ชุดทดสอบนี้มีบัฟเฟอร์ไลซิสที่มีประสิทธิภาพ ซึ่งสามารถไลซิสตัวอย่างได้อย่างรวดเร็ว (เช่น เซลล์ หางหนู หูหนู นิ้วเท้าหนู กล้ามเนื้อ ฯลฯ) เพื่อปลดปล่อยดีเอ็นเอจีโนม และไลเสทสามารถเติมลงในระบบปฏิกิริยา PCR ได้โดยตรงโดยไม่ต้องทำให้บริสุทธิ์ ซึ่งสะดวกต่อการใช้งาน นอกจากนี้ ชุดทดสอบนี้ยังต้องการปริมาณตัวอย่างที่ป้อนเข้าเพียงเล็กน้อย สามารถใช้เนื้อเยื่อหนู 5 มก. หรือหางหนู 1-5 มม. สำหรับการทดลองได้

ส่วนประกอบ

พื้นที่จัดเก็บ

19697-ก (Lysis Solution) ควรเก็บไว้ที่ 2~8℃ สำหรับ 1 ปี. หากใช้หลายครั้ง โปรดแช่แข็งแยกบรรจุภัณฑ์เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้าม 19687-B (โซลูชั่นหยุด) ควรเก็บไว้ที่ -25~-16℃ สำหรับ 1 ปี.

คำแนะนำ

การเปิดตัวดีเอ็นเอจีโนมของเมาส์

1. ตัดเนื้อเยื่อสัตว์ 5-10 มก. หรือหางหนู 1-5 มม. ลงในหลอดเหวี่ยงขนาด 1.5 มล.*
2. เติมบัฟเฟอร์ ML ปริมาณ 90 μL ลงในหลอดเหวี่ยงด้านบน ปั่นเบาๆ เพื่อให้ไลเสทแทรกเข้าไปในตัวอย่างอย่างทั่วถึง แล้วปั่นสักครู่
3. ฟักที่อุณหภูมิ 95°C เป็นเวลา 15 นาทีในตู้ฟักเทอร์โมสตัท**
4. เติม Buffer MT จำนวน 10 μL เขย่าเพื่อผสม และหยุดการไลซิส
5. ขั้นตอนเสริม: ปั่นที่ความเร็ว 12,000 รอบต่อนาที เป็นเวลา 2 นาที
6. ถ่ายโอนของเหลวส่วนบนไปยังหลอดเหวี่ยงใหม่ แล้วเก็บที่อุณหภูมิ 4°C หรือ -20°C หรือใช้ของเหลวส่วนบนโดยตรงเพื่อการขยาย PCR ในภายหลัง

- ควรตัดเนื้อเยื่อออกให้มากที่สุดเท่าที่จะทำได้เพื่อให้ปฏิกิริยาไลซิสดำเนินไปได้ราบรื่นยิ่งขึ้น

**การฟักที่อุณหภูมิ 95°C เป็นเวลา 15 นาทีโดยทั่วไปก็เพียงพอสำหรับความต้องการ PCR ส่วนใหญ่ หากต้องการ DNA จำนวนมากขึ้นหรือตัวอย่างแตกสลายได้ยาก สามารถขยายเวลาเป็น 30 นาทีได้ ไม่จำเป็นต้องแตกสลายบล็อกเนื้อเยื่อทั้งหมด และสามารถกำจัดสารตกค้างออกได้ในขั้นตอนการปั่นเหวี่ยงในขั้นตอนต่อไป

การปล่อย DNA ของเซลล์จีโนม

หลังจากเพาะเลี้ยงเซลล์ที่ถ่ายยีนแล้วในเพลต 48 หลุมเป็นเวลา 3 วัน และได้ความหนาแน่นของเซลล์ประมาณ 70,000 เซลล์ต่อหลุม ให้เอาตัวกลางออกให้หมดเท่าที่จะทำได้ จากนั้นเติมบัฟเฟอร์ ML 90 ไมโครลิตรต่อหลุมโดยตรง แล้วปิเปตแต่ละหลุม ถ่ายทั้งหมดลงในเพลต PCR 96 หลุม หลังจากบำบัดด้วยเครื่อง PCR ที่อุณหภูมิ 95 องศาเซลเซียสเป็นเวลา 5-15 นาที และปล่อยให้เย็นลง ให้เติมบัฟเฟอร์ MT 10 ไมโครลิตร และเป่าให้สม่ำเสมอและทั่วถึง ใช้เอนไซม์ความแม่นยำสูง (Cat# 10164) หรือเอนไซม์ Taq เติมไลเสทเซลล์ 0.5-2 ไมโครลิตรต่อระบบปฏิกิริยา PCR ทุกๆ 50 ไมโครลิตร แล้วดำเนินการ PCR

รูปที่ 1. การทำ PCR โดยตรงกับ เซลล์ไลเสทที่ได้รับการบำบัดด้วย 19697

หมายเหตุ

1. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น
2. โปรดปฏิบัติงานโดยสวมแว่นตานิรภัย เสื้อกาวน์ และถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งเพื่อความปลอดภัยของคุณ
3. เพื่อหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนข้ามระหว่างตัวอย่าง จำเป็นต้องจุ่มขอบของอุปกรณ์เก็บตัวอย่างหรือส่วนที่สัมผัสตัวอย่างโดยตรงในสารละลายโซเดียมไฮโปคลอไรต์ 2% หลังการเก็บตัวอย่างแต่ละครั้ง ล้างหลายๆ ครั้ง แล้วจึงเช็ดของเหลวที่เหลือให้แห้งด้วยกระดาษเช็ดมือที่สะอาดก่อนใช้งานอีกครั้งเพื่อความสะดวกในการทดสอบ สามารถเตรียมอุปกรณ์สุ่มตัวอย่างหลายตัวและทำความสะอาดให้สม่ำเสมอหลังการใช้งาน เพื่อให้แน่ใจว่าตัวอย่างแต่ละตัวอย่างจะถูกสุ่มตัวอย่างด้วยอุปกรณ์สุ่มตัวอย่างที่ปราศจากการปนเปื้อน
4. ขอแนะนำให้ใช้เนื้อเยื่อสัตว์ที่เพิ่งนำมาสดๆ ในกรณีที่เนื้อเยื่อถูกแช่แข็งเป็นเวลานาน ควรหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ ให้ได้มากที่สุด มิฉะนั้น จะทำให้เทมเพลตเสื่อมสภาพและส่งผลต่อประสิทธิภาพของ PCR

เอกสาร:

คู่มือการใช้งาน