คำอธิบาย
โพรบการพร่อง mRNA ของโกลบิน (มนุษย์) ได้รับการออกแบบมาเพื่อกำจัด mRNA ของ Globin ของมนุษย์ สามารถกำจัด mRNA ของ Globin จากผู้ใหญ่ ทารก และตัวอ่อนได้อย่างมีประสิทธิภาพนิค แหล่งที่มา ได้แก่ HBA1/2, HBB, HBD, HBM, HBG1/2, HBE1, HBQ1 และ HBZ ผลิตภัณฑ์นี้ใช้ร่วมกับ Hieff NGSทีเอ็ม ชุด MaxUp rRNA Depletion Kit (มนุษย์/หนู/หนูทดลอง) (
การประยุกต์ใช้ผลิตภัณฑ์
เหมาะสำหรับตัวอย่าง RNA ของมนุษย์ทั้งหมด 100 ng~1 μg- ทรัพยากรเลือดของหนูและหนูทดลอง และสำหรับตัวอย่าง RNA ที่ยังคงสมบูรณ์หรือย่อยสลายเพียงบางส่วน
ส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์
| ชื่อสินค้า | ข้อมูลจำเพาะ | |
| โพรบโกลบิน (มนุษย์) | 12806ES24 | 24 ต |
| 12806ES96 | 96ต |
การขนส่งและการเก็บรักษา
ส่วนประกอบทั้งหมดจัดส่งพร้อมน้ำแข็งแห้งและสามารถจัดเก็บที่อุณหภูมิ -20°C ได้นานหนึ่งปี-
รูป
RNA ทั้งหมดในเลือดมนุษย์ขนาด 500 นาโนกรัมและ 100 นาโนกรัมได้รับการกำจัดด้วย rRNA และการกำจัดด้วย rRNA และ Globin ร่วมกันตามลำดับ หลังจากการสร้างห้องสมุดและการจัดลำดับแล้ว ได้มีการเปรียบเทียบเนื้อหาของ mRNA ของ Globin
ข้อควรระวัง
1. โปรดใช้วัสดุสิ้นเปลืองที่ปราศจากการปนเปื้อนของ RNase และทำความสะอาดพื้นที่ทดลองเป็นประจำ ขอแนะนำให้ใช้ RNAZap ของ ThermoFisherทีเอ็ม สเปรย์กำจัดกรดนิวคลีอิกประสิทธิภาพสูงเพื่อกำจัดการปนเปื้อน RNase
2. ตัวอย่าง RNA ควรจะปราศจากการปนเปื้อนของ DNA ของจีโนม หากยังมี gDNA อยู่ในตัวอย่าง ควรย่อยด้วย DNase I และทำให้บริสุทธิ์ก่อนใช้งาน
3. ปริมาตรอินพุตสูงสุดของตัวอย่าง RNA คือ 10 μL หากปริมาตรตัวอย่างมีขนาดใหญ่ สามารถทำให้เข้มข้นก่อนได้
4. เพื่อความปลอดภัยและสุขภาพของคุณ โปรดสวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งขณะผ่าตัด
5. เพื่อการวิจัยเท่านั้น!
คำแนะนำ
1. โพรบไฮบริดิเซชันเป็นอาร์เอ็นเอ
1.1 เจือจาง RNA ทั้งหมด 10 นาโนกรัม–1 ไมโครกรัมด้วยน้ำปราศจากนิวคลีเอสจนได้ปริมาตรสุดท้าย 10 ไมโครลิตรในหลอด PCR เก็บ RNA ไว้ บนน้ำแข็ง
1.2 ประกอบ ปฏิกิริยาไฮบริดิเซชัน RNA/Probe ต่อไปนี้ บนน้ำแข็ง ตามตารางที่ 1
ตารางที่ 1 ปฏิกิริยาไฮบริดิเซชัน RNA/Probe
| ส่วนประกอบ | ปริมาตร (μL) |
| บัฟเฟอร์ไฮบริดิเซชัน | 3 |
| โพรบมิกซ์ (เอช/เอ็ม-อาร์- | 1 |
| โพรบโกลบิน (มนุษย์) | 1 |
| อาร์เอ็นเอทั้งหมด | 10 (100 นาโนกรัม ~ 1 ไมโครกรัม) |
| ทั้งหมด | 15 |
1.3 ผสมให้เข้ากันโดยค่อยๆ บีบขึ้นลงอย่างน้อย 10 ครั้ง หมุนหลอดลงในไมโครเซนตริฟิวจ์สั้นๆ เพื่อรวบรวมของเหลวจากด้านข้างของหลอด
1.4 วางหลอดในเครื่องเทอร์โมไซเคิล และรันโปรแกรมต่อไปนี้ในตารางที่ 2 โดยตั้งฝาที่อุ่นไว้ที่ 105°C
ตารางที่ 2 โปรแกรมปฏิกิริยาของไฮบริดิเซชัน RNA/Probe
| อุณหภูมิ | ระยะเวลา |
| ฝาร้อน 105°C | บน |
| 95 องศาเซลเซียส | 2 นาที |
| 95°C-22°C | 0.1 องศาเซลเซียส/วินาที |
| 22 องศาเซลเซียส | 5 นาที |
| 4°C | ถือ |
2. การย่อยด้วย RNase H
2.1 ประกอบปฏิกิริยาการย่อย RNase H ต่อไปนี้ บนน้ำแข็ง ตามตารางที่ 3
ตารางที่ 3 ปฏิกิริยาการย่อย RNase H
| ส่วนประกอบ | ปริมาตร (μL) |
| บัฟเฟอร์ RNase H | 3 |
| อาร์เอ็นเอส เอช | 2 |
| RNA ไฮบริด (ขั้นตอนที่ 1.4) | 15 |
| ทั้งหมด | 20 |
2.2 ผสมให้เข้ากันโดยค่อยๆ บีบขึ้นลงอย่างน้อย 10 ครั้ง หมุนหลอดลงในไมโครเซนตริฟิวจ์เพื่อรวบรวมของเหลวจากด้านข้างของหลอด
2.3 วางหลอดในเครื่อง Thermocycler และรันโปรแกรมต่อไปนี้: ฝา 50°C; 37°C, 30 นาที; 4°C รอก่อน
3. ดีเอ็นเอส ฉัน การย่อยอาหาร
3.1 ประกอบปฏิกิริยาการย่อย DNase I ต่อไปนี้บนน้ำแข็งตามตารางที่ 4
ตารางที่ 4 ปฏิกิริยาการย่อยของ DNase Ⅰ
| ส่วนประกอบ | ปริมาตร (μL) |
| บัฟเฟอร์ DNase I | 27.5 |
| ดีเอ็นเอส ไอ | 2.5 |
| RNA ที่ได้รับการบำบัดด้วย RNase H (ขั้นตอนที่ 2.3) | 20 |
| ทั้งหมด | 50 |
3.2 ผสมให้เข้ากันโดยค่อยๆ บีบขึ้นลงอย่างน้อย 10 ครั้ง หมุนหลอดลงในไมโครเซนตริฟิวจ์เพื่อรวบรวมของเหลวจากด้านข้างของหลอด
3.3 วางหลอดในเครื่อง Thermocycler และรันโปรแกรมต่อไปนี้: ปิดฝา; 37°C, 30 นาที; 4°C รอก่อน
4. การทำให้บริสุทธิ์ของ RNA
4.1 ปรับสมดุล NGS ของ Hieffทีเอ็มนำ RNA Cleaner (Cat#12602) มาไว้ที่อุณหภูมิห้อง แล้วทำการแขวนลูกปัดให้สะอาดอีกครั้งโดยใช้การปั่นก่อนใช้งาน
4.2 เพิ่ม 110 µL (2.2×) ผสมลูกปัดเข้ากับสารละลาย RNA จากขั้นตอนที่ 3.3 แล้วผสมให้เข้ากันโดยการปิเปตขึ้นและลงอย่างน้อย 10 ครั้ง
4.3 ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที เพื่อจับ RNA เข้ากับลูกปัด
4.4 วางหลอดบนแท่นแม่เหล็กเพื่อแยกลูกปัดออกจากของเหลวส่วนบน เมื่อสารละลายใสแล้ว (ประมาณ 3 นาที) ให้ทิ้งของเหลวส่วนบนออก ระวังอย่าให้ปลายปิเปตสัมผัสลูกปัด
4.5 วางหลอดไว้บนขาตั้งแม่เหล็ก เติมเอธานอล 80% ที่เตรียมใหม่ 200 µL ลงในหลอด ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 30 วินาที จากนั้นทิ้งของเหลวส่วนบน ระวังอย่าให้ปลายปิเปตสัมผัสลูกปัด
4.6 ทำซ้ำขั้นตอนที่ 4.5 หนึ่งครั้งเพื่อซักรวมสองครั้ง
4.7 กำจัดเอธานอลที่เหลือด้วย 10 µL - ปลายหลอดปิเปต วางหลอดไว้บนฐานแม่เหล็กแล้วปล่อยให้ลูกปัดแห้งในอากาศประมาณ 5 นาทีโดยเปิดฝาไว้
4.8 ถอดหลอดทดลองออกจากฐานแม่เหล็ก ชะ RNA ออกจากลูกปัดโดยเติมน้ำปราศจากนิวคลีเอส 11 μL ผสมให้เข้ากันโดยปิเปตขึ้นลงอย่างน้อย 10 ครั้งและหมุนหลอดทดลองสั้นๆ
4.9 ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที วางหลอดทดลองบนฐานแม่เหล็กจนกว่าสารละลายจะใส (~ 3 นาที)
4.10 ถ่ายโอน 10 µL ของของเหลวส่วนบนลงในหลอดที่ไม่มีนิวคลีเอส
หมายเหตุ: หากคุณจำเป็นต้องหยุดที่จุดนี้ คุณสามารถเก็บตัวอย่างได้ที่อุณหภูมิ -80°C
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม