ไฮแฟร์™ ชุดตรวจ RT-qPCR แบบมัลติเพล็กซ์ขั้นตอนเดียว V (ยูดีจี พลัส) คือชุดทดสอบ PCR เชิงปริมาณแบบมัลติเพล็กซ์ที่ใช้ RNA เป็นแม่แบบ ในกระบวนการทดลอง จะทำการแยกยีนแบบย้อนกลับและ PCR เชิงปริมาณในหลอดเดียวกัน ซึ่งทำให้ขั้นตอนการทดลองง่ายขึ้นและลดความเสี่ยงต่อการปนเปื้อน

ในชุดนี้ cDNA สายแรกได้รับการสังเคราะห์อย่างมีประสิทธิภาพโดยใช้ Hifair ที่ทนความร้อน^{ทีเอ็ม} V Reverse Transcriptase และขยายเชิงปริมาณโดย UNICON^{ทีเอ็ม} HotStart Taq DNA Polymerase ชุดทดสอบประกอบด้วยบัฟเฟอร์ MP ที่ได้รับการปรับให้เหมาะสม ส่วนผสมเอนไซม์ ฯลฯ เป็นหลัก สารละลายบัฟเฟอร์ประกอบด้วย Mg อยู่แล้ว²⁺ และ dNTP นอกจากนี้ ยังเพิ่มปัจจัยที่สามารถยับยั้งการขยาย PCR แบบไม่จำเพาะได้อย่างมีประสิทธิภาพและปรับปรุงประสิทธิภาพการขยายของปฏิกิริยา qPCR หลายปฏิกิริยา ซึ่งสามารถรับประกันประสิทธิภาพการขยายและดำเนินปฏิกิริยาการขยายได้หลายปฏิกิริยา ระบบ dUTP/UDG ได้รับการเพิ่มเข้ามาเพื่อป้องกันความเสี่ยงของการปนเปื้อนของละอองลอยได้อย่างมีประสิทธิภาพ

คุณสมบัติ

ความไวสูง-ระบบบัฟเฟอร์ที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมอย่างระมัดระวังช่วยเพิ่มความไวในการตรวจจับเทมเพลตที่มีความเข้มข้นต่ำได้สูงสุดถึง 250 สำเนา/มล.-

ความเสถียรเหนือระดับ: ผลิตภัณฑ์ผ่านการทดสอบความเสถียรแบบเรียลไทม์เป็นเวลา 18 เดือน

ระบบป้องกันมลพิษ dUP/UDG-นำระบบป้องกันมลพิษ dUTP/UDG มาใช้เพื่อลดมลพิษจากละอองลอยในผลิตภัณฑ์อย่างมีประสิทธิภาพ ลดผลบวกปลอม และรับรองผลลัพธ์ที่แท้จริง-

รองรับโปรแกรมที่รวดเร็ว: รองรับโปรแกรมที่รวดเร็ว 40 นาทีก็สามารถให้ผลลัพธ์ได้

ส่วนประกอบ

บันทึก- 1- 2×ไฮแฟร์^{ทีเอ็ม} วีเอ็มพีบัฟเฟอร์ เป็นคำย่อของ ไฮแฟร์^{ทีเอ็ม} V บัฟเฟอร์โพรบ RT-qPCR แบบมัลติเพล็กซ์ขั้นตอนเดียว- ซึ่งรวมถึง dNTPs, dUTP, Mg2+, สารคงตัว, สารเพิ่มประสิทธิภาพ และอื่นๆ อีกมากมาย

2) ไฮแฟร์^{ทีเอ็ม} วี เอนไซม์ มิกซ์ ส่วนใหญ่ประกอบไปด้วย ไฮแฟร์ ทนความร้อน^{ทีเอ็ม} V ทรานสคริปต์ย้อนกลับ, UNICONทีเอ็ม HotStart Taq DNA โพลิเมอร์และ ยูดีแก๊ส

พื้นที่จัดเก็บ

ทีเขา ผลิตภัณฑ์ ควร เป็น เก็บไว้ ที่ -25°C~-15°C สำหรับ 18 เดือน.

คำแนะนำ

องค์ประกอบของปฏิกิริยา

บันทึก-ต้องแน่ใจว่าผสมให้เข้ากันก่อนใช้ หลีกเลี่ยงฟองอากาศมากเกินไปที่เกิดจากการสั่นอย่างรุนแรง

ก) ไพรเมอร์/โพรบ ความเข้มข้น: ไพรเมอร์ ผสมรวมไพรเมอร์มัลติเพล็กซ์ ขึ้นอยู่กับสถานการณ์ ความเข้มข้นของไพรเมอร์ที่เหมาะสมอาจอยู่ระหว่าง 0.1 ถึง 1.0 μMการผสมโพรบรวมทั้งการติดฉลากโพรบแบบมัลติเพล็กซ์กลุ่มฟลูออเรสเซนต์ โดยขึ้นอยู่กับสถานการณ์ ความเข้มข้นของโพรบที่เหมาะสมที่สุดอาจอยู่ระหว่าง 0.05 ถึง 05 ไมโครโมลาร์

c) การเจือจางเทมเพลต: qPCR มีความไวสูงและแนะนำให้เจือจางเทมเพลต ค่า Ct ควบคุมเหมาะสมระหว่าง 20 ถึง 35

ง) การเตรียมระบบ: ถอดหัวกรองออก หลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามและการปนเปื้อนของละอองลอย

โปรโตคอลการปั่นจักรยานที่ได้รับการปรับให้เหมาะสม

บันทึก-ก) รการถอดเสียงแบบย้อนกลับ: สามารถเลือกอุณหภูมิได้ 42องศาเซลเซียส หรือ 50องศาเซลเซียส ประมาณ 10-15 นาที-

ข) ปฏิกิริยาการขยาย: อุณหภูมิจะถูกปรับตามค่า Tm ของไพรเมอร์ที่ออกแบบไว้

ค) การรับสัญญาณฟลูออเรสเซนต์:กรุณากำหนดวิธีการทดลองให้เป็นไปตามคู่มือเครื่องมือ

3. แอปพลิเคชัน อุปกรณ์

อุปกรณ์ที่มีร็อกซ์-ABI 5700, 7000, 7300, 7700, 7900HT รวดเร็ว, StepOne™, StepOne Plus™

อุปกรณ์ที่มี Rox ต่ำ-ABI 7500, 7500 Fast, ViiA™7, QuantStudio™ 3 และ 5, QuantStudio™ 6,7, 12k Flex

สตราเทเจเน MX3000P™, MX3005P™, MX4000P™

อุปกรณ์ที่ไม่มี Rox-

ไบโอ-ราCFX96™, CFX384™, iCycler iQ™, iQ™5, MyiQ™, MiniOpticon™, Opticon®, Opticon® 2, Chromo4™

เอพเพนดอร์ฟ Mastercycler® ep realplex, realplex 2 s; คิอาเก้น คอร์เบตต์ โรเตอร์-ยีน® คิว, โรเตอร์-ยีน® 3000, โรเตอร์-ยีน® 6000

โรชประยุกต์วิทยาศาสตร์ เครื่องปั่นจักรยาน LightCycler® 480, เครื่องปั่นจักรยาน LightCycler® 2.0, เครื่องปั่นจักรยาน LightCycler® 96

เทอร์โม เครื่องปั่นจักรยาน PikoReal ทางวิทยาศาสตร์ เซเฟอิด สมาร์ทไซเคิล®; อิลลูมิน่า อีโค คิวพีซีอาร์

หมายเหตุ

โปรดสวมอุปกรณ์ป้องกันส่วนบุคคลที่จำเป็น เช่น เสื้อคลุมแล็บและถุงมือ เพื่อให้แน่ใจว่าสุขภาพและความปลอดภัยของคุณ-

กรุณาใช้วัสดุสิ้นเปลือง RNasefree สำหรับ การทดลอง

การทดสอบความไว

13650 ที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลา 18 เดือน (กลุ่มทดลอง) และกลุ่มที่เก็บไว้ภายในอายุการเก็บรักษา (กลุ่มควบคุม) ได้รับการทดสอบพร้อมกันสำหรับการเจือจางแบบไล่ระดับ (500 สำเนา/มล., 250 สำเนา/มล.) ของไวรัสซูโดไวรัส SARS-CoV-2 โดยกำหนดเป้าหมายที่ยีน ORF และยีน N มีการทดสอบหลุมจำลองแปดหลุมสำหรับความเข้มข้นแต่ละระดับ โดยมีอัตราการตรวจจับ 100% นอกจากนี้ ไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในรูปร่างจุดสูงสุดของเส้นโค้งการขยายและค่า Ct

การทดสอบเสถียรภาพแบบเรียลไทม์

13650 ถูกเก็บรักษาที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลา 18 เดือน และในช่วงอายุการเก็บรักษา ทั้งสองกลุ่มได้รับการทดสอบยีน ORF ของไวรัสซูโดไวรัส SARS-CoV-2 พร้อมกันและยีน N ที่ความเข้มข้น 1,000 สำเนา/มล. โดยใช้หลุมจำลอง 20 หลุม อัตราการตรวจจับของทั้งสองกลุ่มคือ 100% และไม่มีความแตกต่างอย่างมีนัยสำคัญในรูปร่างของเส้นโค้งการขยายหรือค่า Ct

รูปที่ 1. Rบรรณาธิการ: 13650 ภายในอายุการใช้งาน-สีฟ้า-13650 เก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C นาน 18 เดือน-

ประสิทธิภาพการทำงานที่มั่นคงหลังจากการแช่แข็งและละลายซ้ำหลายครั้ง

การทดลองโดยใช้สาร 13650 แช่แข็ง-ละลายน้ำแข็ง 30 และ 50 รอบ โดยใช้น้ำแข็งแห้ง ควบคู่ไปกับสารที่เก็บรักษาตามปกติที่อุณหภูมิ -20°C และทดสอบยีน ORF ของซูโดไวรัส SARS-CoV-2 พร้อมกัน ผลการทดลองระบุว่าประสิทธิภาพของสาร 13650 ไม่เปลี่ยนแปลงหลังจากแช่แข็ง-ละลายน้ำแข็งไปแล้ว 50 รอบ

รูปที่ 2 สีแดง: 13650 เก็บไว้ตามปกติที่อุณหภูมิ -20°C สีม่วง-13650 ถึง 30 รอบการแช่แข็งและละลาย-สีเขียว-13650 ถึง 50 รอบการแช่แข็ง-ละลาย

เข้ากันได้กับโปรโตคอลมาตรฐานและรวดเร็ว

การใช้ 13650ES สามารถตรวจจับยีน ORF และยีน N ของไวรัสซูโด SARS-CoV-2 ได้ภายใต้ระบบปฏิกิริยาเดียวกันโดยใช้โปรโตคอลมาตรฐานและโปรโตคอลด่วน ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าภายใต้ระบบ 4-plex ไม่มีความแตกต่างกันในรูปร่างจุดสูงสุดของเส้นโค้งการขยายและค่า Ct ระหว่างโปรโตคอลทั้งสอง

เอกสาร:

คู่มือการใช้งาน