ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ด้วยการพัฒนาอย่างรวดเร็วของเทคนิคทางชีววิทยาโมเลกุล วิธีการวินิจฉัยโรคโดยใช้กรดนิวคลีอิกได้รับการพิสูจน์แล้วอย่างกว้างขวางและนำไปใช้ในการทดสอบโรคของมนุษย์ในห้องปฏิบัติการ เมื่อเปรียบเทียบกับเทคนิคการขยายกรดนิวคลีอิกอื่นๆ การขยายแบบไอโซเทอร์มอลมีข้อดีคือรวดเร็ว มีประสิทธิภาพ และเฉพาะเจาะจง และไม่ต้องใช้อุปกรณ์พิเศษ ดังนั้น นับตั้งแต่มีการนำมาใช้ นักวิชาการหลายคนจึงพิจารณาว่าวิธีนี้เป็นวิธีการตรวจจับที่มีศักยภาพเทียบเท่ากับ PCR ได้

ดังนั้นเชื่อกันว่าการพัฒนาและการประยุกต์ใช้เครื่องมือและชุดอุปกรณ์การวินิจฉัยที่ใช้เทคโนโลยีการขยายสัญญาณแบบไอโซเทอร์มอลจะเป็นแนวทางใหม่ของการทดสอบ ณ จุดดูแลผู้ป่วย (POCT) ในการวินิจฉัยทางโมเลกุล

บทนำสู่หลักการของเทคโนโลยีการขยายสัญญาณแบบไอโซเทอร์มอลกระแสหลัก

1、การขยายแบบไอโซเทอร์มอลแบบวงจร

เทคโนโลยี (LAMP)

หลักการ:การขยายพันธุ์แบบไอโซเทอร์มอลแบบลูป (LAMP) ใช้ Bst DNA polymerase ซึ่งมีกิจกรรมการเคลื่อนตัวของสาย โดยออกแบบไพรเมอร์เฉพาะสี่ประเภทที่กำหนดเป้าหมายที่บริเวณหกส่วนของยีนเป้าหมาย ทำให้สามารถขยายพันธุ์ลำดับเป้าหมายได้อย่างมีประสิทธิภาพ รวดเร็ว และเฉพาะเจาะจงภายใต้สภาวะไอโซเทอร์มอล การขยายพันธุ์สามารถทำได้ที่อุณหภูมิคงที่ 60-65°C และภายใน 15-60 นาที การขยายพันธุ์กรดนิวคลีอิก 10%⁹ ถึง 10¹⁰ สามารถบรรลุผลได้ครั้งแล้วครั้งเล่า

ข้อดีและการใช้งาน：เนื่องจาก ปฏิกิริยาที่รวดเร็ว ความจำเพาะสูง อุปกรณ์ที่ใช้งานง่าย และผลลัพธ์ที่ตีความได้ง่ายการขยายสัญญาณแบบไอโซเทอร์มอลถูกนำมาใช้ในการตรวจจับ แบคทีเรียก่อโรค ปรสิต ไวรัส โรค และผลิตภัณฑ์ดัดแปลงพันธุกรรมนอกจากนี้ยังคาดว่าจะใช้กันอย่างแพร่หลายในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อทางคลินิก การตรวจสอบสิ่งแวดล้อม ความปลอดภัยของอาหาร และสาขาอื่นๆ อีกด้วย ได้กลายเป็นวิธีการที่เหมาะสำหรับการทดสอบแบบจุดดูแลผู้ป่วยระดับโมเลกุล (พอคท์) แพลตฟอร์ม

การจำแนกประเภท：วิธีการตรวจจับ LAMP แบ่งเป็นหลายประเภท ได้แก่ การวัดความขุ่น วิธีบ่งชี้ค่า pH วิธีการย้อมเรืองแสง (เช่น NHB, Calcein, SYBR Green, Syto ฯลฯ) และวิธีการวัดฟลูออเรสเซนต์

2、เทคโนโลยีการขยายโพลีเมอเรสรีคอมบิเนส (RPA)

หลักการ:เมื่อเอนไซม์รีคอมบิเนสจับกับไพรเมอร์ จะสร้างคอมเพล็กซ์โปรตีน-ดีเอ็นเอที่สามารถค้นหาลำดับที่คล้ายคลึงกันภายในดีเอ็นเอสายคู่ เมื่อไพรเมอร์ค้นหาลำดับที่คล้ายคลึงกันได้แล้ว ปฏิกิริยาแลกเปลี่ยนสายจะเกิดขึ้น ส่งผลให้เกิดการก่อตัวและการเริ่มต้นการสังเคราะห์ดีเอ็นเอ ซึ่งจะทำให้บริเวณเป้าหมายบนเทมเพลตขยายตัวแบบทวีคูณ สายดีเอ็นเอที่เคลื่อนที่ไปจะจับกับโปรตีนที่จับกับสายเดี่ยว (SSB) เพื่อป้องกันการเคลื่อนตัวเพิ่มเติม ในระบบนี้ เหตุการณ์การสังเคราะห์จะเริ่มต้นด้วยไพรเมอร์ที่ตรงกันข้ามกันสองตัว โดยอาศัยกิจกรรมของรีคอมบิเนส เอนไซม์ Bsu และโปรตีน SSB เป็นหลัก เทคโนโลยีนี้สามารถตรวจจับเป้าหมายที่สนใจได้อย่างรวดเร็วภายใน 10-30 นาทีที่อุณหภูมิตั้งแต่ 37 ถึง 42°C

ข้อดีและการใช้งาน：RPA อวดอ้าง ความไวสูง ความจำเพาะสูง ไม่จำเป็นต้องพึ่งอุปกรณ์เฉพาะทางและความสามารถในการผสานรวมรูปแบบการตรวจจับต่างๆ เหมาะเป็นพิเศษสำหรับการทดสอบที่จุดดูแลผู้ป่วยในระดับรากหญ้าและในสถานที่จริง RPA สามารถใช้ได้อย่างกว้างขวางในการวินิจฉัยในหลอดทดลอง โรคสัตว์ ความปลอดภัยของอาหาร ความปลอดภัยทางชีวภาพ เกษตรกรรม และสาขาอื่นๆ

การจำแนกประเภท：วิธีการตรวจจับ RPA แบ่งเป็นหลายประเภท เช่น เจลอิเล็กโทรโฟเรซิส วิธีโพรบ EXO วิธีโพรบ Fpg แท่งวัดระดับการไหลข้าง (LF-RPA) และการวิเคราะห์การจับตัวเป็นก้อน เป็นต้น

การจัดแสดงประสิทธิภาพผลิตภัณฑ์

01 รีเอเจนต์ RT-LAMP สำหรับสีย้อมที่ไวต่อค่า pH

pH Sensitive Dye RT-LAMP ใช้สีย้อมที่มองเห็นได้เป็นตัวบ่งชี้ที่ไวต่อแสง ภายใต้สภาวะอุณหภูมิคงที่ 60-65℃ เพื่อทำการขยายกรดนิวคลีอิก RNA ขั้นตอนเดียวโดยใช้อ่างน้ำอุณหภูมิคงที่หรือเครื่อง PCR มาตรฐาน ในเวลาเพียง 30 นาที การเปลี่ยนสีหลังปฏิกิริยาสามารถใช้เพื่อระบุได้ว่ามีการติดเชื้อจากเชื้อโรคหรือไม่ โดยให้ผลลัพธ์ที่ชัดเจนกว่า (ผลบวกคือสีส้มเหลือง ผลลบคือสีแดงอมม่วง) วิธีนี้เหมาะสำหรับการทดสอบอย่างรวดเร็วในกลุ่มประชากรจำนวนมาก

สินค้าแนะนำ：

ชุดย้อมสีที่ไวต่อค่า pH RT-LAMP（13906ES）
ชุดทดสอบสีย้อมไวต่อค่า pH รุ่นโครโมเจนิก RT-LAMP แบบแช่แข็งแห้งได้ (13920ES)

การจัดแสดงผลงาน：

1.คู่มือการเลือกผสม RT-LAMP/RPA

การจำแนกประเภทผลิตภัณฑ์	RT-LAMP มิกซ์			การผสม RPA
ชื่อสินค้า	ชุดทดสอบสีย้อม RT-LAMP (UDG พลัส)	ชุดสีย้อมไวต่อค่า pH RT-LAMP	ชุดทดสอบสีย้อมไวต่อค่า pH รุ่นโครโมเจนิก RT-LAMP แบบแช่แข็งแห้ง	แอมป์ขยายเสียงฟิวส์ด่วน
หมายเลขรายการสินค้า	13762ES	13906ES	13920ES	16702ES
หมวดหมู่สินค้า	สีย้อมเรืองแสง	สีย้อมไวต่อค่า pH	สีย้อมไวต่อค่า pH	โพรบ
ส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์	2 ส่วนประกอบ บัฟเฟอร์、ส่วนผสมเอนไซม์	3 ส่วนประกอบ บัฟเฟอร์, เอนไซม์ RT, เอนไซม์ Bst	4 ส่วนประกอบ บัฟเฟอร์, เอนไซม์ RT, เอนไซม์ Bst, ไลโอโพรเทกแทนท์	4 ส่วนประกอบ บัฟเฟอร์、ส่วนผสมเอนไซม์、แมกนีเซียมอะซิเตท
รองรับการทำให้แห้งแบบแช่แข็ง	เลขที่	ใช่ครับ ไม่มี Lyoprotectant	ใช่ มีสารป้องกันไลโอโพรเทคแทนท์	เลขที่

2.คู่มือการเลือกเอนไซม์ LAMP/RT-LAMP

การจำแนกประเภทผลิตภัณฑ์	เอนไซม์ บีเอสที		ทรานสคริปเทสย้อนกลับ		เอนไซม์ ยูดีจี
ชื่อสินค้า	บีเอสที พลัส	บีเอสที พลัส ไลโอฟิไลซ์	Ⅲ รีเวิร์สทรานสคริปเทส	III รีเวิร์สทรานสคริปเทส, ปราศจากกลีเซอรอล	ยูดีจี	UDG ปราศจากกลีเซอรอล
หมายเลขรายการสินค้า	14402ES	14405ES	11111ES	11297ES	14455ES	14001ES
กิจกรรมเอนไซม์	40 หน่วย/ไมโครลิตร	60 หน่วย/ไมโครลิตร	200 หน่วย/ไมโครลิตร	600 หน่วย/ไมโครลิตร	1 หน่วย/ไมโครลิตร	1 หน่วย/ไมโครลิตร
ส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์	3 ส่วนประกอบ	2 ส่วนประกอบ	2 ส่วนประกอบ	ส่วนประกอบเดียว	เดี่ยว- ส่วนประกอบ	ส่วนประกอบเดียว
รองรับการทำให้แห้งแบบแช่แข็ง	เลขที่	ใช่	เลขที่	ใช่	เลขที่	ใช่

3、คู่มือการเลือกเอนไซม์ RPA

การจำแนกประเภทผลิตภัณฑ์	บีเอสยู	ที4 เอ็กซ์	ที4วาย	เอสเอสบี	ซีเค	เอ็กโซ
ชื่อสินค้า	บีเอสยู	T4 ยูวีเอสเอ็กซ์	T4 ยูวีเอสวาย	จีพี 32	ครีเอทีนไคเนส	เอ็กโซนิวคลีเอส III
หมายเลขรายการสินค้า	11078ES	11079ES	11080ES	11081ES	14502ES	14525ES
กิจกรรมเอนไซม์	5 หน่วย/ไมโครลิตร	2 ไมโครกรัม/ไมโครลิตร	2 ไมโครกรัม/ไมโครลิตร	5 ไมโครกรัม/ไมโครลิตร	2 ไมโครกรัม/ไมโครลิตร	100 หน่วย/ไมโครลิตร
ส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์	ส่วนประกอบเดียว	ส่วนประกอบเดียว	ส่วนประกอบเดียว	ส่วนประกอบเดียว	ส่วนประกอบเดียว	2 ส่วนประกอบ
รองรับการทำให้แห้งแบบแช่แข็ง	เลขที่	เลขที่	เลขที่	เลขที่	เลขที่	เลขที่