คำอธิบาย
ไฮฟ์™ T4 DNA Ligase เป็นเอนไซม์ชนิดหนึ่งของ T4 DNA Ligase เอนไซม์ชนิดนี้เหมาะสำหรับเร่งปฏิกิริยาการเชื่อมระหว่างโมเลกุลที่มีการเชื่อมติดกันหรือมีปลายทู่ เป็นผลิตภัณฑ์เอนไซม์ชนิดเดียวที่ออกแบบมาเพื่อเชื่อมชิ้นส่วน DNA และอะแดปเตอร์ระหว่างขั้นตอนการเตรียมไลบรารีในการจัดลำดับยีนรุ่นถัดไป (NGS) ความคล่องตัวของ T4 DNA Ligase ได้รับการตรวจสอบอย่างละเอียดผ่านการจัดลำดับปริมาณงานสูงและแสดงให้เห็นถึงคุณภาพที่โดดเด่น
คุณสมบัติ
- ความเที่ยงตรงสูง
- ทนความร้อน
เรียนรู้เพิ่มเติมเกี่ยวกับการพัฒนา DNA ligase T4 ที่หลากหลาย
ข้อมูลจำเพาะ
| แหล่งที่มา | อีโคไลรีคอมบิแนนท์ |
| บัฟเฟอร์เก็บข้อมูล | 50 เอ็มเอ็ม ทริส-เอชซี1,100 มิลลิโมลาร์ KC1,0.1 EDTA มิลลิโมลาร์, DTT 1 มิลลิโมลาร์, กลีเซอรอล 50%, pH 7.5士0.2 @25℃ |
| คำจำกัดความของหน่วย | ในระบบปฏิกิริยาการเชื่อมต่อที่มีปริมาณ 20 μL ปริมาณเอนไซม์ที่จำเป็นในการเร่งปฏิกิริยาการเชื่อมต่อชิ้นส่วน DNA มากกว่า 50% เมื่อ λDNA-Hind III ปริมาณ 6 μg ทำปฏิกิริยาที่อุณหภูมิ 16°C เป็นเวลา 30 นาที ถูกกำหนดให้เป็น 1 หน่วยกิจกรรม (U) |
ส่วนประกอบ
| ส่วนประกอบ | ชื่อ | 12996ES60 60KU | 12996ES62 600KU |
| 12996-ก | ไฮเอฟ® T4 DNA Ligase อเนกประสงค์ (600 U/µL) | 100 ไมโครลิตร | 1,000 ไมโครลิตร |
| 12996-ข | บัฟเฟอร์ดีเอ็นเอไลเกส 10×T4 | 500 ไมโครลิตร | 3×1500 ไมโครลิตร |
พื้นที่จัดเก็บ
ควรเก็บผลิตภัณฑ์นี้ไว้ที่ -25~-15℃ เป็นเวลา 2 ปี.
รูป
กรุณาฝากข้อความเพื่อสอบถามเกี่ยวกับข้อมูลการเปรียบเทียบประสิทธิภาพระหว่างเอนไซม์ตัวนี้กับเอนไซม์ไลเกส DNA T4 เกรดสูงและแบบธรรมดาอื่นๆ
หมายเหตุ
1. โปรดปฏิบัติงานโดยสวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง-เพื่อความปลอดภัยของคุณ
2. หากมีฝนตกเล็กน้อยในบัฟเฟอร์ ถือเป็นปรากฏการณ์ปกติ โปรดพลิกกลับและผสมบัฟเฟอร์ให้เข้ากันก่อนใช้งาน
3. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น
โปรโตคอล
1. ชุดเตรียมห้องสมุด DNA กระแสหลักในปัจจุบันที่ใช้วิธีการผูกมัดโดยทั่วไปไม่จำเป็นต้องมีขั้นตอนการทำให้บริสุทธิ์หลังจากการซ่อมแซมปลายและการแยกส่วนท้าย ชิ้นส่วน DNA จะถูกผูกมัดด้วยอะแดปเตอร์โดยตรงโดยไม่ต้องทำให้บริสุทธิ์ ชุดนี้เข้ากันได้กับกระแสหลัก ระบบซ่อมแซมปลายท่อและระบบ A-tailing ที่มีจำหน่ายในเชิงพาณิชย์สำหรับการผูกอะแดปเตอร์แบบไร้รอยต่อ
จัดเตรียมปฏิกิริยาต่อไปนี้ในหลอดไมโครเซนตริฟิวจ์บนน้ำแข็ง ผสมเบาๆ โดยการปิเปตหรือเขย่า ปั่นเหวี่ยงสั้นๆ แล้วให้ความร้อนเพื่อยุติการทำงานที่ 20°C เป็นเวลา 15 นาที
ตารางที่ 1 ระบบปฏิกิริยาสำหรับการเชื่อมต่ออะแดปเตอร์
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ-ไมโครลิตร- | ความเข้มข้นขั้นสุดท้าย |
| ดีเอ็นเอหาง dA | 60 | 1× |
| บัฟเฟอร์ดีเอ็นเอไลเกส 10×T4 | 10 | 0.1 ไมโครโมลาร์-0.5 ไมโครโมลาร์ |
| 50% PEG6000 | 12* | 1 เอ็นจี-400 เอ็นจี |
| อะแดปเตอร์ดีเอ็นเอ | 5** |
|
| 3~5*** |
| |
| น้ำที่ปราศจากนิวเคลียส | ขึ้น ถึง 100 | - |
-บันทึก-*ชุดอุปกรณ์ไม่ได้ให้สารละลาย PEG6000 50% มาด้วย คุณต้องเตรียมเอง
**กรุณาดูตาราง 2 สำหรับ จำนวนอะแดปเตอร์
***สามารถเพิ่ม T4 DNA Ligase ได้ในปริมาณ 3-5 μL ตามความต้องการ
2. ความเข้มข้นของอะแดปเตอร์ส่งผลโดยตรงต่อประสิทธิภาพการรัดและผลผลิตของห้องสมุด การใช้อะแดปเตอร์มากเกินไปอาจส่งผลให้ ใน ไดเมอร์อะแดปเตอร์มากขึ้น ในขณะที่การใช้งานน้อยอาจส่งผลต่อประสิทธิภาพการเชื่อมต่อและการผลิตไลบรารี ตารางที่ 2 แสดงรายการจำนวนอะแดปเตอร์ที่แนะนำสำหรับปริมาณ DNA อินพุตที่แตกต่างกัน
ตารางที่ 2 ปริมาณอะแดปเตอร์ที่แนะนำสำหรับ 100 pg-1 μg อินพุต DNA
| อินพุตดีเอ็นเอ | ความเข้มข้น |
| 0.1 ง | |
| 1 นาโนกรัม | 0.5 ไมโครโมลาร์ |
| 10 ง | 1 ไมโครโมลาร์ |
| 25 นาโนกรัม | 2 ไมโครโมลาร์ |
| 100 นาโนกรัม~1,000 นาโนกรัม | 10 ไมโครโมลาร์ |
-บันทึก-จำนวนอะแดปเตอร์ สามารถปรับเปลี่ยนได้ตามความต้องการตามตารางด้านบน.
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม