การ แม่เหล็ก เศษเหลือ ดีเอ็นเอ ตัวอย่าง ชุดเตรียมความพร้อม เป็น เหมาะสม สำหรับ เดอะ การเตรียมการล่วงหน้า ของ เศษเหลือ ดีเอ็นเอ ใน หลากหลาย ทางชีวภาพ ตัวอย่าง สามารถเพิ่มการแยกและการทำให้บริสุทธิ์ของ DNA ที่เหลือจากเซลล์โฮสต์ในปริมาณเล็กน้อยในตัวอย่างได้มากที่สุดโดยใช้ลูกปัดแม่เหล็กเฉพาะและ ระบบบัฟเฟอร์ที่ได้รับการเพิ่มประสิทธิภาพ

แม่เหล็ก ชุดเตรียมตัวอย่างดีเอ็นเอที่เหลือ สามารถนำไปใช้กับ DNA ที่เหลือจากเซลล์โฮสต์ได้หลากหลาย ชุดตรวจจับ รวมถึงชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ CHO (Cat#41301ES) ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ HEK293 (Cat#41302ES) ชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ Vero (รหัสสินค้า#41303ES), และชุดตรวจจับสารตกค้าง DNA ของเซลล์โฮสต์ E.coli (รหัสแมว41304ES)

ส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์

การขนส่งและการเก็บรักษา

1. ส่วนที่ 1 จัดส่งพร้อมถุงน้ำแข็ง 4°C เป็นเวลา 1 ปีหรือ -20°C สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว

2. ส่วนที่ 2 จัดส่งที่อุณหภูมิห้องและเก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องได้ 1 ปี

3. ส่วนที่ 3 จัดส่งโดยใช้น้ำแข็งแห้งและจัดเก็บที่อุณหภูมิ -20°C เป็นเวลา 1 ปี.

4. หลังจากได้รับสินค้าแล้ว โปรดตรวจสอบว่าส่วนประกอบทั้ง 3 ส่วนที่ 1 ส่วนที่ 2 และส่วนที่ 3 ครบถ้วนหรือไม่ และจัดเก็บในอุณหภูมิการจัดเก็บที่สอดคล้องกันทันที

ข้อควรระวัง

1. โปรดอ่านคู่มือการใช้งานอย่างละเอียดก่อนใช้งาน และปฏิบัติตามคู่มือการใช้งานอย่างเคร่งครัด ขอแนะนำให้ดำเนินการประมวลผลตัวอย่างบนโต๊ะทำงานที่สะอาดหรือตู้เก็บสารอันตรายทางชีวภาพ

2. ควรสังเกตดูว่าสารละลายที่เก็บไว้ที่อุณหภูมิห้องมีการตกตะกอนหรือขุ่นหรือไม่ (โดยเฉพาะอย่างยิ่งเมื่ออุณหภูมิห้องต่ำ เช่น ในฤดูหนาว) คุณสามารถแช่น้ำที่อุณหภูมิ 37°C ได้จนกว่าสารละลายจะใส เพื่อหลีกเลี่ยงการกระทบต่อประสิทธิภาพการใช้งาน

3. อาจมีเม็ดแม่เหล็กตกค้างในระหว่างการสกัด ดังนั้นพยายามหลีกเลี่ยงการดูดเม็ดแม่เหล็กออกเมื่อดึงตัวอย่าง

4. โปรดเปลี่ยนปลายบ่อยๆ เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามเมื่อใช้งานผลิตภัณฑ์นี้

5. เพื่อความปลอดภัยและสุขภาพของคุณ โปรดสวมอุปกรณ์ป้องกันส่วนบุคคล (PPE) เช่น เสื้อคลุมห้องปฏิบัติการและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง เมื่อทำงานกับผลิตภัณฑ์นี้

6. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น!

การเตรียมตัวเบื้องต้น

1. อุปกรณ์ที่ต้องจัดเตรียมเอง: เครื่องเขย่าแบบกระแสน้ำวน อ่างน้ำหรืออ่างโลหะ เครื่องเหวี่ยง ชั้นวางแยกแม่เหล็ก เครื่องสกัดกรดนิวคลีอิกอัตโนมัติ Hangzhou Aosheng Auto-Pure32A หรือเครื่องสกัดกรดนิวคลีอิกอัตโนมัติเต็มรูปแบบยี่ห้ออื่น

2. วัสดุสิ้นเปลืองที่จัดหาเอง: 10μL-1000μL ปลายตัวกรองการดูดซับต่ำ หลอดเซนตริฟิวจ์การดูดซับต่ำ 1.5 มล. หลอด PCR หรือแผ่น 96 หลุม และฝาหลอดหรือเมมเบรนที่สอดคล้องกัน

3. สารเคมีที่เตรียมเอง: เอธานอลบริสุทธิ์ (เกรดวิเคราะห์), บัฟเฟอร์ PBS 1×(pH 7.4, ปราศจากไอออนแมกนีเซียมและแคลเซียม), น้ำบริสุทธิ์พิเศษ

4. สำหรับการใช้งานครั้งแรก ให้เติมเอธานอลไร้น้ำที่มีปริมาตรตามที่ระบุบนฉลากหรือในคำแนะนำลงในขวดสารละลายซัก A* และสารละลายซัก B* ผสมให้เข้ากันก่อนใช้และทำเครื่องหมายให้ชัดเจน ปิดขวดให้แน่นหลังใช้งานเพื่อรักษาระดับเอธานอลในขวด

การสกัด DNA ที่เหลือด้วยมือ

1. การประมวลผลตัวอย่าง

1.1 หากตัวอย่างมีปริมาณ DNA ค่อนข้างสูง เช่น วัคซีน โปรดเจือจางในสัดส่วนที่เหมาะสมด้วยบัฟเฟอร์ 1×PBS (pH 7.4. ปราศจากไอออนแมกนีเซียมและแคลเซียม) แล้วจึงสกัด (การเจือจางตัวอย่างนั้นเพื่อให้ค่าการตรวจจับอยู่ในช่วงเชิงเส้นของเส้นโค้งมาตรฐาน จากนั้นจึงตรวจสอบให้แน่ใจถึงความแม่นยำของการตรวจจับ ซึ่งโดยปกติแล้วสามารถพิจารณาการเจือจาง 100 เท่าได้)

1.2 หากตัวอย่างที่ต้องการทดสอบ เป็นผงแห้ง เจือจางให้เจือจางลง 10 มก./มล. หรือ 100 มก./มล. ด้วย น้ำบริสุทธิ์พิเศษ ก่อนการใช้งาน

1.3 หากตัวอย่างมีเมทริกซ์ที่ซับซ้อน ควรทำการทดลองการบวกและการกู้คืนมาตรฐานเพื่อกำหนดการเจือจางที่เหมาะสม

2. เติมตัวอย่าง 100 μL ลงในหลอดขนาด 1.5 มล. จากนั้นเติมบัฟเฟอร์ไลซิส 100 μL, โปรตีเนสเค 10 μL, เครื่องปั่น และผสมเป็นเวลา 10 วินาที

[หมายเหตุ]: เติมโปรตีเนสเค 10 μL หากความเข้มข้นของตัวอย่างโปรตีนอยู่ที่ 0-100 mg/mL และเติมโปรตีเนสเค 20 μL หากความเข้มข้นของตัวอย่างโปรตีนอยู่ที่ 100-200 mg/mL

3. ฟักที่อุณหภูมิ 60°C เป็นเวลา 20 นาที

4. จากนั้นเพิ่ม 400 ไมโครลิตร ของสารละลายยึดเกาะ 9 μL ของไกลโคเจน และเกลือโพแทสเซียมโพลีเอ 6 μL แล้วปั่นและผสมให้เข้ากัน

5. เติมลูกปัดแม่เหล็ก 20 μL ลงในเครื่องปั่นและผสมให้เข้ากัน ทิ้งไว้ 10 นาที ปั่นและผสมเป็นเวลา 10 วินาที ทุก 3 นาที

[หมายเหตุ]: ต้องเขย่าลูกปัดแม่เหล็กก่อนใช้งานเพื่อให้แน่ใจว่าลูกปัดแม่เหล็กจะแขวนลอยอย่างทั่วถึง หลังจากเติมตัวอย่าง 4-5 ครั้งในคราวเดียว แนะนำให้ผสมอีกครั้ง

7. ปั่นเหวี่ยงเป็นเวลาสั้นๆ เพื่อแยกสารละลายออกมา แล้ววางหลอดปั่นเหวี่ยงบนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 1-2 นาที เมื่อเม็ดแม่เหล็กถูกดูดซับจนหมด ให้ค่อยๆ ดึงของเหลวออก

8. เติมสารละลายล้าง A 500 μL (โปรดตรวจสอบว่าได้เติมเอธานอลบริสุทธิ์ก่อนใช้หรือไม่) เขย่าหรือปั่นให้เข้ากันเพื่อให้แน่ใจว่าลูกปัดแม่เหล็กกระจายตัวและไม่มีลูกปัดแม่เหล็กเกาะตัวบนผนังของหลอดเหวี่ยง

9. ปั่นเหวี่ยงสักครู่ แล้ววางหลอดปั่นเหวี่ยงบนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 1-2 นาที เมื่อเม็ดแม่เหล็กถูกดูดซับจนหมด ให้ค่อยๆ เอาของเหลวออก

10. เติมสารละลายซักล้าง B 500 μL (กรุณาตรวจสอบว่ามีการเติมเอธานอลบริสุทธิ์หรือไม่ก่อนใช้งาน) เขย่าหรือปั่นให้เข้ากันเพื่อให้แน่ใจว่าลูกปัดแม่เหล็กกระจายตัวและไม่มีลูกปัดแม่เหล็กรวมตัวกันบนผนังของหลอดเหวี่ยง

11. ปั่นเหวี่ยงสักครู่ แล้ววางหลอดปั่นเหวี่ยงบนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 1-2 นาที เมื่อเม็ดแม่เหล็กถูกดูดซับจนหมด ให้ค่อยๆ เอาของเหลวออก

12. เพื่อให้แน่ใจว่าของเหลวที่เหลือจะถูกกำจัดออกให้มากที่สุด ให้ปั่นหลอดเป็นเวลา 10 วินาที รีบวางไว้บนชั้นวางแม่เหล็กแล้วใช้ปิเปต 10 μL ดูดของเหลวที่เหลือออก

13. เปิดฝาหลอดทิ้งไว้ที่อุณหภูมิห้องประมาณ 3 นาที จนกว่าเอธานอลจะระเหยหมด หากไม่มีแสงสะท้อนหรือรอยแตกร้าวปรากฏบนพื้นผิวของลูกปัดแม่เหล็ก แสดงว่าเอธานอลระเหยหมด

14. นำหลอดออกจากฐานแม่เหล็ก เติมสารละลายที่อุ่นไว้แล้ว 50-100 μL ที่อุณหภูมิ 65°C เขย่าและผสมให้เข้ากัน จากนั้นปั่นเหวี่ยงสั้นๆ ฟักที่อุณหภูมิ 65°C เป็นเวลา 5 นาที เขย่าและผสมทุกๆ 2-3 นาที

15. ปั่นเหวี่ยงอีกครั้งสั้นๆ แล้ววางหลอดปั่นเหวี่ยงบนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 2 นาที เมื่อลูกปัดแม่เหล็กถูกดูดซับจนหมด ให้ย้ายสารละลาย DNA อย่างระมัดระวังไปยังหลอดปั่นเหวี่ยงใหม่ แล้วเก็บไว้ที่อุณหภูมิ -20°C หรือที่อุณหภูมิ -80°C เพื่อการจัดเก็บในระยะยาว