คำอธิบาย
ไฮแฟร์™ ชุด RT-qPCR ขั้นสูงแบบขั้นตอนเดียวเป็นชุดอุปกรณ์สำหรับวัดปริมาณฟลูออเรสเซนต์โดยใช้สีย้อม SYBR Green I โดยใช้ไพรเมอร์เฉพาะยีน การถอดรหัสย้อนกลับและปฏิกิริยา qPCR เสร็จสมบูรณ์ในหลอดเดียว ไม่จำเป็นต้องเปิดฝาและปิเปตซ้ำหลายครั้ง ช่วยปรับปรุงประสิทธิภาพการทดสอบและลดความเสี่ยงต่อการปนเปื้อนได้อย่างมาก สำหรับตัวอย่าง RNA ชุดอุปกรณ์นี้ใช้วัสดุ Hifair ที่ทนความร้อน™ V Reverse Transcriptase เพื่อการสังเคราะห์ cDNA ที่มีประสิทธิภาพและ UNICON™ โพลิเมอเรสดีเอ็นเอ HotStart Taq สำหรับการขยายปริมาณ ภายใต้ระบบบัฟเฟอร์ที่ปรับให้เหมาะสม ความไวของชุดทดสอบสามารถสูงถึง 0.1 pg สำหรับเป้าหมายที่มีการแสดงออกสูงและสูงถึง 1 pg สำหรับเป้าหมายที่มีการแสดงออกปานกลาง และชุดทดสอบนี้ยังเหมาะสำหรับการขยายและการวัดปริมาณตัวอย่างดีเอ็นเอ ชุดทดสอบนี้เหมาะสำหรับการขยายและการวัดปริมาณตัวอย่างดีเอ็นเอ ช่วยให้ตรวจจับและวัดปริมาณกรดนิวคลีอิกจากตัวอย่างพืชและสัตว์ต่างๆ เซลล์และจุลินทรีย์ได้อย่างละเอียดอ่อน
ข้อมูลจำเพาะ
เลขที่แมว | 11175ES20 / 11175ES70 |
ขนาด | 20 ที/200 ที |
ส่วนประกอบ
ส่วนประกอบ หมายเลข | ชื่อ | 11175ES20 | 11175ES70 |
11175-ก | 2× ไฮแฟร์™ บัฟเฟอร์ SG ขั้นสูง | 250 ไมโครลิตร | 2×1.25 มล. |
11175-ข | ไฮแฟร์™ เอนไซม์ผสม UH ขั้นสูง | 20 ไมโครลิตร | 200 ไมโครลิตร |
11175-ค | อาร์เอ็นเอส ฟรี เอช2โอ้ | 250 ไมโครลิตร | 2×1.25 มล. |
พื้นที่จัดเก็บ
ควรเก็บผลิตภัณฑ์นี้ไว้ที่ -25~-15℃ ห่างออกไป จาก แสงสว่าง สำหรับ 1 ปี.
คำแนะนำ
- ปฏิกิริยา ระบบ การกำหนดค่า*****
ส่วนประกอบ | ปริมาตร (μL)**** | ปริมาตร (μL) | ความเข้มข้นขั้นสุดท้าย |
2× ไฮแฟร์™ บัฟเฟอร์ SG ขั้นสูง* | 12.5 | 25 | 1× |
ไฮแฟร์™ เอนไซม์ผสม UH ขั้นสูง | 1 | 2 | - |
ไพรเมอร์ฟอร์เวิร์ด (10 μmol/L)** | 0.5 | 1 | 0.2 ไมโครโมลต่อลิตร |
ไพรเมอร์ย้อนกลับ (10 μmol/L)** | 0.5 | 1 | 0.2 ไมโครโมลต่อลิตร |
อาร์เอ็นเอ*** | เอ็กซ์ | เอ็กซ์ | - |
อาร์เอ็นเอส ฟรี เอช2โอ้ | ถึง 25 | ถึง 50 | - |
* รุ่น Low Rox และรุ่นที่ไม่มีการแก้ไข Rox จะถูกเตรียมโดยตรงตามระบบปฏิกิริยาข้างต้น เมื่อใช้รุ่น High Rox ให้เติม Hieff™ SP High Rox ลงในบัฟเฟอร์ Hifair™ Advanced SG 2 x ที่อัตราส่วน 1:250 v/v ผสมให้เข้ากันแล้วปั่นเหวี่ยง รุ่น 2× Hifair™ บัฟเฟอร์ SG ขั้นสูงพร้อม Hieff™ SP High Rox ไม่ส่งผลต่อการใช้โมเดลการแก้ไข Low Rox และ No Rox
- ความเข้มข้นของไพรเมอร์สุดท้ายคือ 0.2 μmol/L ซึ่งสามารถปรับระหว่าง 0.1 และ 1 μmol/L ตามความเหมาะสมได้
*** สารเคมีมีความไวสูงมาก โดยมีปริมาณ RNA ทั้งหมดอยู่ในช่วง 1 pg-1 μg และการทดสอบตัวอย่างของมนุษย์แสดงให้เห็นว่าปริมาณอินพุตที่เหมาะสมคือ 1 pg-100 ng โดยควบคุมค่า Ct โดยรวมในช่วง 15-30 ตามความเหมาะสม
- ขอแนะนำให้ใช้ 20 μL หรือ 50 μL เพื่อให้แน่ใจถึงความถูกต้องและสามารถทำซ้ำได้ของการขยายยีนเป้าหมาย
***** โปรดเตรียมอุปกรณ์ให้พร้อมในม้านั่งที่สะอาดเป็นพิเศษ และใช้หัววัดและหลอดปฏิกิริยาที่ไม่มีสารตกค้างของนิวคลีเอส แนะนำให้ใช้หัววัดที่มีตลับกรอง หลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามและการปนเปื้อนของละอองลอย
2)โปรแกรมการตอบสนอง
วงจร ก้าว | อุณหภูมิ | เวลา | วงจร |
การถอดความย้อนกลับ | 50℃* | 6 นาที | 1 |
การเปลี่ยนสภาพเบื้องต้น | 95℃ | 5 นาที | 1 |
ปฏิกิริยาการขยาย | 95℃ | 15 วินาที | 40 |
60℃** | 30 วินาที | ||
ขั้นตอนการโค้งหลอมละลาย | ค่าเริ่มต้นของเครื่องมือ | 1 |
*สามารถเลือกอุณหภูมิการถอดรหัสย้อนกลับได้ระหว่าง 50-55°C ตามความต้องการในการทดลอง สำหรับตัวอย่าง DNA สามารถละเว้นขั้นตอนการถอดรหัสย้อนกลับได้
- ในกรณีพิเศษ สามารถปรับอุณหภูมิการอบ/การต่อขยายได้ตามค่า Tm ของไพรเมอร์ โดยแนะนำที่ 60°C
3)รุ่นที่ใช้ได้
รุ่นเครื่องมือที่ไม่ต้องสอบเทียบ Rox:
ไบโอ-ราด: CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Eppendorf: Mastercycler ep realplex, realplex 2 s;
คิอาเก้น : คอร์เบตต์ โรเตอร์-ยีน คิว, โรเตอร์-ยีน 3000, โรเตอร์-ยีน 6000;
Roche Applied Science: LightCycler 480, LightCycler20, ไลท์ไซเกอร์ 96;
เทอร์โม ไซเอนทิคัล : PikoReal Cycler; เซเฟอิด : SmartCycler; อิลลูมินา : Eco qPCR;
รุ่นที่ใช้ได้กับ Rox ต่ำ:
ABI 7500, 7500 เร็ว, ViiA7, QuantStudio 3 และ 5, QuantStudio 6, 7, 12k Flex;
สตราเทจีน MX3000P, MX3005P, MX4000P;
รุ่นที่ใช้ Rox สูงได้*:
ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT รวดเร็ว ขั้นที่หนึ่ง ขั้นที่หนึ่งบวก
- สำหรับรุ่น High Rox โปรดทราบว่าควรเพิ่ม Hieff™ SP High Rox ตามสัดส่วนกับ Hifair 2 เท่า™ บัฟเฟอร์ SG ขั้นสูงก่อนการใช้งาน
หมายเหตุ
- ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น
- โปรดปฏิบัติงานโดยสวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง เพื่อความปลอดภัยของคุณ
เอกสาร:
เอกสารข้อมูลความปลอดภัย
11175อีเอส-ซี-MSDS-HB230927.PDF
คู่มือการใช้งาน
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม