คำอธิบายสินค้า

ชุด Hieff NGS™ mRNA Isolation Master Kit เป็นชุดบีดแม่เหล็กที่ออกแบบมาโดยเฉพาะสำหรับการทำให้บริสุทธิ์ของ mRNA บีดจับ mRNA คือไมโครสเฟียร์พาราแมกเนติกขนาดไมโครเมตรที่จับคู่ด้วยหาง Oligo dT (โพลีเอ) ซึ่งสามารถใช้แยก mRNA จาก 10 นาโนกรัมถึง 4 ไมโครกรัมของ RNA ที่สมบูรณ์ได้โดยการจับกับ mRNA ด้วยหางโพลีเอ

ข้อมูลจำเพาะ

ส่วนประกอบ

พื้นที่จัดเก็บ

ควรเก็บผลิตภัณฑ์ที่อุณหภูมิ 2 ~ 8℃ เป็นเวลา 1 ปี และหลีกเลี่ยงการแช่แข็ง

คำแนะนำ

1. วัสดุที่จำเป็นไม่รวมอยู่ด้วย

ชั้นวางแม่เหล็ก หลอด PCR แบบไม่มีนิวคลีเอส

2. การดำเนินการ

1) ปรับสมดุลลูกปัดจับ mRNA ที่อุณหภูมิห้อง (~ 30 นาที)

2) เจือจาง RNA ทั้งหมด 10 ng – 4 μg ให้เป็น 50 μL ด้วยน้ำปราศจากนิวคลีเอสในหลอด PCR ปราศจากนิวคลีเอส แล้ววางบนน้ำแข็ง

3) ผสมลูกปัดแม่เหล็กโดยคว่ำหรือเขย่าด้วยเครื่องวอร์เท็กซ์ เติมลูกปัดแม่เหล็ก 50 μL ลงในตัวอย่าง RNA ทั้งหมด 50 μL แล้วปิเปต 6 ครั้งเพื่อผสมให้เข้ากัน หมุนลงมาที่ก้นหลอดสักครู่

4) ฟักส่วนผสมของลูกปัดแม่เหล็กและ RNA ในเครื่องปั่นความร้อน และรันโปรแกรมต่อไปนี้: 65°C 5 นาที; 25°C 5 นาที; 25°C ค้างไว้

5) วางท่อบนแม่เหล็ก ชั้นวางของ เป็นเวลา 5 นาที เพื่อแยก mRNA ออกจาก total RNA นำส่วนที่เป็นของเหลวใสออกอย่างระมัดระวัง

6) ถอดท่อออกจากแม่เหล็ก ชั้นวางของ และชุบเม็ดแม่เหล็กด้วยบัฟเฟอร์ล้างเม็ดแม่เหล็กขนาด 200 μL ปิเปตปริมาตรทั้งหมดขึ้นและลง 6 ครั้งเพื่อผสมให้เข้ากัน วางหลอดทดลองบนแม่เหล็ก ชั้นวางของ เป็นเวลา 5 นาที แล้วค่อยๆ ตักส่วนที่เป็นของเหลวใสออก

7) ทำซ้ำขั้นตอนที่ 6

8) ถอดท่อออกจากแม่เหล็ก ชั้นวางของเติมบัฟเฟอร์ Tris ปริมาตร 50 μL เพื่อทำให้เม็ดแม่เหล็กกลับมาแขวนลอยอีกครั้ง และปิเปต 6 ครั้งเพื่อผสมให้เข้ากัน

9) ใส่ตัวอย่างในเครื่องปั่นความร้อนและรันโปรแกรมต่อไปนี้เพื่อชะ mRNA ออก: 80°C 2 นาที; 25°C ค้างไว้

10) นำตัวอย่างออกจากเครื่องปั่นความร้อน เติมบัฟเฟอร์ยึดลูกปัด 50μL และปิเปตซ้ำๆ 6 ครั้งเพื่อผสมให้เข้ากัน

11) ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาทีเพื่อให้ mRNA จับกับลูกปัดแม่เหล็ก

12) วางท่อบนแม่เหล็ก พักไว้ 5 นาที แล้วค่อยๆ ตักส่วนที่เป็นของเหลวใสออก

[หมายเหตุ]: จำเป็นต้องใช้ปิเปตขนาด 10 μL เพื่อดูดของเหลวที่เหลือ

13) ถอดท่อออกจากแม่เหล็ก ชั้นวางของ, ชุบลูกปัดแม่เหล็กด้วยบัฟเฟอร์ล้างลูกปัด 200 μL ปิเปตซ้ำๆ 6 ครั้งเพื่อผสมให้เข้ากัน วางหลอดบนแม่เหล็ก ชั้นวางของ ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที นำของเหลวส่วนบนออกและทิ้งทั้งหมด

14) การชะ mRNA ขั้นสุดท้าย

แผนการ ก: สำหรับปฏิกิริยาการถอดรหัสสำรอง

ถอดท่อออก จากแม่เหล็ก ชั้นวางของเติมน้ำปราศจากนิวคลีเอส 12μL และปิเปตซ้ำๆ 6 ครั้งเพื่อผสมให้เข้ากัน วางท่อในเครื่องปั่นความร้อน แล้วรันโปรแกรมต่อไปนี้: 80°C 2 นาที จากนั้นนำท่อไปวางบนแม่เหล็ก ชั้นวางของ ทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้อง 5 นาทีทันที หลังจากทำให้สารละลายใสแล้ว ให้ดูดของเหลวส่วนบน 10 μL อย่างระมัดระวังลงในหลอด PCR ปลอดนิวคลีเอสใหม่

โครงการ ข- สำหรับอาร์เอ็นเอ การจัดเตรียมห้องสมุด

เติม Frag/Primer Buffer ในปริมาณที่เหมาะสมตามคำแนะนำในชุดอุปกรณ์ที่เกี่ยวข้องสำหรับการสร้างห้องสมุด

บันทึก

1. เพื่อความปลอดภัยและสุขภาพของคุณ โปรดสวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งขณะผ่าตัด
2. เพื่อการใช้วิจัยเท่านั้น
3. อย่าลืมอุ่นให้ถึงอุณหภูมิห้องและผสมให้เข้ากันก่อนใช้ลูกปัดแม่เหล็ก มิฉะนั้น ประสิทธิภาพการกู้คืนของตัวอย่างอาจได้รับผลกระทบ
4. การดำเนินการจะต้องปราศจากการปนเปื้อนของ RNase และกรดนิวคลีอิกอย่างเคร่งครัด
5. เมื่อนำผลิตภัณฑ์นี้ไปใช้ร่วมกับสารเคมีอื่น โปรดปฏิบัติตามคำแนะนำในการทดลองเฉพาะในการใช้งาน
6. ในการที่จะได้รับผลลัพธ์การบริสุทธิ์ที่ดี คุณต้องมีความสมบูรณ์ของ RNA ทั้งหมดที่ดีและต้องแน่ใจว่าค่า RIN >7.0