทคโนโลยี PCR จะมีข้อจำกัดบางประการในจำนวนยีนที่สามารถตรวจจับได้ แต่ในระยะสั้น เทคโนโลยีนี้จะยังคงเป็นเทคโนโลยีกระแสหลักในการวินิจฉัยทางโมเลกุล
ภาพรวมเวิร์กโฟลว์การขยาย PCR เชิงโมเลกุลและวัตถุดิบ

1、วัสดุเอนไซม์หลัก-Taq DNA Polymerase
เนื่องจากการขยายตัวของสาขาการทดสอบการใช้งานและความต้องการของตลาดที่เพิ่มขึ้น โพลิเมอเรส DNA Taq ชนิดป่าจึงไม่สามารถตอบสนองความต้องการได้อย่างเต็มที่อีกต่อไป
- ความคงตัวที่เหนือกว่า: เมื่อผสมเป็นสารละลายพรีมิกซ์ที่สมบูรณ์ซึ่งประกอบด้วยไพรเมอร์และโพรบ หลังจากการบำบัดที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 7 วัน จะไม่มีการเปลี่ยนแปลงในการตรวจจับที่มีความเข้มข้นต่ำ
รูปที่ 1: โดยใช้กรดนิวคลีอิก HBV เป็นแม่แบบ สารละลายพรีมิกซ์สมบูรณ์ qPCR ถูกเตรียมโดยใช้ 10726ES และส่วนประกอบทั้งหมด ยกเว้นแม่แบบ ได้รับการทดสอบความเสถียรที่เร่งขึ้นที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 7 วัน ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าไม่มีการเปลี่ยนแปลงที่สำคัญในค่า Ct และค่าฟลูออเรสเซนซ์ที่ความเข้มข้นสูง ปานกลาง และต่ำ ซึ่งบ่งชี้ว่าสารละลายพรีมิกซ์ที่เตรียมโดยใช้ 10726ES มีประสิทธิภาพที่เสถียร
- ปริมาณตกค้าง gDNA ของโฮสต์ต่ำ: จำนวน DNA ของจีโนม E. coli ที่เหลือน้อยกว่า 0.5 สำเนาต่อ 100 U
รูปที่ 2: ช่วงเชิงเส้นของ DNA จีโนมของ E. coli: 30 fg/μL ถึง 300 pg/μL โดยมีค่าสัมประสิทธิ์สหสัมพันธ์ R2 ที่ 0.9999 (B) DNA จีโนมของ E. coli ที่เหลือใน Hieff UCF.ME® Sensitive Taq DNA Polymerase สามชุดมีน้อยกว่า 0.5 สำเนาต่อ 100 U
2、วัสดุเอนไซม์หลัก-รีเวิร์สทรานสคริปเทส
เนื่องจากเป็นหนึ่งในองค์ประกอบสำคัญของปฏิกิริยา RT-qPCR ทรานสคริพเทสย้อนกลับจึงต้องมีความเร็วในการถอดรหัสย้อนกลับที่เร็วกว่า ผลผลิตการสังเคราะห์ที่สูงขึ้น และทนต่อความร้อนได้ดีขึ้น เพื่อให้ได้ทรานสคริพเทสย้อนกลับที่เหมาะสมกับ RT-qPCR มากขึ้น
- สามารถทนต่ออุณหภูมิปฏิกิริยา 58℃ และเหมาะสำหรับการถอดรหัสย้อนกลับของเทมเพลต RNA ที่ซับซ้อน
รูปที่ 3: ทำการบ่มเอนไซม์ Hifair® V Reverse Transcriptase และเอนไซม์ T* reverse transcriptase ของแบรนด์นำเข้าที่อุณหภูมิ 55°C และ 58°C เป็นเวลา 30 นาทีเพื่อตรวจจับกิจกรรมเอนไซม์ที่เหลือ ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าเอนไซม์ Hifair® V Reverse Transcriptase ยังคงรักษากิจกรรมไว้ได้ 70% หลังจากบ่มที่อุณหภูมิ 58°C เป็นเวลา 30 นาที ซึ่งสูงกว่าเอนไซม์แบรนด์นำเข้าอย่างมาก
- อัตราการตรวจจับที่เหนือกว่าใน RT-qPCR เมื่อเทียบกับแบรนด์อื่น โดยมีช่วงการตรวจจับตั้งแต่ 1 pg ถึง 1 μg
รูปที่ 4: การใช้ RNA ทั้งหมดของเซลล์ 293T ในความเข้มข้นตั้งแต่ 1 pg ถึง 1 μg (7 ระดับ) เป็นแม่แบบ ได้ทำการถอดรหัสย้อนกลับโดยใช้ SuperMix สำหรับการย่อย RT-gDNA แบบขั้นตอนเดียวของ Hifair® V สำหรับ qPCR (Cat#11142), V* และ T* จากนั้น cDNA ที่ได้จะถูกนำไปทำ qPCR เพื่อวิเคราะห์เชิงปริมาณ ผลลัพธ์บ่งชี้ว่าความไวของ 11142ES สามารถไปถึง 1 pg โดยมีอัตราการตรวจจับที่เหนือกว่าผลิตภัณฑ์คู่แข่ง
3、เอนไซม์และสารยับยั้งเอนไซม์อื่นๆ: สารยับยั้ง RNase, เอนไซม์ UDG
อาร์นาเซ สารยับยั้ง-
ยูราซิลดีเอ็นเอไกลโคซิเลส (เอนไซม์ UDG/UNG)เอนไซม์ Uracil-DNA glycosylase (UDG) เมื่อใช้ร่วมกับ dUTP สามารถสร้างระบบป้องกันการปนเปื้อนของ PCR ได้ เอนไซม์ UDG ต่ำที่ไม่ทนต่อความร้อนของ Yisheng สามารถหลีกเลี่ยงกิจกรรมตกค้างของเอนไซม์ UDG ทั่วไปหลังจากการทำให้ไม่ทำงาน ซึ่งอาจทำให้ผลิตภัณฑ์การขยายพันธุ์ที่มี dU สลายตัวที่อุณหภูมิห้อง นอกจากนี้ยังป้องกันผลบวกปลอมในผล PCR ที่เกิดจากแบคทีเรียพื้นหลังที่มีอยู่ในเอนไซม์ระดับโมเลกุล ซึ่งเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการระบุเชื้อก่อโรคติดเชื้อได้อย่างแม่นยำและช่วยในการวินิจฉัยทางคลินิกของการติดเชื้อและโรคติดเชื้อ
แอนติบอดี Taq DNA โพลิเมอเรส:การขยายแบบไม่จำเพาะเป็นปัญหาสำคัญประการหนึ่งที่ส่งผลต่อประสิทธิภาพของ PCR อย่างมาก และเทคโนโลยีการเริ่มร้อนสามารถลดการขยายแบบไม่จำเพาะได้อย่างมีประสิทธิภาพ เอนไซม์การเริ่มร้อนที่ดัดแปลงด้วยแอนติบอดีมีประสิทธิภาพการปิดผนึกที่สูงและประสิทธิภาพที่ยอดเยี่ยม โดยมีเสถียรภาพที่อุณหภูมิห้องพร้อมอัตราการปลดปล่อยเอนไซม์ที่รวดเร็วเอนไซม์ Taq แบบ Hot Start ที่มีแอนติบอดีสองตัวที่พัฒนาโดย Yisheng Biotech ไม่เพียงแต่ปิดผนึกกิจกรรมโพลีเมอเรส 5'→3' ของเอนไซม์ Taq เท่านั้น แต่ยังปิดผนึกกิจกรรมเอ็กโซนิวคลีเอส 5'→3' ในเวลาเดียวกันอีกด้วย วิธีการแบบคู่กันนี้มีประสิทธิภาพในการป้องกันการขยายแบบไม่จำเพาะที่เกิดจากการจับคู่ผิดหรือไดเมอร์ไพรเมอร์ และยังป้องกันการสร้างสัญญาณแบบไม่จำเพาะอันเนื่องมาจากการเสื่อมสภาพของโพรบหรือไพรเมอร์ จึงช่วยเพิ่มเสถียรภาพของรีเอเจนต์เป็นสองเท่า
4、มาสเตอร์มิกซ์ qPCR ประสิทธิภาพสูงแบบหลอดเดียวสากล
- ความคล่องตัวดี:เหมาะสำหรับไพรเมอร์และโพรบหลายประเภท (มีการตรวจยืนยันเป้าหมายที่แตกต่างกันมากกว่า 40 ประเภท) และมีประสิทธิภาพในการขยายสัญญาณที่ยอดเยี่ยม
- ล ความเสถียรของพรีมิกซ์ที่เต็มเปี่ยมเป็นพิเศษ: คงที่ที่อุณหภูมิ 37℃ เป็นเวลา 14 วัน 4℃ เป็นเวลา 28 วัน การแช่แข็งและละลายซ้ำ 50 ครั้ง
- ความไวสูงและความจำเพาะที่ดี: ความไวสามารถตรวจจับได้ 0.25 copy/μL และความจำเพาะของ 48 หลุมไม่มีค่าพีคลบ
- รองรับโปรแกรมรวดเร็ว:รองรับโปรแกรมรวดเร็ว 30 นาทีก็เห็นผล;
- ระบบป้องกันมลพิษ dUP/UDG: นำระบบป้องกันมลพิษ dUTP/UDG มาใช้เพื่อป้องกันมลพิษทางละอองอย่างมีประสิทธิภาพ
- แอปพลิเคชันหลายแพลตฟอร์มและหลายระบบ: Bio-Rad CFX96, ABI Q5, 7500, Slan, Tianlong ฯลฯ
รูปที่ 5: จากการศึกษาความเสถียรของรีเอเจนต์ที่ผสมสำเร็จแล้วแบบออลอินวัน 16710ES ได้รับการบำบัดด้วยสามวิธีที่แตกต่างกัน (4°C, 37°C และรอบการแช่แข็ง-ละลาย) กลุ่มทดลองได้รับการบำบัดที่อุณหภูมิ 4°C และ 37°C เป็นเวลา 7 วันตามลำดับ และผ่านรอบการแช่แข็ง-ละลาย 50 รอบ ในขณะที่กลุ่มควบคุม (ที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C) ได้รับการประเมินความเสถียรภายใต้ระบบขยายสัญญาณแบบมัลติเพล็กซ์สี่ระบบ (กลุ่ม 1, 2 และ 4 เป็นระบบขยายสัญญาณแบบควอดรูเพล็กซ์ และกลุ่ม 3 เป็นระบบขยายสัญญาณแบบไตรเพล็กซ์) ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่าค่า Ct (ΔCt) เบี่ยงเบนจากค่าปกติระหว่างกลุ่มทดลองและกลุ่มควบคุมภายใน ±0.5 และค่าฟลูออเรสเซนต์เบี่ยงเบนจากค่าปกติภายใน 15% ซึ่งพิสูจน์ได้ว่า
5、มาสเตอร์มิกซ์ RT-qPCR ประสิทธิภาพสูงแบบสากล
รีเอเจนต์ RT-qPCR แบบขั้นตอนเดียวผสานประสิทธิภาพอันยอดเยี่ยมของเอนไซม์ทรานสคริปเทสย้อนกลับและเอนไซม์ที่เริ่มทำงานทันที พร้อมด้วยระบบบัฟเฟอร์ที่ปรับให้เหมาะสม ช่วยให้ตรวจจับเทมเพลตสำเนาตัวเลขเดียวได้อย่างรวดเร็วและละเอียดอ่อน รีเอเจนต์เหล่านี้ได้รับการรับรองจากตลาดลูกค้าต่างๆ รวมถึงโรคทางเดินหายใจ โรคระบาดในสัตว์ และระบบวิจัย จึงสามารถตอบสนองความต้องการในทิศทางการใช้งานต่างๆ ได้
- ความคล่องตัวดี:เหมาะสำหรับการขยาย qPCR และการตรวจจับกรดนิวคลีอิกของจุลินทรีย์ก่อโรค จีโนมของมนุษย์ พืช และสิ่งมีชีวิตชนิดอื่นๆ
- ความไวสูงระบบบัฟเฟอร์ที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมอย่างระมัดระวังช่วยเพิ่มความไวในการตรวจจับเทมเพลตที่มีความเข้มข้นต่ำได้มากถึง 250 สำเนา/มล.
- ระบบป้องกันมลพิษ dUP/UDG:ระบบป้องกันมลพิษ UDG ที่ไม่เสถียรต่อความร้อน dUTP ถูกนำมาใช้เพื่อลดมลพิษทางละอองในผลิตภัณฑ์อย่างมีประสิทธิภาพ ลดผลบวกปลอม และรับรองผลลัพธ์ที่แท้จริง
- รองรับโปรแกรมรวดเร็ว: รองรับโปรแกรมรวดเร็ว 40 นาทีก็เห็นผล;
- ความเสถียรสูง: คงที่ที่อุณหภูมิ 37℃ เป็นเวลา 14 วัน การแช่แข็งและละลายซ้ำ 10 ครั้ง
การประเมินความไวในการตรวจจับ
รูปที่ 6: การนำไปใช้งาน
คำแนะนำสินค้า
คนงูเหลือม | คนขี้เมา | สวนสาธารณะ |
ซีรีย์เอนไซม์ PCR | ดีเอ็นเอโพลีเมอเรส Hieff UNICON® Hotstart E-Taq 5 U/μL | 10726ES |
ไฮแฟร์® วี รีเวิร์สทรานสคริปเทส (200 หน่วย/μL) | 11300ES | |
ยูราซิลดีเอ็นเอไกลโคซิเลส (UDG/UNG) ไม่ทนต่อความร้อน 1 U/μL | 10303ES | |
สารยับยั้ง RNase ของหนู (40 U/µL) | 10603ES | |
dNTP มิกซ์ (25 มิลลิโมลาร์ ต่อชิ้น) | 10125ES | |
ซีรีส์เอนไซม์เดี่ยว PCR ที่สะอาดเป็นพิเศษพร้อมสารตกค้างของโฮสต์ที่ต่ำเป็นพิเศษ | โพลีเมอเรสดีเอ็นเอ Taq ที่ละเอียดอ่อนของ Hieff UCF.ME® Hotstart (5 U/μL) | 14314ES |
เอนไซม์ UCF.ME® V รีเวิร์สทรานสคริปเทส Hifair (200 U/μL) | 14608ES | |
UCF.ME® Uracil DNA Glycosylase (UDG/UNG) ไม่เสถียรต่อความร้อน 1 U/μL | 14466ES | |
ยูซีเอฟสารยับยั้ง RNase ของหนู ME® (40 U/µL) | 14672ES | |
ซีรีส์โมโนเอนไซม์ Lyo-Ready PCR | ดีเอ็นเอโพลีเมอเรส Hieff UNICON® HotStart E-Taq ปราศจากกลีเซอรอล (5U/μL) | 14316ES |
Hifair® V Reverse Transcriptase ปราศจากกลีเซอรอล (600 U/μL) | 11301ES | |
ยูราซิล ดีเอ็นเอ ไกลโคซิเลส (UDG) ไม่เสถียรต่อความร้อน (1 U/μL ปราศจากกลีเซอรอล) | 10707ES | |
สารยับยั้ง RNase ของหนู (200 U/µL, ปราศจากกลีเซอรอล) | 10703ES | |
มาสเตอร์ มิกซ์ RT-qPCR | ชุดตรวจ RT-qPCR แบบมัลติเพล็กซ์ขั้นตอนเดียว Hifair® C203P1 (UDG Plus) | 16630ES |
ชุดตรวจ RT-qPCR แบบมัลติเพล็กซ์ Hifair® V (UDG Plus) | 11899ES | |
ชุดตรวจ RT-qPCR แบบมัลติเพล็กซ์ Hifair® Lyo | 11831ES | |
คิวพีซีอาร์ มาสเตอร์ มิกซ์ | Hieff Unicon® Universal TaqMan Pro U+ qPCR Mix (หนึ่งหลอด) | 16710ES |
Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG พลัส) | 13891ES | |
Hieff Unicon® Superpro Ⅰ TaqMan qPCR มาสเตอร์มิกซ์(UDG พลัส) | 11827ES | |
Hieff Unicon® Purepro Ⅰ TaqMan qPCR มาสเตอร์มิกซ์(UDG พลัส) | 11853ES | |
Hieff Unicon® Universal TaqMan Multiplex qPCR Master Mix(UDG พลัส) | 11893ES |