คำอธิบาย
Quick T4 DNA Ligase เป็นผลิตภัณฑ์เอนไซม์ชนิดเดียวที่สามารถใช้ผูกชิ้นส่วน DNA และอะแดปเตอร์ในกระบวนการสร้างไลบรารี NGS ผลิตภัณฑ์นี้ได้รับการตรวจสอบด้วยการจัดลำดับข้อมูลปริมาณสูงและมีคุณภาพดีเยี่ยม สำหรับลูกค้าที่ไม่ต้องการปรับระบบทดลอง ขอแนะนำให้ซื้อ Hieff NGSTM Fast-Pace DNA Ligation Module (Cat#12607)
ส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์
| หมายเลขส่วนประกอบ | ส่วนประกอบ | 10301ES40 | 10301ES42 |
| 10301-ก | ดีเอ็นเอไลเกส T4 ด่วน (400 U/µL) | 100 ไมโครลิตร | 1 มล. |
| 10301-ข | บัฟเฟอร์ไลเกสดีเอ็นเอ T4 10 × | 250 ไมโครลิตร | 2×1,250 µL |
การขนส่งและการเก็บรักษา
ผลิตภัณฑ์นี้จัดส่งพร้อมถุงน้ำแข็งและสามารถเก็บรักษาที่อุณหภูมิ -20°C ได้นานถึง 2 ปี
คำจำกัดความของหน่วย
ในระบบปฏิกิริยาการเชื่อมต่อ 20 μL เมื่อทำปฏิกิริยากับ λDNA-Hind Ⅲ ปริมาณ 6 μg ที่อุณหภูมิ 16℃ เป็นเวลา 30 นาที ปริมาณเอนไซม์ที่จำเป็นในการเชื่อมต่อชิ้นส่วน DNA มากกว่า 50% จะถูกกำหนดให้เป็นหนึ่งหน่วย (U)
ข้อควรระวัง
1. หากเกิดการตกตะกอนในปริมาณเล็กน้อยเมื่อบัฟเฟอร์กำลังละลาย โปรดคว่ำและผสมให้เข้ากันก่อนใช้งาน
2. เพื่อความปลอดภัยและสุขภาพของคุณ โปรดสวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งขณะผ่าตัด
3. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น!
คำแนะนำ
1. ชุดสร้างห้องสมุด DNA กระแสหลักในปัจจุบันโดยทั่วไปจะไม่ได้รับการทำให้บริสุทธิ์หลังจากการซ่อมแซมปลายและการบำบัด A-Tailing และทำการผูกอะแดปเตอร์โดยตรง โปรดดูการเตรียมการสำหรับระบบปฏิกิริยาต่อไปนี้ วอร์เท็กซ์ให้ทั่ว ปั่นสั้นๆ และฟักที่อุณหภูมิ 20°C เป็นเวลา 15 นาที
| ส่วนประกอบ | ปริมาตร (μL) |
| ดีเอ็นเอหาง dA | 60 |
| บัฟเฟอร์ไลเกสดีเอ็นเอ T4 10 × | 10 |
| 50% PEG 6000 | 10* |
| อะแดปเตอร์ดีเอ็นเอ | เอ็กซ์** |
| ดีเอ็นเอไลเกส T4 ด่วน | 1-5*** |
| ดีดีเอชทูโอ | สูงถึง 100 |
[หมายเหตุ]: *ชุดนี้ไม่แถม PEG 6000 50% คุณต้องเตรียมมาเอง
**ดูจำนวนอะแดปเตอร์ได้ในตารางต่อไปนี้
***สามารถเพิ่มปริมาณ Quick T4 DNA Ligase ที่ใช้ได้ 1-5 μL ตามความจำเป็น
2. คุณภาพและความเข้มข้นของอะแดปเตอร์ที่ใช้ส่งผลโดยตรงต่อประสิทธิภาพการรัดและผลผลิตของไลบรารี การใช้อะแดปเตอร์มากเกินไปอาจทำให้ได้ไดเมอร์ของอะแดปเตอร์มากขึ้น ในขณะที่การใช้ที่น้อยลงอาจส่งผลต่อประสิทธิภาพการรัดและผลผลิตของไลบรารี ตารางต่อไปนี้แสดงจำนวนอะแดปเตอร์ที่แนะนำสำหรับใช้ในสถานการณ์อินพุต DNA ที่แตกต่างกันโดยใช้ชุดนี้
| อินพุตดีเอ็นเอ | อะแดปเตอร์: อินพุต DNA (อัตราส่วนโมลาร์) | อินพุตดีเอ็นเอ | อะแดปเตอร์: อินพุต DNA (อัตราส่วนโมลาร์) |
| 1 ไมโครกรัม | 10:1 | 50 นาโนกรัม | 100:1 |
| 500 นาโนกรัม | 20:1 | 25 นาโนกรัม | 200:1 |
| 250 นาโนกรัม | 40:1 | 1 นาโนกรัม | 200:1 |
| 100 นาโนกรัม | 100:1 | 500 หน้า | 400:1 |
[หมายเหตุ]: อินพุตโมล DNA (pmol) ≈ อินพุต DNA (ng)/ [0.66 × อินพุตความยาวเฉลี่ยของ DNA (bp)]
ตัวอย่างการคำนวณการเชื่อมต่ออะแดปเตอร์: ควรเพิ่มอะแดปเตอร์เท่าใดเมื่อ DNA อินพุตมีขนาด 100 นาโนกรัม และความยาวคือ 300 bp?
ขั้นตอนที่ 1: คำนวณจำนวนโมลของ DNA อินพุต สูตร: โมล DNA อินพุต (pmol)≈ DNA อินพุต(ng)/ [0.66 × ความยาวเฉลี่ยของ DNA อินพุต (bp)]; โมล DNA อินพุต (pmol)=100 ÷ (0.66×300) = 0.5 pmol;
ขั้นตอนที่ 2: ตามตารางด้านบน ให้คำนวณจำนวนโมลของอะแดปเตอร์ที่เพิ่มเข้าไป เมื่อ DNA อินพุตคือ 100ng อัตราส่วนโมลของอะแดปเตอร์: DNA อินพุตคือ 100:1 และจำนวนโมลของอะแดปเตอร์ที่เพิ่มเข้าไป = 100×0.5 pmol = 50 pmol
ขั้นตอนที่ 3: คำนวณปริมาตรของอะแดปเตอร์ที่เติมเข้าไป ความเข้มข้นของอะแดปเตอร์ = 15 μmol/L (หากคุณใช้อะแดปเตอร์ของบริษัทอื่น คุณต้องกำหนดความเข้มข้นตามคำแนะนำของอะแดปเตอร์นั้น) ปริมาตรของอะแดปเตอร์ที่เติมเข้าไป = โมลของอะแดปเตอร์ที่เติมเข้าไป (50 pmol) ÷ ความเข้มข้นของอะแดปเตอร์ (15 μmol/L) = 3.34 μL (หมายเหตุ: 15 μmol/L = 15 pmol/ μL)
โดยสรุป ปริมาตรที่สามารถเพิ่มอะแดปเตอร์ได้คือ 3.4 μL (หมายเหตุ: ปริมาตรการเติมสูงสุดของอะแดปเตอร์จะไม่เกิน 5 μL)
บัฟเฟอร์เอเอส
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม