ไฮแฟร์™ AdvanceFast 1st Strand cDNA Synthesis Kit (No Dye) คือชุดถอดรหัสย้อนกลับอย่างรวดเร็วที่พัฒนาขึ้นจาก Hifair™ ชุดสังเคราะห์ cDNA III 1st Strand (ไม่มีสีย้อม) เหมาะสำหรับการขยาย PCR และการทดลอง RT-qPCR เมื่อเทียบกับ Hifair™ ชุดสังเคราะห์ cDNA III 1st Strand (ไม่มีสีย้อม) มีอัตราการตรวจจับที่เสถียร ความจำเพาะ และการรับประกันผลผลิต โดยเวลาถอดรหัสย้อนกลับทั้งหมดอาจลดลงเหลือต่ำกว่า 6 นาที ทำให้ระยะเวลาการทดลองสั้นลงอย่างมาก

ชุดประกอบด้วย gDNA Digester Mix ซึ่งสามารถขจัดการปนเปื้อนของ DNA จีโนมที่เหลืออยู่ในเทมเพลต RNA ได้ ทำให้มั่นใจได้ว่าผลลัพธ์ที่ตามมาจะน่าเชื่อถือยิ่งขึ้น ชุดประกอบด้วยไพรเมอร์สังเคราะห์ cDNA สองประเภท ได้แก่ ไพรเมอร์สุ่ม N6 และโอลิโก (dT)₁₈ผู้ใช้สามารถเลือกได้ระหว่าง Random Primers N6, Oligo (dT)₁₈หรือไพรเมอร์เฉพาะยีนเป็นไพรเมอร์การถอดรหัสย้อนกลับตามความต้องการ ผลิตภัณฑ์ cDNA สายเดี่ยวที่สังเคราะห์ขึ้นสามารถใช้โดยตรงสำหรับปฏิกิริยา PCR หรือ qPCR ในภายหลัง

ข้อมูลจำเพาะ

ส่วนประกอบ

พื้นที่จัดเก็บ

ควรเก็บผลิตภัณฑ์นี้ไว้ที่ -25~-15℃ เป็นเวลา 1 ปี.

คำแนะนำ

1. หากการทดลองต้องกำจัด DNA จีโนมที่เหลือ

1）การย่อย gDNA

เตรียมส่วนผสมต่อไปนี้ในหลอดเหวี่ยงที่ปราศจาก RNase แล้วบีบเบาๆ เพื่อผสมให้เข้ากัน ฟักที่อุณหภูมิ 42℃ เป็นเวลา 2 นาที

* ขอแนะนำว่าปริมาณอินพุตของ Total RNA ไม่ควรเกิน 2 μg หากระดับการแสดงออกของยีนเป้าหมายต่ำ สามารถเพิ่มปริมาณอินพุตได้สูงสุด 5 μg Total RNA

2）การเตรียมระบบปฏิกิริยาการถอดรหัสย้อนกลับ (ระบบ 20 μL)

- สามารถปรับปริมาณไพรเมอร์ได้ตามปริมาณอินพุตเทมเพลต หากใช้ผลิตภัณฑ์การถอดรหัสย้อนกลับสำหรับการทดลอง qPCR สามารถเติมไพรเมอร์แบบสุ่มลงในระบบได้ตามปริมาณที่แนะนำ

** ขอแนะนำให้เติม 4× Hifair™AdvanceFast SuperMix (No Dye) ก่อน ผสมให้เข้ากัน แล้วจึงเติมไพรเมอร์การถอดรหัสย้อนกลับเพื่อให้แน่ใจว่าไพรเมอร์จะไม่ได้รับผลกระทบจาก gDNA Digester

3）การตั้งค่าขั้นตอนการถอดเสียงย้อนกลับ

- สำหรับเทมเพลตที่มีเนื้อหา GC สูงหรือเทมเพลตที่ซับซ้อน สามารถเพิ่มอุณหภูมิการถอดรหัสย้อนกลับเป็น 60℃ ได้

** ผลิตภัณฑ์นี้สามารถสังเคราะห์ลำดับ cDNA ที่มีขนาดต่ำกว่า 14 kb ได้ หากคุณต้องการผลิตภัณฑ์ cDNA ที่ยาวขึ้น คุณสามารถขยายเวลาการถอดรหัสย้อนกลับได้อย่างเหมาะสม

2. หากการทดลองไม่จำเป็นต้องมีการกำจัดดีเอ็นเอจีโนม

1）การเตรียมระบบปฏิกิริยาการถอดรหัสย้อนกลับ (ระบบ 20 μL)

- ขอแนะนำว่าปริมาณอินพุตของ Total RNA ไม่ควรเกิน 2 μg หากระดับการแสดงออกของยีนเป้าหมายต่ำ สามารถเพิ่มปริมาณอินพุตได้สูงสุด 5 μg ของ Total RNA

** สามารถปรับปริมาณไพรเมอร์ได้ตามปริมาณอินพุตเทมเพลต หากใช้ผลิตภัณฑ์การถอดรหัสย้อนกลับสำหรับการทดลอง qPCR สามารถเติมไพรเมอร์แบบสุ่มลงในระบบได้ตามปริมาณที่แนะนำ

2）การตั้งค่าขั้นตอนการถอดเสียงแบบย้อนกลับ

- สำหรับเทมเพลตที่มีเนื้อหา GC สูงหรือเทมเพลตที่ซับซ้อน สามารถเพิ่มอุณหภูมิการถอดรหัสย้อนกลับเป็น 60℃ ได้

** ผลิตภัณฑ์นี้สามารถสังเคราะห์ลำดับ cDNA ที่มีขนาดต่ำกว่า 14 kb ได้ หากคุณต้องการผลิตภัณฑ์ cDNA ที่ยาวขึ้น คุณสามารถขยายเวลาการถอดรหัสย้อนกลับได้อย่างเหมาะสม

หมายเหตุ

1. การดำเนินการทั้งหมดควรดำเนินการบนน้ำแข็งและควรดำเนินการในลักษณะหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนของ RNase
2. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น
3. โปรดปฏิบัติงานโดยสวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง เพื่อความปลอดภัยของคุณ

เอกสาร: