นิวคลีเอส AapCas12b (เรียกอีกอย่างว่า C2c1) เป็นเอ็นโดนิวคลีเอสของ DNA ที่ถูกควบคุมโดย tracrRNA:crRNA (หรือ sgRNA) ซึ่งได้มาจากแบคทีเรียที่ชอบความร้อน อะลิไซโคลบาซิลลัส แอซิโดฟิลัส. ในสถานะที่มีลำดับ PAM (TTN) ที่ DNA สายคู่เป้าหมาย (dsDNA) มันจะตัด dsDNA เป้าหมายโดยเฉพาะ ทำให้เกิดการแตกของสายคู่และสร้างปลายเหนียว AapCas12b สามารถตัดเป้าหมาย DNA สายเดี่ยวโดยเฉพาะที่ไม่ขึ้นอยู่กับลำดับ PAM เป้าหมาย DNA สายคู่และสายเดี่ยวสามารถกระตุ้นกิจกรรมการตัดทรานส์ของ AapCas12b ได้ เมื่อเอนไซม์ AapCas12b สร้างคอมเพล็กซ์เทอร์นารีกับ sgRNA และ DNA เป้าหมาย เอนไซม์จะถูกกระตุ้นเพื่อกระตุ้นกิจกรรมการตัดทรานส์ของ ssDNA ที่ไม่จำเพาะ โดยตัดลำดับ ssDNA ใดๆ ก็ได้ในระบบ อุณหภูมิปฏิกิริยาการตัดที่เหมาะสมที่สุดของ AapCas12b คือ 60^โอ้ซีซึ่งทำให้ทนความร้อนได้ดีกว่า AacCas12b และเหมาะสมสำหรับการใช้งานร่วมกับ LAMP เพื่อพัฒนาระบบขยายสัญญาณแบบไอโซเทอร์มอล/การตรวจจับ CRISPR-Cas

คุณสมบัติ

ช่วงอุณหภูมิปฏิกิริยาที่กว้าง:แสดงกิจกรรมการแยกตัวภายในช่วงอุณหภูมิ 37-65^โอ้ซี

สารตกค้างของนิวคลีเอสต่ำ:ไม่มีเอ็กโซนิวคลีเอส นิกเคส หรือ RNase ที่เหลืออยู่

กิจกรรมการแยกซิส-ซีส:การแยก DNA สายคู่ที่มีประสิทธิภาพสูงในหลอดทดลอง

กิจกรรมการแตกตัวของทรานส์:กิจกรรมการแยกทรานส์สูง เหมาะสำหรับการตรวจจับกรดนิวคลีอิก

แอปพลิเคชั่น

การตัดต่อยีน CRISPR/Cas

การวินิจฉัยและการตรวจจับตามระบบ CRISPR/Cas

แอปพลิเคชันการตรวจจับอื่น ๆ รวมกับเทคโนโลยีการขยายกรดนิวคลีอิกแบบไอโซเทอร์มอล (RPA และ LAMP) เป็นต้น

ข้อมูลจำเพาะ

ส่วนประกอบ

เรือปิงและการเก็บรักษา

สินค้านี้ควรเก็บที่อุณหภูมิ -25~-15^โอ้ซี เป็นเวลา 2 ปี

ตัวเลข

รูป 1. การตรวจสอบกิจกรรมการแยกซิสของนิวคลีเอส AapCas12b

บันทึก: ในเวลา 20 μระบบปฏิกิริยา L ที่ประกอบด้วย Target dsDNA ที่มีลำดับ PAM, sgRNA, Cas12b และ 1บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา ผสมถูกฟักที่อุณหภูมิ 60^โอ้ซี เป็นเวลา 30 นาทีแล้วจึงปิดการใช้งานที่ 85^โอ้ซี เป็นเวลา 5 นาที ผลการวิเคราะห์อิเล็กโทรโฟรีซิสด้วยเจลอะกาโรสแสดงให้เห็นว่านิวคลีเอส AapCas12b จำนวน 3 ชุดสามารถแยก dsDNA ได้อย่างมีประสิทธิภาพ โดยมีประสิทธิภาพการแยกเทียบเท่ากับ T* ของแบรนด์นำเข้า

รูป 2- ผลการทดสอบกิจกรรมการแยกทรานส์นิวคลีเอส AapCas12b

บันทึก: ในเวลา 20 μระบบปฏิกิริยา L ที่ประกอบด้วย Target dsDNA ที่มีลำดับ PAM, sgRNA, Cas12b, โพรบฟลูออเรสเซนต์ ssDNA ของ Report และ 1บัฟเฟอร์ปฏิกิริยา ผสมถูกฟักที่อุณหภูมิ 60^โอ้ซี เป็นเวลา 1 ชั่วโมง และเก็บสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ทุก ๆ 30 วินาที ผลลัพธ์แสดงให้เห็นว่าเมื่อมี Target DNA, sgRNA และ Cas12b อยู่ร่วมกัน โพรบฟลูออเรสเซนต์ ssDNA ของ Report สามารถถูกตัดออกได้ จึงปลดปล่อยสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ออกมา

เอกสาร:

เอกสารข้อมูลความปลอดภัย

14808_เอกสารความปลอดภัย_เวอร์ชั่นEN20241209.pdf

คู่มือการใช้งาน

14808_คู่มือ_Ver.EN20241209.pdf