ด้วยการพัฒนาอย่างรวดเร็วของเทคโนโลยีชีวภาพ การบำบัดด้วย mRNA จึงกลายเป็นวิธีการรักษาใหม่ที่น่าสนใจ เนื่องจากสามารถเขียนโปรแกรมได้อย่างมีประสิทธิภาพและตอบสนองได้รวดเร็ว ในด้านวัคซีน mRNA และยีนบำบัด การสังเคราะห์ mRNA คุณภาพสูงอย่างมีประสิทธิภาพถือเป็นขั้นตอนสำคัญในการบรรลุเป้าหมายการรักษา ในกระบวนการนี้ โพลิเมอเรส T7 RNA (T7 RNAP) มีบทบาทสำคัญ ซึ่งสามารถเร่งปฏิกิริยาการสังเคราะห์ mRNA ในหลอดทดลองได้อย่างมีประสิทธิภาพ
แม้ว่า T7 RNAP จะมีบทบาทสำคัญในการสังเคราะห์ mRNA แต่ในทางปฏิบัติมักจะผลิต dsRNA ซึ่งเป็นผลพลอยได้ dsRNA เป็นหนึ่งในเครื่องหมายการค้าของไวรัสหลายชนิด จึงสามารถระบุได้ง่ายโดยโปรตีนที่จับกับ dsRNA ในเซลล์ ซึ่งจะกระตุ้นให้เกิดการตอบสนองภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดและปฏิกิริยาการอักเสบ ซึ่งหมายความว่า หากสูตร mRNA มี dsRNA ในระดับที่สูงกว่า อาจทำให้เกิดการกระตุ้นภูมิคุ้มกันโดยไม่จำเป็น ซึ่งอาจส่งผลต่อประสิทธิผลของการรักษาหรือก่อให้เกิดผลข้างเคียงร้ายแรงได้ dsRNA มากเกินไปอาจรบกวนการทำงานปกติของ mRNA รวมถึงประสิทธิภาพในการแปลและความเสถียรของ mRNA ซึ่งจะส่งผลทางอ้อมต่อประสิทธิผลของการบำบัดด้วย mRNA
รูปที่ 1: ผลกระทบของผลพลอยได้ของ dsRNA และปฏิกิริยา T7 RNAP ที่ได้รับการปรับให้เหมาะสม
ดังนั้น การพัฒนาและนำวิธีการที่มีประสิทธิภาพมาใช้เพื่อลดการสร้าง dsRNA จึงเป็นส่วนสำคัญของการพัฒนาเทคโนโลยี mRNA นักวิจัยได้พัฒนากลยุทธ์ต่างๆ มากมาย รวมถึงการใช้ T7 RNA polymerase ที่ได้รับการปรับปรุง นิวคลีโอไทด์ดัดแปลง การปรับปรุงบัฟเฟอร์การถอดรหัส IVT และกระบวนการทำให้บริสุทธิ์ปลายน้ำ
ข้อมูลผลิตภัณฑ์
ผลผลิต: มากกว่า 9 มก./มล.
เนื้อหาของ dsRNA: เนื้อหาของ dsRNA ลดลงอย่างมีนัยสำคัญอย่างน้อย 10 เท่า
ประสิทธิภาพการปิดฝา: มากกว่า 99%
โพลิเมอเรส RNA T7 dsRNA ต่ำ กระบวนการคัดกรอง:
1) การสร้างไลบรารีสุ่มและวิธีการคัดกรองแบบประสิทธิภาพสูง FADS ไลบรารีการกลายพันธุ์แบบสุ่มที่มีมากกว่า 10^6 ได้รับการคัดกรองแล้ว
2) การออกแบบกึ่งเหตุผลและเทคโนโลยีไมโครเพลตถูกนำมาใช้เพื่อคัดกรองไลบรารีที่อิ่มตัวในสถานที่ ทั้งสองวิธีให้ผลกลายพันธุ์ RNA โพลีเมอเรส T7 ของ dsRNA ต่ำ เมื่อพิจารณาถึงเนื้อหาของ dsRNA ในขณะที่มั่นใจว่าตัวบ่งชี้อื่น ๆ จะไม่ลดลง (เช่น ความสมบูรณ์/ประสิทธิภาพ/ผลผลิตของการปิดฝา ฯลฯ) มีการเลือกสารกลายพันธุ์หลายตัว และสารหนึ่งที่มีชื่อว่า CleaScrip™ T7 ถูกนำมาใช้สำหรับการใช้งานเชิงพาณิชย์
ข้อมูลผลิตภัณฑ์
จากสถานการณ์การใช้งานความยาวที่แตกต่างกัน พบว่า RNA Polymerase T7 ที่มี dsRNA ต่ำมีการลดลงอย่างมีนัยสำคัญเมื่อเปรียบเทียบกับทั้ง WT T7 และผลิตภัณฑ์คู่แข่ง ในขณะที่ยังคงมั่นใจได้ว่าผลผลิตและความสมบูรณ์จะไม่ลดลง
| ความยาวของชิ้นส่วน | T7 RNA โพลา | ผลผลิต(มก./มล.- |
ความซื่อสัตย์(-- | ปริมาณ dsRNA (ng ของ dsRNA ที่ผลิตต่อ 1ug ของ RNA) |
| 4K | T7-WT | 12.4 | 88.3 | 0.4273 |
| เคลียสคริป™ ที 7 | 12.1 | 89.9 | 0.0129 | |
| บริษัท เอ | 11.0 | 87.8 | 0.0323 | |
| 9พัน | T7-WT | 9.5 | 81.9 | 2.9180 |
| เคลียสคริป™ ที 7 | 9.0 | 82.0 | 0.0379 | |
| บริษัท เอ | 7.2 | 78.7 | 0.1805 |
โดยใช้ ความเข้มข้นของแคปที่ 2.5 มิลลิโมลาร์ ยังคงสามารถบรรลุประสิทธิภาพการแคปที่ยอดเยี่ยมสำหรับชิ้นส่วนที่มีความยาวต่างกันเมื่อเทียบกับ WT นอกจากนี้ ยังสังเกตเห็นประสิทธิภาพการแสดงออกของโปรตีนที่เหนือกว่าในระดับเซลล์อีกด้วย
| อินพุตอนาล็อกแบบแคป（เอ็มเอ็ม- | ประสิทธิภาพการจำกัด（--4K | |
| ว.ว. | dsRNA ต่ำ | |
| 10 | 100 | 100 |
| 5 | 100 | 100 |
| 2.5 | 100 | 100 |
ได้มีการยื่นสิทธิบัตรในประเทศสหรัฐอเมริกาแล้ว
ข้อมูลสินค้า
| ชื่อสินค้า | หมายเลขแคตตาล็อก | ข้อมูลจำเพาะ | ปริมาณ |
| เคลียสคริปทีเอ็ม โพลิเมอร์อาร์เอ็นเอ T7 (dsRNA ต่ำ 250 U/μL) | 10628ES | 100 /2500 /25,000คู | 400 ไมโครลิตร/10 มล./100 มล. |
| เคลียสคริปทีเอ็ม T7 RNA Polymerase เกรด GMP (dsRNA ต่ำ 250 U/μL) | 10629ES | 100 /2500 /25,000คู | 400 ไมโครลิตร/10 มล./100 มล. |