คำอธิบาย
ArCas12a มาจากระบบ CRISPR ของ อะกาโธแบคเตอร์ เรกทาลิส แบคทีเรียและเรียกอีกอย่างว่า Cpf1 เป็นโปรตีนโมโนเมอร์ที่ประกอบด้วยกรดอะมิโน 1,263 ตัว ในฐานะสมาชิกคลาส II (ประเภท V) ของระบบ CRISPR/Cas ArCas12a ทำหน้าที่ผ่านโปรตีนเอฟเฟกเตอร์ตัวเดียวเท่านั้น และแสดงความแตกต่างที่สำคัญจาก Cas9 เช่น การกำหนดเป้าหมายโมทิฟที่มี T สูง ไม่ต้องใช้ crRNA ที่กระตุ้นทรานส์ สร้างปลายเหนียวเมื่อ DNA แตกเป็นสองสาย มีส่วนร่วมในการประมวลผล RNA และมีกิจกรรม DNA nuclease
ArCas12a ไม่มีโดเมน HNH และสามารถใช้โดเมน RuvC เพื่อจดจำบริเวณ PAM ที่อุดมไปด้วยไทมีน (T) ที่ปลาย 5' ของกรดนิวคลีอิกเป้าหมายโดยอิสระภายใต้การนำทางของ CRISPR RNA (crRNA) โดยเริ่มการแตกตัวของ DNA เป้าหมาย ArCas12a ได้รับการนำไปใช้ในการแก้ไขจีโนมในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและพืชหลายชนิดอย่างประสบความสำเร็จ นอกจากนี้ ArCas12a ยังแสดงกิจกรรมการแตกตัวแบบทรานส์ ซึ่งสามารถตัด DNA สายเดี่ยวที่ไม่ใช่เป้าหมาย (ssDNA) ในระบบปฏิกิริยาได้อย่างไม่เลือกหน้า
เมื่อเปรียบเทียบกับ LbCas12a/AsCas12a อื่นๆ ArCas12a แสดงให้เห็นถึงความสามารถในการปรับตัวต่ออุณหภูมิที่สูงกว่า (25-55โอ้ซี) จึงเหมาะกับการตัดต่อจีโนมและการตรวจจับกรดนิวคลีอิก
คุณสมบัติ
ช่วงอุณหภูมิปฏิกิริยาที่กว้าง:แสดงกิจกรรมการแยกตัวในช่วงอุณหภูมิ 25-55โอ้ซี
สารตกค้างของนิวคลีเอสต่ำ:ไม่มีเอ็กโซนิวคลีเอส นิกเคส หรือ RNase ที่เหลืออยู่
กิจกรรมการแยกซิส-ซีส:การแยก DNA สายคู่ที่มีประสิทธิภาพสูงในหลอดทดลอง
กิจกรรมการแตกตัวของทรานส์:กิจกรรมการแยกทรานส์สูง เหมาะสำหรับการตรวจจับกรดนิวคลีอิก
แอปพลิเคชั่น
การตัดต่อยีน CRISPR/Cas
การวินิจฉัยและการตรวจจับตามระบบ CRISPR/Cas
แอปพลิเคชันการตรวจจับอื่น ๆ รวมกับเทคโนโลยีการขยายกรดนิวคลีอิกแบบไอโซเทอร์มอล (RPA และ LAMP) เป็นต้น
ข้อมูลจำเพาะ
| แหล่งที่มา | ยีน Cpf1 จาก อะกาโธแบคเตอร์ เรกทาลิส แสดงออกผ่านการแสดงออกแบบรีคอมบิแนนท์ใน อีโคไล |
| น้ำหนักโมเลกุล | 149 กิโลดาลตัน |
| ลำดับ PAM | TTTN หรือ TTTV |
| สภาวะปฏิกิริยา | NaCl 50 มิลลิโมลาร์, Tris-HCl 10 มิลลิโมลาร์, MgCl 10 มิลลิโมลาร์2, ค่า pH 7.9 @25โอ้ซี |
| ความเข้มข้น | 10 ไมโครโมลาร์ |
| ความบริสุทธิ์ | มากกว่า 95% -หน้า SDS- |
| เงื่อนไขการปิดใช้งาน | 85โอ้ซี- 5-10 นาที |
ส่วนประกอบ
| ส่วนประกอบ เลขที่ | ชื่อ | 14702ES65 | 14702ES80 |
| 14702-ก | นิวคลีเอส ArCas12a -10 ไมโครเอ็ม- | 100 ไมโครลิตร | |
| 14702-ข | 10บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา ArCas12a | 1 มล. | 1 มล. |
การขนส่งและการเก็บรักษา
สินค้านี้ควรเก็บที่อุณหภูมิ -25~-15โอ้ซี เป็นเวลา 2 ปี
ตัวเลข
รูป 1. การทดสอบกิจกรรมการแยกซิสของ ArCas12a: M: เครื่องหมาย; C: เทมเพลตดีเอ็นเอสายคู่ (dsDNA)
บันทึก: ภายใต้การนำทางของ crRNA มันสามารถแยก dsDNA (600 bp) ได้อย่างมีประสิทธิภาพเพื่อผลิตชิ้นส่วนสองชิ้น (200 bp + 400 bp)
รูป 2- ผลการทดสอบกิจกรรมการแตกตัวของทรานส์ ArCas12a
บันทึก: โดยใช้ dsDNA เป็นเป้าหมาย ArCas12a, crRNA และโพรบรีพอร์ตเตอร์ ssDNA (ที่มีกลุ่มรีพอร์ตเตอร์เรืองแสง) จะถูกเติมลงไปเพื่อการแยกในหลอดทดลอง เมื่อ ArCas12a สร้างสารเชิงซ้อนกับ crRNA และ DNA เป้าหมายแล้ว ก็จะกระตุ้นกิจกรรมการแยกทรานส์ โดยตัดโพรบรีพอร์ตเตอร์ ssDNA จึงทำให้เกิดการเรืองแสง
เอกสาร:
เอกสารข้อมูลความปลอดภัย
14702_เอกสารความปลอดภัย_เวอร์ชั่นEN20241205.pdf
คู่มือการใช้งาน
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม