ลูกปัด Concanavalin A (ConA) เป็นไมโครสเฟียร์โพลิเมอร์แบบซุปเปอร์พาราแมกเนติกที่ถูกจับคู่แบบโควาเลนต์กับ Concanavalin A (แมนโนสของพืช/เลกตินที่จับกับกลูโคสซึ่งแยกได้จากเมล็ดพืชธัญพืช) บนพื้นผิว ลูกปัดเหล่านี้ มีหลาย ลักษณะเด่น ได้แก่ การกระจายตัวแบบเดียวและปฏิกิริยาแม่เหล็กที่แข็งแกร่ง เมื่อ Ca²⁺ และแมกนีเซียม²⁺ เมื่อมีไอออนอยู่ เม็ดแม่เหล็ก ConA ก็จะสามารถแยกและทำให้ไบโอโมเลกุลต่างๆ เช่น โพลิแซ็กคาไรด์ ไกลโคโปรตีน และไกลโคลิปิด บริสุทธิ์ได้อย่างมีประสิทธิภาพและรวดเร็ว โดยใช้ประโยชน์จากความสัมพันธ์ระหว่าง ConA โกลบูลิน A กับกลุ่ม α-D-แมนโนสและกลุ่ม α-D-กลูโคสที่ปลายสุด

ลูกปัดแม่เหล็ก ConA เป็นวิธีที่สะดวกในการแยกหรือตรึงเซลล์ ทำให้สูญเสียเซลล์น้อยที่สุดในขั้นตอนการล้างในภายหลัง นอกจากนี้ ลูกปัดแม่เหล็กยังใช้ในการรวบรวมและตรึงนิวเคลียสได้อีกด้วย นอกจากนี้ ลูกปัดแม่เหล็กเหล่านี้ยังมีประโยชน์ในเทคนิคใหม่ๆ เช่น CUT & Run และ CUT & Tag ซึ่งเป็นแนวทางปฏิวัติวงการที่ใช้ในการทดลอง ChIP-seq

โดยสรุป เม็ดแม่เหล็ก ConA เป็นเครื่องมือที่มีประสิทธิภาพสำหรับการแยกและตรึงเซลล์อย่างสะดวก การรวบรวมนิวเคลียส และการประยุกต์ใช้ในเทคนิคการทดลองที่ล้ำสมัย

ข้อมูลจำเพาะ

ลักษณะเด่น

รูปภาพและตาราง

ตารางที่ 1. Yeasen ลูกปัด ConA มีอัตราการจับสูง ปริมาณของ Concanavalin A (ConA) ที่ใช้เป็นสัดส่วนกับไมโครสเฟียร์ได้รับการพิสูจน์แล้วว่าสามารถจับได้สูงสุดในขณะที่ป้องกันการรวมตัวของลูกปัดแม่เหล็กมากเกินไปหลังจากการจับเซลล์ในการทดลอง CUT&Tag ตัวอย่างเช่น การใช้ลูกปัดเคลือบ ConA ปริมาณ 10 μL สามารถจับเซลล์ได้ในปริมาณที่เทียบเท่ากับระดับ E7 โดยมีประสิทธิภาพในการจับเกิน 98%

รูปที่ 1. Yeasen ลูกปัด ConA แสดงให้เห็นการกระจายตัวสูง ในกระบวนการติดฉลากลูกปัด เลือกใช้สารปิดผนึกที่ไม่ใช่สารชีวภาพเพื่อให้แน่ใจว่าปิดได้อย่างมีประสิทธิภาพโดยไม่ได้รับผลกระทบจากการเปลี่ยนแปลงจากชุดต่อชุด วิธีนี้รับประกันการปิดผนึกลูกปัดแม่เหล็กได้อย่างดีเยี่ยม โดยรักษาการกระจายตัวสูงระหว่างการจัดเก็บลูกปัดเคลือบ ConA ซึ่งเป็นประโยชน์ต่อการจับกับโมเลกุลคาร์โบไฮเดรตอย่างมีประสิทธิภาพในการทดลองครั้งต่อไป

รูปที่ 2. การกระจายสัญญาณโครมาติน CUT&Tag โดยใช้ Yeasen ลูกปัดคอนเอ

พื้นที่จัดเก็บ

ควรเก็บผลิตภัณฑ์นี้ที่อุณหภูมิ 2~8℃ เป็นเวลา 2 ปี

คำแนะนำ

การดำเนินการต่อไปนี้ใช้การฟอกไกลโคโปรตีนหรือการแยกเซลล์เป็นตัวอย่าง ตัด&แท็ก การทดลอง , ดู Yeasen Cat# 12598ES สำหรับโปรโตคอล

1. การเตรียมบัฟเฟอร์

1）ลูกค้าเป็นผู้จัดหา

1. วัสดุที่จำเป็นไม่รวม：ขาตั้งแม่เหล็ก หลอด Eppendorf หลอด PCR ขาตั้งแม่เหล็ก เครื่องเทอร์โมไซเคิล ฯลฯ
2. ปรับสมดุล ลูกปัด ที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลาอย่างน้อย 30 นาที เขย่าขวดแล้วเขย่าหรือปั่นลูกปัดให้เข้ากันอีกครั้ง

1. การจัดการตัวอย่าง（ โดยใช้เซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมเป็นตัวอย่าง -

1. เตรียมเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม(1.0×10 ⁴~1.0×10 ⁵ เซลล์), ปั่นเหวี่ยง (4℃，600×g, 3~5 นาที) และระมัดระวัง ทิ้ง ส่วนที่เป็นของเหลวใส
2. เติมบัฟเฟอร์ยึดเกาะ 140 μL ผสมให้เข้ากันแล้วทำให้เซลล์กลับมาแขวนลอยอีกครั้ง ปั่นเหวี่ยงและเก็บตัวอย่าง (4℃，600×g, 3~5 นาที) อย่างระมัดระวัง ทิ้ง ส่วนที่เป็นของเหลวใส
3. เติมบัฟเฟอร์ยึดเกาะ 90 μL ผสมให้เข้ากันแล้วทำให้เซลล์กลับมาแขวนลอยอีกครั้ง
   ข้อควรระวัง: เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมที่ยึดติดแน่นสามารถรับได้โดยการย่อยบางส่วนโดยใช้เอนไซม์ เช่น ทริปซิน สำหรับเนื้อเยื่อสัตว์ เซลล์พืช หรือเซลล์รา การได้รับเซลล์ที่กระจัดกระจายหรือโปรโตพลาสต์มักต้องใช้การบำบัดพิเศษที่ปรับให้เหมาะกับลักษณะเฉพาะของพวกมัน

1. เตรียมลูกปัด ConA

1. ค่อยๆ บีบลูกปัด ConA จนแขวนลอยเต็มที่ แล้ววาง 10 μL ของลูกปัดแขวนลอยในหลอดเซนตริฟิวจ์ 200 μL ใหม่
2. เติมบัฟเฟอร์ยึดเกาะ 40 μL ผสมให้เข้ากันแล้ววางบนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 1 นาที จากนั้นทิ้งส่วนที่เป็นของเหลวใสออกหลังจากที่ลูกปัดแม่เหล็กดูดซับไปที่ผนังด้านข้างของหลอดเซนตริฟิวจ์แล้ว
3. เติมบัฟเฟอร์ยึดเกาะ 10 μL ผสมให้เข้ากันแล้วทำให้เม็ด ConA กลับมาเป็นของเหลวอีกครั้ง

1. ตัวอย่างการเข้าเล่ม

1. เติมตัวอย่างเซลล์ที่เตรียมไว้ลงในลูกปัดที่ผ่านการบำบัดเบื้องต้น แล้วบีบลูกปัดที่แขวนลอยใหม่เบาๆ จากนั้นฟักในเครื่องผสมแบบคว่ำ (อุณหภูมิห้อง 30 นาทีหรือ 4℃ ข้ามคืน)
2. ยืนบนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 1 นาที รอให้ลูกปัดแม่เหล็กดูดซับไปที่ผนังด้านข้างของหลอดเซนตริฟิวจ์ จากนั้นทิ้งส่วนที่เป็นของเหลวใสออกอย่างระมัดระวัง
3. เพิ่ม บัฟเฟอร์การชะขนาด 500 μL ต่อสารเชิงซ้อนของลูกปัดเซลล์-ConA และ บีบเบา ๆ ไปที่ ลูกปัดแขวนลอยอีกครั้ง ยืนบนแท่นแม่เหล็กเป็นเวลา 1 นาที รอให้ลูกปัดแม่เหล็กดูดซับไปที่ผนังด้านข้างของหลอดเซนตริฟิวจ์ จากนั้นทิ้งส่วนที่เป็นของเหลวใสออกอย่างระมัดระวัง
4. ทำซ้ำขั้นตอนที่ 3) อีกสามหรือสี่ครั้ง

1. การชะล้าง

1. สำหรับไกลโคโปรตีน ให้เติมบัฟเฟอร์ Elution 50~250 μL ค่อยๆ บีบลูกปัดที่แขวนลอยใหม่ จากนั้นฟักในเครื่องผสมคว่ำ (อุณหภูมิห้อง 10~30 นาที) หลังจากคว่ำส่วนผสมแล้ว ให้วางบนขาตั้งแม่เหล็กเป็นเวลา 1 นาที เก็บของเหลวส่วนบนลงในหลอดใหม่ขนาด 1.5 มล. เพื่อทำตามขั้นตอน SDS-PAGE หรือเวสเทิร์นบล็อต
2. สำหรับเซลล์ไม่ต้องชะล้าง

หมายเหตุ

1. ปรับสมดุล คอนเอ ลูกปัดที่อุณหภูมิห้อง ก่อนการใช้งาน
2. หลีกเลี่ยงการแช่แข็ง มิฉะนั้น วัสดุของลูกปัดจะเสื่อมสภาพหรือสูญเสียกิจกรรม
3. ConA ต้องมีไอออน Ca2+ และ Mn2+ ที่ใช้งานอยู่ ดังนั้น ควรหลีกเลี่ยงการใช้รีเอเจนต์ที่ประกอบด้วย EDTA หรือสารคีเลตไอออนโลหะอื่นๆ ในระหว่างการทดลอง
4. เมื่อฟักร่วมกับเซลล์ ลูกปัด ConA อาจรวมตัวกัน ซึ่งถือเป็นเรื่องปกติและไม่ส่งผลกระทบต่อการใช้งานลูกปัดแม่เหล็กตามปกติ
5. ผลิตภัณฑ์นี้ใช้เพื่อการวิจัยเท่านั้น
6. โปรดปฏิบัติงานโดยสวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง เพื่อความปลอดภัยของคุณ

คู่มือ