คุณยังคงกังวลเกี่ยวกับประสิทธิภาพที่ต่ำของการรวมตัวแบบโฮโมโลกัสของชิ้นส่วนหลายชิ้นหรือชิ้นส่วนที่ยาวเป็นพิเศษ และจำนวนโคโลนีที่น้อยหรือไม่
อย่างไรก็ตาม สำหรับตัวพาหรือชิ้นส่วนนั้นมีค่ามากกว่า ผลผลิตต่ำ เพื่อประหยัดวัตถุดิบ การใช้ระบบขนาดเล็กที่มีความเข้มข้นต่ำในการเชื่อมต่อ แต่ประสิทธิภาพในการเชื่อมต่อก็ต่ำและน่ารำคาญใช่หรือไม่

การเปรียบเทียบการโคลนนิ่งแบบขั้นตอนเดียวกับวิธีโคลนนิ่งจำกัดเอนไซม์แบบดั้งเดิม
วิธี | การเตรียมชิ้นส่วนการแทรก | การจำกัดพื้นที่การจำกัด | ทรัพย์สินที่เป็นสากล | เวลาเชื่อมต่อ | อัตราบวก |
เทคนิคการโคลนนิ่งรีคอมบิแนนท์แบบรวดเร็วในขั้นตอนเดียว | ขั้นตอนที่ 1 การฟอก | ไม่มี |
| เวลาที่เร็วที่สุดคือ 5 นาที | สูงสุดถึง 95% |
เทคนิคการจำกัดการย่อยและการผูกโคลน | ขั้นตอนที่ 2 การฟอก | ใช่ |
| ผ่านคืนไป | ยีนที่แตกต่างกันมีความแตกต่างกันมาก |
ข้อได้เปรียบของผลิตภัณฑ์
ปฐมนิเทศ: 1-7 ชิ้นส่วน DNA การโคลนนิ่งขั้นตอนเดียว
ง่ายๆ: สามารถเชื่อมชิ้นส่วนหลายๆ ชิ้นไว้ในหลอดเดียวได้
รวดเร็ว: การผูกที่เร็วที่สุดใน 5 นาที
ประสิทธิภาพสูง: อัตราการโคลนเชิงบวกสูง
ระบบขนาดเล็ก: ระบบการรัดรวมอาจต่ำได้ถึง 6 μL
ความยาวเกิน: มากกว่า 25 kb (ความยาวของตัวพา+ส่วน) สำหรับการผูกมัด
ผลงาน แสดง
- การรวมตัวที่มีประสิทธิภาพของระบบขนาดเล็ก 6 μL เพียงชิ้นเดียว

รูปที่ 1 ชิ้นส่วนเดี่ยวอินพุตต่ำ 10 ng ถูกผูกไว้ ในสถานะเซลล์รับที่ไม่ฟื้นคืนชีพของระบบขนาดเล็ก 6 μL-ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า 10923ES มีประสิทธิภาพดีกว่าผลิตภัณฑ์คู่แข่ง โดยมีประสิทธิภาพการผูกที่สูง จำนวนโคโลนีที่มากขึ้น และอัตราการเกิดผลบวก 100% AB: แผ่นแปลงที่สร้างขึ้นใหม่ อัตราส่วนโมลาร์ของตัวพา (10 kb) ต่อชิ้นส่วนแทรก (1 kb) คือ 1:2 C: การระบุชิ้นส่วนแทรกด้วย PCR M:
- การรวมตัวกันอย่างมีประสิทธิภาพของหลายส่วน

รูปที่ 2 ชิ้นส่วนจำนวน 6 ชิ้น (7.6 kb) ถูกมัดเข้าด้วยกัน ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า 10923ES มีประสิทธิภาพดีกว่าผลิตภัณฑ์คู่แข่ง โดยมีโคโลนีมากกว่าและอัตราการเกิดผลบวก 100% AB: แผ่นแปลงที่สร้างขึ้นใหม่ อัตราส่วนโมลาร์ของตัวพา (11.6 kb) ต่อชิ้นส่วนแทรก (7.6 kb) คือ 1:2 C: การระบุชิ้นส่วนแทรกด้วย PCR M:
- การรวมตัวที่มีประสิทธิภาพของชิ้นส่วนที่มีความเข้มข้นต่ำ

รูปที่ 3 เชื่อมชิ้นส่วนที่มีความเข้มข้นต่ำจำนวนห้าและหกชิ้นแยกกัน ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า 10923ES แสดงให้เห็นการเชื่อมต่อที่เสถียรในความเข้มข้นต่ำ โดยมีจำนวนแบคทีเรียสูง และอัตราการเป็นบวก 100% AB: แผ่นแปลงรีคอมบิแนนท์ CD: ภาพอิเล็กโทรโฟรีซิสเพื่อระบุชิ้นส่วนการแทรกด้วย PCR M:
- ความคงตัวของสารรีเอเจนต์

รูปที่ 4 หลังจากถูกวางไว้ที่อุณหภูมิ 37℃ เป็นเวลา 7 วัน ผลการทดลองแสดงให้เห็นว่า 10923ES ยังคงมีเสถียรภาพในการเชื่อมโยงชิ้นส่วนทั้งห้าและหกชิ้นที่ความเข้มข้นต่ำ AF: แผ่นแปลงรีคอมบิแนนท์ GH: ภาพอิเล็กโทรโฟรีซิสเพื่อระบุชิ้นส่วนการแทรกด้วย PCR M:
กรณีศึกษาลูกค้า
-
การจัดระเบียบระบบขนาดเล็กอย่างมีประสิทธิภาพ

รูปที่ 5 10923ES ถูกเชื่อมเข้ากับชิ้นส่วนเดี่ยวใน ระบบปฏิกิริยาขนาดเล็ก 10 μLโดยมีอัตราการเกิดผลบวก 100% A: แผ่นแปลงที่สร้างขึ้นใหม่ B: การระบุชิ้นส่วนแทรกด้วย PCR ขนาดตัวพา: 5,631 bp; ขนาดชิ้นส่วนเป้าหมาย: 1,384 bp

รูปที่ 6 โคลนจุดเชื่อมต่อและการกลายพันธุ์แบบชิ้นส่วนเดี่ยวระบบเล็กขนาด 10 μL อัตราการเป็นบวก 100% A และ C: แผ่นแปลงพันธุกรรม B: การระบุชิ้นส่วนแทรกด้วย PCR ช่อง 1-5 คือ โคโลนี 1 โคโลนี 2 ตัวควบคุมเชิงลบ ตัวควบคุมเชิงบวก (จีโนมเป็นแม่แบบ) ตัวควบคุมเชิงบวก (ชิ้นส่วนที่บริสุทธิ์ด้วย PCR เป็นแม่แบบ) D: อิเล็กโทรโฟเรแกรมของการระบุชิ้นส่วนแทรกด้วย PCR
-
การรวมตัวใหม่ของชิ้นส่วนสั้นที่มีความเข้มข้นต่ำอย่างมีประสิทธิภาพ

รูปที่ 7 10923ES การเชื่อมต่อ เศษที่มีความเข้มข้นต่ำเมื่อเปรียบเทียบกับผลิตภัณฑ์คู่แข่ง จำนวนโคโลนีมีสูง และอัตราการเกิดผลบวก (10/11) อยู่ที่ > 90.9% AB: แผ่นแปลงที่สร้างขึ้นใหม่ C: การระบุชิ้นส่วนแทรกด้วย PCR ขนาดตัวพา: 3,000 bp; ขนาดชิ้นส่วนเป้าหมาย: 441 bp
-
การเชื่อมต่อหลายส่วนอย่างมีประสิทธิภาพและรวดเร็ว

มะเดื่อ.8 10923ES การเชื่อมต่อแบบสี่ส่วน GC สูงและการเชื่อมต่อแบบรวมส่วนสั้น เมื่อเปรียบเทียบกับแบรนด์ S มีจำนวนแบคทีเรีย 10923ES สูงกว่าและอัตราผลบวก 100% D: แท็บเล็ตการแปลงรีคอมบิแนนท์ E: แทรกแผนที่ระบุลำดับชิ้นส่วน F: การเรียงลำดับแซงเกอร์ยืนยันการเชื่อมต่อที่ประสบความสำเร็จระหว่างเวกเตอร์และชิ้นส่วน และการเรียงลำดับที่ไซต์การเชื่อมต่อนั้นถูกต้อง
คำแนะนำผลิตภัณฑ์ Strength Star
10923ES ช่องทางการสั่งซื้อ
การวางแนวผลิตภัณฑ์ | เอ็นเอเม | หมายเลขบทความ | สข้อมูลจำเพาะ |
ชิ้นส่วน 1 – 7 ชิ้นถูกเชื่อมเข้าด้วยกันในขั้นตอนเดียว และปฏิกิริยาการรวมตัวใหม่เสร็จสิ้นในเวลาที่เร็วที่สุด 5 นาที | โคลนไฮฟ์ทีเอ็ม ชุดโคลนนิ่งขั้นตอนเดียวรุ่น Universal II | 20 ตัน/50 ตัน |
อาร์ดีใจมาก พีผลิตภัณฑ์
การวางแนวทางผลิตภัณฑ์ | เอ็นเอเม | หมายเลขบทความ | สข้อมูลจำเพาะ |
PCR ความเที่ยงตรงสูง | 2× ฮิฟ คานาเชทีเอ็ม AdvanceFast PCR Master Mix (พร้อมสีย้อม) | 1 มล./5×1 มล. | |
การอัพเกรด PCR อย่างรวดเร็ว สามารถทำเป็น PCR แบบโคโลนีได้ และเหมาะสำหรับการขยายเทมเพลตที่ซับซ้อน | 2×ไฮฟ์ทีเอ็ม มาสเตอร์มิกซ์ Ultra-Rapid II HotStart PCR | 1 มล./5×1 มล. |