คำอธิบาย
Cell Counting Kit-8 (CCK-8) เป็นชุดตรวจจับที่รวดเร็วและมีความไวสูงซึ่งใช้รีเอเจนต์ WST-8 (2-(2-methoxy-4-nitrophenyl)-3-(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazolium monosodium salt) WST-8 เป็นรีเอเจนต์ที่ปรับปรุงแล้วของ MTT และสามารถลดปริมาณให้เหลือฟอร์มาซานสีส้มเหลืองที่ละลายน้ำได้สูงโดยดีไฮโดรจีเนสในไมโตคอนเดรีย ปริมาณของฟอร์มาซานที่สร้างขึ้น เป็นสัดส่วนกับจำนวนเซลล์ที่มีชีวิต ค่า OD ของฟอร์มาซานที่ 450 นาโนเมตรที่ตรวจพบโดยเครื่องอ่านไมโครเพลตสามารถระบุจำนวนเซลล์ที่มีชีวิตได้โดยอ้อม ชุดทดสอบนี้ใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการคัดกรองยา การทดสอบการแพร่กระจายของเซลล์และความเป็นพิษต่อเซลล์ การทดสอบความไวต่อยาต่อเนื้องอก และการตรวจจับกิจกรรมของปัจจัยทางชีวภาพ
ข้อดีของวิธี CCK-8
1. การเปรียบเทียบวิธี CCK-8 กับวิธีตรวจจับการแพร่กระจายของเซลล์/ความเป็นพิษอื่นๆ
| วิธีการตรวจจับ | วิธี MTT | วิธี XTT | WST - วิธี 1 | วิธี CCK 8 |
|---|---|---|---|---|
| ความสามารถในการละลายน้ำของผลิตภัณฑ์ฟอร์มาซาน | ต่ำ (ต้องเติมตัวทำละลายอินทรีย์เพื่อละลายแล้วจึงทดสอบ) | สูง | สูง | สูง |
| ลักษณะผลิตภัณฑ์ | ผง | น้ำยา 2 ขวด | สารละลาย | น้ำยา 1 ขวด |
| วิธีการใช้งาน | ผสมลงในสารละลายแล้วใช้ | เตรียมสารละลายไว้ก่อนใช้งาน | นอกกรอบ | นอกกรอบ |
| ความไวในการตรวจจับ | สูง | สูงมาก | สูงมาก | สูง |
| การตรวจจับ เวลา | ยาว | สั้น | สั้น | สั้นที่สุด |
| ความยาวคลื่นในการตรวจจับ | 560-600 นาโนเมตร | 420-480 นาโนเมตร | 420-480 นาโนเมตร | 430-490 นาโนเมตร |
| ความเป็นพิษต่อเซลล์ | ความเป็นพิษสูง สัณฐานวิทยาของเซลล์หายไปหมดสิ้น | ความเป็นพิษต่ำ สัณฐานวิทยาของเซลล์ไม่เปลี่ยนแปลง | ต่ำ ความเป็นพิษ สัณฐานของเซลล์ไม่เปลี่ยนแปลง | ความเป็นพิษต่ำ สัณฐานวิทยาของเซลล์ไม่เปลี่ยนแปลง |
| ความเสถียรของรีเอเจนต์ | ทั่วไป | ต่ำ | ทั่วไป | สูง |
| การทดสอบตัวอย่างจำนวนมาก | ความเป็นไปได้ | เหมาะสม | เหมาะสม | เหมาะสม |
2. ฟีนอลเรดและซีรั่มไม่รบกวนการตรวจจับ CCK-8
3. เนื่องจากความเป็นพิษต่อเซลล์ของรีเอเจนต์ CCK-8 ต่ำมาก จึงสามารถกำหนดเวลาการวัดที่เหมาะสมได้โดยการอ่านซ้ำๆ ด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลตในเวลาต่างๆ หลังจากเติมรีเอเจนต์ CCK-8
การขนส่งและการเก็บรักษา
ผลิตภัณฑ์สามารถเก็บรักษาได้ที่อุณหภูมิ -25~-15ºC ในที่แห้งและมืดได้นานถึง 2 ปี
ข้อควรระวัง
1. ในการทดลองครั้งแรก ขอแนะนำให้กำหนดจำนวนเซลล์ที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการเพาะเลี้ยงและเวลาฟักตัวที่เหมาะสมที่สุดของรีเอเจนต์ CCK-8
2. หากเป็นไปได้ ให้ใช้ปิเปตหลายช่องเพื่อลดความแปรผันระหว่างหลุมจำลอง หลีกเลี่ยงฟองอากาศในการทดลองเนื่องจากฟองอากาศจะรบกวนการอ่านค่า OD เมื่อเติมรีเอเจนต์ CCK-8 ขอแนะนำให้เติมใกล้กับผนังของแผ่นเพาะเลี้ยงแทนที่จะใส่ลงในอาหารเพาะเลี้ยง
3. เซลล์เม็ดเลือดขาวอาจต้องใช้เวลาฟักนานกว่า
4. เมื่อใช้เพลทมาตรฐาน 96 หลุม จำนวนเซลล์ที่เพาะต้องไม่น้อยกว่า 1,000 เซลล์ต่อหลุม (100 μL) ความไวในการตรวจจับเม็ดเลือดขาวค่อนข้างต่ำ ดังนั้นจึงแนะนำให้เพาะอย่างน้อย 2,500 เซลล์ต่อหลุม (100 μL) หากใช้เพลท 24 หลุมหรือ 6 หลุม ให้คำนวณจำนวนเซลล์ที่สอดคล้องกันสำหรับแต่ละหลุมและเติมปริมาตรรีเอเจนต์ CCK-8 ที่เหมาะสม (ปริมาตรรีเอเจนต์ CCK-8 ที่เติมคือ 10% ของปริมาตรของอาหารเลี้ยงเชื้อในแต่ละหลุมของเพลท)
5.หากไม่มีฟิลเตอร์ 450 นาโนเมตร สามารถใช้ฟิลเตอร์ที่มีค่าการดูดกลืนแสงระหว่าง 430-490 นาโนเมตรได้ แต่ฟิลเตอร์ 450 นาโนเมตรสามารถให้ความไวในการตรวจจับสูงสุดได้
6. ฟีนอลเรดไม่ส่งผลกระทบต่อการวัด เนื่องจากการดูดกลืนแสงของฟีนอลเรดในตัวกลางสามารถถูกกำจัดได้โดยการลบการดูดกลืนแสงของกลุ่มว่าง
7. เพื่อความปลอดภัยและสุขภาพของคุณ โปรดสวมเสื้อคลุมแล็บและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งเมื่อปฏิบัติการทดลอง
คำแนะนำ
I. สร้างเส้นโค้งมาตรฐาน
1. เตรียมเซลล์แขวนลอย กำหนดความหนาแน่นของเซลล์ แล้วจึงใส่เซลล์ลงในแผ่น
2. เจือจางเซลล์ตามลำดับด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อตามอัตราส่วนที่กำหนด (เช่น อัตราส่วน 1:2) เพื่อสร้างระดับความเข้มข้นของเซลล์ โดยทั่วไปมีระดับความเข้มข้นของเซลล์ 3-5 ระดับ และมีหลุมจำลอง 3-6 หลุมสำหรับความเข้มข้นแต่ละระดับ
3. หลังจากเพาะเลี้ยงเซลล์แล้ว ให้เพาะเลี้ยงเซลล์เป็นเวลา 2-4 ชั่วโมงเพื่อให้เซลล์เกาะติดกัน จากนั้นเติมรีเอเจนต์ CCK-8 ฟักเป็นเวลาหนึ่งช่วง แล้ววัดค่า OD วาดกราฟมาตรฐานโดยใช้จำนวนเซลล์เป็นแกน X และค่า OD เป็นแกน Y ตามกราฟมาตรฐานนี้ เราสามารถกำหนดจำนวนเซลล์ในตัวอย่างที่ไม่ทราบค่าได้ (หลักการของการใช้กราฟมาตรฐานนี้คือ เงื่อนไขการทดลองจะต้องสอดคล้องกัน)
II. การทดสอบความมีชีวิตของเซลล์
1. ใส่เซลล์ในเพลท (100 μL/หลุม) ในเพลท 96 หลุม วางเพลทในตู้ฟัก (37°C, CO 5%2) เป็นระยะเวลาหนึ่งเพื่อการฟักตัวเบื้องต้น
2. เติมน้ำยา CCK-8 ปริมาณ 10 μL ลงในแต่ละหลุม (ระวังอย่าให้ฟองอากาศเข้าไปในหลุม เพราะจะรบกวนการอ่านค่า OD) แล้วผสมเบาๆ
3. วางจานลงในตู้ฟักและฟักเป็นเวลา 1-4 ชั่วโมง
4. วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท
5. หากไม่วัดค่า OD ทันที ให้เติมสารละลาย HCl 0.1 M 10 μL หรือสารละลาย SDS 1% w/v ลงในแต่ละหลุม ปิดแผ่นเพลทและเก็บไว้โดยป้องกันไม่ให้โดนแสงที่อุณหภูมิห้อง ค่าการดูดกลืนแสงจะไม่เปลี่ยนแปลงภายใน 24 ชั่วโมง
III. การทดสอบการแพร่กระจายของเซลล์และความเป็นพิษต่อเซลล์
1. ใส่เซลล์ในเพลท (100 μL/หลุม) ในเพลท 96 หลุม วางเพลทในตู้ฟัก (37°C, CO 5%2) เป็นเวลา 24 ชม. เพื่อเป็นการฟักตัวล่วงหน้า
2. เติมสารที่ต้องการทดสอบที่มีความเข้มข้นต่างกัน 10 μL ลงในแผ่น
3. วางแผ่นลงในตู้ฟักและฟักเป็นเวลาที่กำหนด (เช่น 6, 12, 24 หรือ 48 ชั่วโมง)
4. เติมน้ำยา CCK-8 ปริมาณ 10 μL ลงในแต่ละหลุม (ระวังอย่าให้ฟองอากาศเข้าไปในหลุม เพราะจะรบกวนการอ่านค่า OD) แล้วผสมเบาๆ
5. วางจานลงในตู้ฟักและฟักเป็นเวลา 1-4 ชั่วโมง
6. วัดค่าการดูดกลืนแสงที่ 450 นาโนเมตรด้วยเครื่องอ่านไมโครเพลท
7. หากไม่วัดค่า OD ทันที ให้เติมสารละลาย HCl 0.1 M 10 μL หรือสารละลาย SDS 1% w/v ลงในแต่ละหลุม ปิดแผ่นเพลทและเก็บไว้โดยป้องกันไม่ให้โดนแสงที่อุณหภูมิห้อง ค่าการดูดกลืนแสงจะไม่เปลี่ยนแปลงภายใน 24 ชั่วโมง
บันทึก: หากสารเกิดการออกซิไดซ์หรือรีดิวซ์ ให้เปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อเก่าด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่ (เอาอาหารเลี้ยงเชื้อเก่าออก ล้างเซลล์สองครั้งด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่ แล้วจึงเติมอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่) ก่อนที่จะเติมรีเอเจนต์ CCK-8 เพื่อกำจัดผลของสารดังกล่าวหากสารนั้นเองมีเพียง เอ เล็กน้อย ผลกระทบต่อค่าการดูดกลืนแสง ไม่จำเป็นต้องเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อ และสามารถขจัดผลของสารได้โดยการลบค่าการดูดกลืนแสงของกลุ่มว่างพร้อมกับสาร
สูตรการคำนวณ
อัตราการอยู่รอดของเซลล์ =[(AC) /(BC)] x100%
อัตราการยับยั้ง =[(BA) /(BC)] x100%
A: ค่าการดูดกลืนแสงของกลุ่มทดลอง (ค่าการดูดกลืนแสงของอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีเซลล์, สารตั้งต้น CCK-8 และสารที่ต้องการทดสอบ)
B: ค่าการดูดกลืนแสงของกลุ่มควบคุม (ค่าการดูดกลืนแสงของอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีเซลล์ สารตั้งต้น CCK-8)
C: ค่าการดูดกลืนแสงของหมู่ว่าง (ค่าการดูดกลืนแสงของอาหารเลี้ยงเชื้อที่มีรีเอเจนต์ CCK-8)
การอ้างอิง
[1] ซัน แอล, ลี พี, จู X และคณะ ใน การจำแนกลักษณะโครงสร้างของจีโนม RNA ของ SARS-CoV-2 ในร่างกายช่วยระบุโปรตีนของโฮสต์ที่เสี่ยงต่อการนำยาที่นำมาใช้ซ้ำมาใช้ซ้ำ Cell. 2021;184(7):1865-1883.e20. doi:10.1016/j.cell.2021.02.008(ไอเอฟ:41.584)
[2] Wei S, Zhao Q, Zheng K และคณะ GFAT1-linked TAB1 glutamylation สนับสนุนการทำงานของ p38 MAPK และส่งเสริมการอยู่รอดของเซลล์มะเร็งปอดภายใต้ภาวะอดกลูโคส Cell Discov. 2022;8(1):77. เผยแพร่เมื่อวันที่ 9 สิงหาคม 2022 doi:10.1038/s41421-022-00423-0(ไอเอฟ:38.079)
[3] Chen X, Zhang D, Su N และคณะ การสร้างภาพไดนามิกของ RNA ในเซลล์ที่มีชีวิตด้วย RNA เรืองแสงที่สว่างและเสถียร Nat Biotechnol 2019;37(11):1287-1293 doi:10.1038/s41587-019-0249-1(ไอเอฟ:31.864)
[4] Yang F, Xiao Y, Ding JH และคณะ Ferroptosis heterogeneity in triple-negative breast cancer reveals an innovative immunotherapy combination strategy [เผยแพร่ออนไลน์ก่อนพิมพ์ 11 ต.ค. 2022] Cell Metab. 2022;S1550-4131(22)00411-9. doi:10.1016/j.cmet.2022.09.021(ไอเอฟ:31.373)
[5] Rong QX, Wang F, Guo ZX และคณะ GM-CSF เป็นตัวกลางในการหลบเลี่ยงภูมิคุ้มกันผ่านการเพิ่มการแสดงออกของ PD-L1 ในมะเร็งต่อมน้ำเหลืองชนิดเซลล์ T/เพชฌฆาตธรรมชาตินอกต่อม Mol Cancer 2021;20(1):80 เผยแพร่เมื่อวันที่ 29 พฤษภาคม 2021 doi:10.1186/s12943-021-01374-y(ไอเอฟ:27.401)
[6] Xia B, Shen X, He Y และคณะ โปรตีนเยื่อหุ้มเซลล์ของ SARS-CoV-2 ก่อให้เกิดความเสียหายทางพยาธิวิทยาที่คล้ายกับกลุ่มอาการหายใจลำบากเฉียบพลัน (ARDS) และเป็นเป้าหมายของยาต้านไวรัส Cell Res. 2021;31(8):847-860 doi:10.1038/s41422-021-00519-4(ไอเอฟ:25.617)
[7] Yang X, Zhao X, Zhu Y และคณะ FBXO34 ส่งเสริมการทำงานของ HIV-1 แฝงด้วยการปรับเปลี่ยนหลังการถอดรหัส Emerg Microbes Infect. 2022;11(1):2785-2799 doi:10.1080/22221751.2022.2140605(ไอเอฟ:19.568)
[8] Zhou Z, Zhang X, Lei X และคณะการตรวจจับโครมาตินในไซโตพลาสมิกโดย cGAS กระตุ้นการตอบสนองภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดในการติดเชื้อ SARS-CoV-2 Signal Transduct Target Ther. 2021;6(1):382. เผยแพร่เมื่อวันที่ 3 พฤศจิกายน 2021 doi:10.1038/s41392-021-00800-3(ไอเอฟ:18.187)
[9] Li M, Hao B, Zhang M และคณะ เมลาโทนินช่วยเพิ่มภูมิคุ้มกันต่อต้านเนื้องอกที่เกิดจากคลื่นความถี่วิทยุ NK ทำให้เกิดการรีโปรแกรมการเผาผลาญของมะเร็งและการยับยั้งการพัฒนาของเนื้องอกในปอดหลายส่วน Signal Transduct Target Ther. 2021;6(1):330. เผยแพร่เมื่อวันที่ 1 กันยายน 2021 doi:10.1038/s41392-021-00745-7(ไอเอฟ:18.187)
[10] Qi S, Zhu Y, Liu X และคณะ โปรตีน WWC ทำหน้าที่เป็นตัวกลางในการกระตุ้น LATS1/2 โดยฮิปโปไคเนสและบ่งชี้ถึงกลยุทธ์การยับยั้งเนื้องอก Mol Cell. 2022;82(10):1850-1864.e7. doi:10.1016/j.molcel.2022.03.027(ไอเอฟ:17.970)
[11] Zhu J, Li X, Cai X และคณะ การโมโนเมทิลเลชันอาร์จินีนโดย PRMT7 ควบคุมภูมิคุ้มกันโดยกำเนิดของไวรัสที่เกิดจาก MAVS Mol Cell. 2021;81(15):3171-3186.e8. doi:10.1016/j.molcel.2021.06.004(ไอเอฟ:17.970)
[12] Teng KX, Niu LY, Xie N, Yang QZ. สารโฟโตไดนามิกเหนือโมเลกุลสำหรับการออกซิเดชันของ NADH และการสร้างอนุมูลซูเปอร์ออกไซด์พร้อมกัน Nat Commun. 2022;13(1):6179. เผยแพร่เมื่อวันที่ 19 ตุลาคม 2022 doi:10.1038/s41467-022-33924-3(ไอเอฟ:17.694)
[13] Zhong J, Guo Y, Lu S และคณะ การออกแบบตามเหตุผลของตัวติดตามที่เพิ่มความไวเพื่อค้นพบสารยับยั้ง APC-Asef ที่มีประสิทธิภาพ Nat Commun. 2022;13(1):4961 เผยแพร่เมื่อวันที่ 24 สิงหาคม 2022 doi:10.1038/s41467-022-32612-6(ไอเอฟ:17.694)
[14] Liu F, Wang X, Duan J และคณะ การย่อยสลายตามลำดับของ AURKA ที่เกิดจากค็อกเทล PROTAC ชั่วคราวทำให้เซลล์ต้นกำเนิดมะเร็งเม็ดเลือดขาวเฉียบพลันลดลง Adv Sci (Weinh) 2022;9(22):e2104823 doi:10.1002/advs.202104823(ไอเอฟ:16.806)
[15] Ji C, Qiu M, Ruan H และคณะ การวิเคราะห์ทรานสคริปโตมเผยให้เห็นช่องว่างระหว่างโครงสร้าง 3 มิติเพื่อเร่งการสมานกระดูก Adv Sci (Weinh) 2022;9(8):e2105194 doi:10.1002/advs.202105194(ไอเอฟ:16.806)
[16] Feng L, Dou C, Xia Y และคณะ การบำบัดด้วยนาโนไซม์เคลือบเยื่อหุ้มเซลล์แบบนิวโทรฟิลสำหรับความเสียหายของสมองจากการขาดเลือดและการฟื้นฟูการทำงานของระบบประสาทในระยะยาว ACS Nano. 2021;15(2):2263-2280. doi:10.1021/acsnano.0c07973(ไอเอฟ:15.881)
[17] Wang Z, Gong X, Li J และคณะ นาโนยานพาหนะโพลีฟลูออโรคาร์บอนที่ส่งออกซิเจนช่วยเพิ่มออกซิเจนของเนื้องอกและเพิ่มภูมิคุ้มกันต่อต้านเนื้องอกที่เกิดจากโฟโตไดนามิก ACS Nano. 2021;15(3):5405-5419 doi:10.1021/acsnano.1c00033(ไอเอฟ:15.881)
[18] Jiang Z, He L, Yu X และคณะ Antiangiogenesis Combined with Inhibition of the Hypoxia Pathway Facilitates Low-Dose, X-ray-Induced Photodynamic Therapy [เผยแพร่ออนไลน์ก่อนพิมพ์ 25 มิถุนายน 2021] ACS Nano 2021;10.1021/acsnano.1c01063 doi:10.1021/acsnano.1c01063(ไอเอฟ:15.881)
[19] Gong X, Li J, Xu X และคณะ ระบบนาโนส่งออกซิเจนที่ได้รับแรงบันดาลใจจากไมโครเวสิเคิลช่วยปรับการทำงานของเนื้อเยื่อเกี่ยวพันของเนื้องอกและภูมิคุ้มกันต่อต้านเนื้องอกโดยการฉายรังสี Biomaterials 2022;290:121855 doi:10.1016/j.biomaterials.2022.121855(ไอเอฟ:15.304)
[20] Deng J, Xu W, Lei S และคณะ การคัดเลือกและการทำให้สุกของเซลล์เดนไดรต์ที่ขึ้นอยู่กับเซลล์เพชฌฆาตธรรมชาติที่ถูกกระตุ้นด้วยนาโนเจลที่ตอบสนองเพื่อกำหนดเป้าหมายภูมิคุ้มกันบำบัดมะเร็งตับอ่อน Small. 2022;18(44):e2203114. doi:10.1002/smll.202203114(ถ้า:15.153)
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม