คำอธิบาย
Hifair™ Super Reverse Transcriptase คือเอนไซม์ทรานสคริปเทสย้อนกลับรุ่นถัดไป- ที่ เป็นอีนจินเนียร์ จาก M-MLV เอนไซม์นี้ไม่มีกิจกรรม RNase H และมีเสถียรภาพทางความร้อนที่ดีขึ้นอย่างเห็นได้ชัด โดยทนต่ออุณหภูมิปฏิกิริยาได้สูงถึง 70°C เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการถอดรหัสย้อนกลับของเทมเพลต RNA ที่มีโครงสร้างรองที่ซับซ้อนอย่างมีประสิทธิภาพ
แอปพลิเคชั่น
ผลิตภัณฑ์นี้เหมาะสำหรับการทดลองสังเคราะห์ RT-PCR, RT-qPCR, RT-LAMP, RNA-seq และ cDNA อุณหภูมิปฏิกิริยาการถอดรหัสย้อนกลับสามารถสูงถึง 70°C
คำจำกัดความของหน่วย
กิจกรรมเอนไซม์หนึ่งหน่วย (U) ถูกกำหนดให้เป็นปริมาณเอนไซม์ที่ต้องการเพื่อรวม 1 nmol ของ dTTP ลงในวัสดุที่ไม่ละลายในกรดภายใน 10 นาทีที่อุณหภูมิ 37°C โดยใช้ Poly(A).Oligo(dT) เป็นแม่แบบไพรเมอร์
ส่วนประกอบ
| ส่วนประกอบ | ชื่อ | 14612ES92 | 14612ES93 |
| 14612 | ไฮแฟร์™ ซุปเปอร์รีเวิร์สทรานสคริปเทส (200 U/μL) | 50 ไมโครลิตร | 250 ไมโครลิตร |
เงื่อนไขการจัดเก็บ
จัดเก็บที่อุณหภูมิ -25˚C ถึง -15˚C ได้นานถึง 18 เดือน
คำแนะนำการใช้งาน
ขั้นตอนการสังเคราะห์ cDNA สายแรก
1. การทำลายโครงสร้าง RNA (ขั้นตอนทางเลือก)
1. การเปลี่ยนแปลงโครงสร้างของ RNA ช่วยเปิดโครงสร้างรอง ทำให้ผลผลิต cDNA สายแรกเพิ่มขึ้นอย่างมีนัยสำคัญ
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ |
| ddH2O ที่ปราศจาก RNase | ถึง 13 μL |
| Oligo(dT)18 (50 μM) หรือไพรเมอร์แบบสุ่ม (50 μM) หรือไพรเมอร์เฉพาะยีน (2 μM) | 1 ไมโครลิตร |
| เทมเพลต RNA | RNA ทั้งหมด: 10 pg - 5 μg หรือ mRNA: 10 pg - 500 ng |
- ให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 65°C เป็นเวลา 5 นาที จากนั้นแช่เย็นอย่างรวดเร็วบนน้ำแข็งเป็นเวลา 2 นาที
- ปั่นเหวี่ยงสั้นๆ เพื่อรวบรวมของเหลวปฏิกิริยา และเติมส่วนผสมปฏิกิริยาการถอดรหัสย้อนกลับตามที่แสดงด้านล่าง
2. การตั้งค่าปฏิกิริยาการถอดรหัสย้อนกลับ (ระบบ 20 μL)
| ส่วนประกอบ | ปริมาณ |
| ส่วนผสมปฏิกิริยาจากขั้นตอนก่อนหน้า | 13 ไมโครลิตร |
| บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา 5× | 4 ไมโครลิตร |
| dNTP มิกซ์ (10 มิลลิโมลาร์) | 1 ไมโครลิตร |
| ไฮแฟร์® ซูเปอร์รีเวิร์สทรานสคริปเทส (200 หน่วย/μL) | 1 ไมโครลิตร |
| สารยับยั้ง RNase (40 U/μL) | 1 ไมโครลิตร |
3. การตั้งค่าโปรแกรมการถอดเสียงแบบย้อนกลับ
| อุณหภูมิ | เวลา |
| 25 องศาเซลเซียส* | 5 นาที |
| 50-70 องศาเซลเซียส | 15-30 นาที |
| 85 องศาเซลเซียส** | 5 นาที |
*เมื่อใช้ไพรเมอร์แบบสุ่ม ให้ฟักที่อุณหภูมิ 25°C เป็นเวลา 5 นาที หากใช้ไพรเมอร์ Oligo(dT)18 หรือ Gene-Specific สามารถข้ามขั้นตอนนี้ได้
การให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 85°C เป็นเวลา 5 นาที จะทำให้เอนไซม์ทรานสคริพเทสย้อนกลับไม่ทำงาน และสามารถปรับได้ตามต้องการ
ผลิตภัณฑ์การถอดรหัสย้อนกลับสามารถใช้ได้ทันทีสำหรับปฏิกิริยา PCR หรือ qPCR ในลำดับถัดไป โดยจัดเก็บในระยะสั้นที่อุณหภูมิ -20°C หรือสำหรับการจัดเก็บในระยะยาวที่อุณหภูมิ -80°C หลังจากการแบ่งส่วนเพื่อหลีกเลี่ยงวงจรการแช่แข็ง-ละลาย
ข้อควรระวัง
1. รักษาสภาพแวดล้อมห้องปฏิบัติการให้สะอาด สวมถุงมือและหน้ากากที่สะอาด ตรวจสอบให้แน่ใจว่าวัสดุสิ้นเปลืองที่ใช้ในการทดลองทั้งหมดไม่มี RNase เพื่อป้องกันการปนเปื้อน
2. ดำเนินการทั้งหมดบนน้ำแข็งเพื่อป้องกันการย่อยสลายของ RNA
3. ใช้ตัวอย่าง RNA คุณภาพสูงเพื่อให้มั่นใจถึงการถอดรหัสย้อนกลับที่มีประสิทธิภาพ
4. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น
5. เพื่อความปลอดภัยและสุขภาพของคุณ โปรดสวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งขณะจัดการกับผลิตภัณฑ์
เอกสาร:
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม