ไฮฟ์ ทรานส์™ รีเอเจนต์การถ่ายโอนลิโพโซม คำถามที่พบบ่อย

(1) ถาม: สามารถมีเซรั่มอยู่ได้หรือไม่เมื่อเตรียมสารเชิงซ้อนของรีเอเจนต์การถ่ายโอนกรดนิวคลีอิก?

A: การมีซีรั่มจะส่งผลต่อการสร้างไลโปโซม ขอแนะนำให้ใช้ตัวกลางที่ไม่มีซีรั่ม (โดยปกติคือตัวกลาง MEM) เมื่อเตรียมคอมเพล็กซ์รีเอเจนต์การถ่ายโอนกรดนิวคลีอิก

(2) ถาม: สามารถแช่แข็งรีเอเจนต์การถ่ายโอนยีนได้หรือไม่

ตอบ ไม่ สารเคมีนี้ต้องเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8 ℃ และควรระวังอย่าเปิดฝาซ้ำๆ เป็นเวลานาน เพราะการเปิดฝาเป็นเวลานานจะทำให้เกิดออกซิเดชันของไลโปโซมและส่งผลต่อประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีน

(3) ถาม: ฉันควรใส่ใจอะไรบ้างเมื่อใช้ Hieff Trans™ Liposome Nucleic Acid Transfection Reagent?

A: 1) ในระหว่างการดำเนินการถ่ายโอนยีน จะดีกว่าหากการบรรจบกันของเซลล์ถึง 80%-95% และความหนาแน่นของการชุบเฉพาะจะถูกกำหนดตามสถานการณ์ของเซลล์

2) การใช้ DNA ที่มีความบริสุทธิ์สูงช่วยให้ได้รับประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนที่สูงขึ้น

3) จำเป็นต้องเจือจาง DNA และรีเอเจนต์การถ่ายโอนด้วยตัวกลางที่ปราศจากซีรั่มเมื่อเตรียมคอมเพล็กซ์การถ่ายโอน

4) ไม่สามารถเติมยาปฏิชีวนะลงในอาหารเลี้ยงเชื้อระหว่างการถ่ายยีนได้

5) ควรปรับความเข้มข้นของ DNA และปริมาณของรีเอเจนต์ไลโปโซมประจุบวกให้เหมาะสมสำหรับการใช้ครั้งแรกเพื่อให้ได้ประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนสูงสุด อัตราส่วนของ DNA ต่อรีเอเจนต์การถ่ายโอนยีนคือ โดยทั่วไปแนะนำเป็น 1:2-1:3

(4) ถาม: จำเป็นต้องยุติหลังการถ่ายยีนหรือไม่?

A: ไม่จำเป็น คอมเพล็กซ์ไลโปโซมจะคงตัวได้นาน 6 ชั่วโมง หากไม่เปลี่ยนอาหารเลี้ยงเซลล์ก่อนการถ่ายยีน เพื่อให้แน่ใจว่ามีสารอาหารที่จำเป็นสำหรับการเจริญเติบโตของเซลล์ตามปกติ จำเป็นต้องเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเซลล์ใหม่หลังจากผ่านไป 4 ถึง 6 ชั่วโมง อย่างไรก็ตาม หากเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเซลล์ก่อนการถ่ายยีน ไม่จำเป็นต้องเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเซลล์หลังการถ่ายยีนไลโปโซม

(5) ถาม: ฉันควรใส่ใจอะไรบ้างหากต้องการปรับปรุงประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีน?

A: ความหนาแน่นของเซลล์ในช่วงเวลาการถ่ายโอนยีนคือ 90%-95%

ข: ในระหว่างการถ่ายยีน ให้ใช้ตัวกลางที่ปราศจากซีรั่ม MEM สำหรับการเจือจางกรดนิวคลีอิกและไลโปโซม

c: สามารถเปลี่ยนตัวกลางได้ 4-6 ชั่วโมงหลังการถ่ายยีน

(6) ถาม: สามารถทำ co-transfection ของ DNA และ siRNA ได้หรือไม่ ได้ผลเป็นอย่างไรบ้าง

A: สามารถทำการถ่ายโอนยีนร่วมได้ แต่แนะนำให้ทำการถ่ายโอนยีนแยกกัน และควรทำการถ่ายโอนยีน DNA หลังจาก siRNA ไปแล้ว 6 ชั่วโมง หากทำร่วมกัน ประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีน siRNA จะแย่ลง

(7) ถาม: สามารถใช้รีเอเจนต์การถ่ายโอนยีนเพื่อการถ่ายโอนยีนบรรจุภัณฑ์เลนติไวรัสได้หรือไม่

A: การบรรจุเลนติไวรัสเป็นไปได้ แต่ประสิทธิภาพของการบรรจุเลนติไวรัสไม่จำเป็นต้องเกี่ยวข้องกับประสิทธิภาพของการถ่ายโอนยีน แต่ยังเกี่ยวข้องกับการคัดเลือกพลาสมิดบรรจุภัณฑ์และอัตราส่วนระหว่างพลาสมิดด้วย

(8) ถาม: สามารถใช้ Hieff Trans™ Liposome Nucleic Acid Transfection Reagent สำหรับการถ่ายโอนเซลล์แขวนลอยได้หรือไม่

A: สามารถใช้ Hieff Trans™ Liposome Nucleic Acid Transfection Reagent สำหรับการถ่ายโอนเซลล์แบบแขวนลอยได้ โปรดดูรายละเอียดใน Protocol นอกจากนี้ เรายังได้เปิดตัวรีเอเจนต์การถ่ายโอนสำหรับเซลล์แบบแขวนลอยโดยเฉพาะ (Cat No. 40805, Liposome nucleic acid transfection reagent for suspension cells)

[1] Liu R, Yang J, Yao J, Zhao Z, He W, Su N, Zhang Z, Zhang C, Zhang Z, Cai H, Zhu L, Zhao Y, Quan S, Chen X, Yang Y. การควบคุมการทำงานของ RNA และการเผาผลาญด้วยออปโตเจเนติกส์โดยใช้โปรตีนที่จับกับ RNA ที่เปลี่ยนแสงได้ซึ่งออกแบบขึ้น Nat Biotechnol. 3 ม.ค. 2022 doi: 10.1038/s41587-021-01112-1. เผยแพร่ก่อนพิมพ์ PMID: 34980910 (IF:54.908)

[2] Zhou J, Chen P, Wang H, Liu H, Li Y, Zhang Y, Wu Y, Paek C, Sun Z, Lei J, Yin L. Cas12a variants Designed for lower genome-wide off-target effect through tightent PAM recognition. Mol Ther. 2022 Jan 5;30(1):244-255. doi: 10.1016/j.ymthe.2021.10.010. Epub 2021 Oct 20. PMID: 34687846; PMCID: PMC8753454. (IF:11.454)

[3] เฉิน เอส, เฉา เอ็กซ์, จาง เจ, หวู่ ดับเบิลยู, จาง บี, จ่าว เอฟ.circVAMP3 ขับเคลื่อนการแยกเฟส CAPRIN1 และยับยั้งมะเร็งเซลล์ตับโดยยับยั้งการแปล c-Myc Adv Sci (Weinh) 2022 มี.ค.;9(8):e2103817 doi: 10.1002/advs.202103817 Epub 2022 ม.ค. 24 PMID: 35072355; PMCID: PMC8922094 (IF:16.808)

[4] Zhang Y, Yu X, Sun R, Min J, Tang X, Lin Z, Xie S, Li X, Lu S, Tian Z, Gu C, Teng L, Yang Y. Splicing factor arginine/serine-rich 8 ส่งเสริมให้เกิดมะเร็งไมอีโลม่าหลายแห่งและการทำลายกระดูกผ่านการตัดต่อทางเลือกของ CACYBP และการสื่อสารของเซลล์ที่ใช้เอ็กโซโซม Clin Transl Med. 2022 ก.พ.;12(2):e684 doi: 10.1002/ctm2.684 PMID: 35184390 (IF:11.492)

[5] Tang X, Deng Z, Ding P, Qiang W, Lu Y, Gao S, Hu Y, Yang Y, Du J, Gu C. โปรตีนชนิดใหม่ที่เข้ารหัสโดย circHNRNPU ส่งเสริมการลุกลามของ myeloma หลายรายการโดยควบคุมสภาพแวดล้อมจุลภาคของไขกระดูกและการประกบทางเลือก J Exp Clin มะเร็ง Res. 8 มี.ค. 2565;41(1):85. ดอย: 10.1186/s13046-022-02276-7. PMID: 35260179. (หาก:11.161)

[6] Hua Z, Wei R, Guo M, Lin Z, Yu X, Li X, Gu C, Yang Y. YTHDF2 ส่งเสริมการแพร่กระจายของเซลล์มะเร็งไมอีโลม่าหลายแห่งผ่านแกน STAT5A/MAP2K2/p-ERK Oncogene 2022 มี.ค.;41(10):1482-1491 doi: 10.1038/s41388-022-02191-3 Epub 2022 ม.ค. 24 PMID: 35075244 (IF:9.867)

[7] Liang Y, Lu Q, Li W, Zhang D, Zhang F, Zou Q, Chen L, Tong Y, Liu M, Wang S, Li W, Ren X, Xu P, Yang Z, Dong S, Zhang B, Huang Y, Li D, Wang H, Yu W. การฟื้นการทำงานของยีนระงับเนื้องอกในมะเร็งเต้านมโดยการสลับเอนฮานเซอร์ผ่านเครือข่าย NamiRNA Nucleic Acids Res. 2021 Sep 7;49(15):8556-8572. doi: 10.1093/nar/gkab626. PMID: 34329471; PMCID: PMC8421228 (ไอเอฟ:16.9)

[8] Dai L, Dai Y, Han J, Huang Y, Wang L, Huang J, Zhou Z. ข้อมูลเชิงลึกเกี่ยวกับการคัดเลือกคอมเพล็กซ์ BRCA1-BARD1 ไปยังโครมาตินที่เสียหาย Mol Cell. 1 กรกฎาคม 2021;81(13):2765-2777.e6. doi: 10.1016/j.molcel.2021.05.010. Epub 7 มิถุนายน 2021 PMID: 34102105. (IF:17.97)

[9] Zhang K, Wang A, Zhong K, Qi S, Wei C, Shu X, Tu WY, Xu W, Xia C, Xiao Y, Chen A, Bai L, Zhang J, Luo B, Wang W, Shen C. แกน UBQLN2-HSP70 ลดการรวมตัวกันของ poly-Gly-Ala และบรรเทาข้อบกพร่องทางพฤติกรรมในแบบจำลองสัตว์ C9ORF72 Neuron. 2021 มิถุนายน 16;109(12):1949-1962.e6. doi: 10.1016/j.neuron.2021.04.023. Epub 2021 พฤษภาคม 14 PMID: 33991504. (IF:17.17)

[10] Liang Y, Lu Q, Li W, Zhang D, Zhang F, Zou Q, Chen L, Tong Y, Liu M, Wang S, Li W, Ren X, Xu P, Yang Z, Dong S, Zhang B, Huang Y, Li D, Wang H, Yu W. การฟื้นการทำงานของตัวกดเนื้องอกในมะเร็งเต้านมโดยการสลับเอนฮานเซอร์ผ่านเครือข่าย NamiRNA Nucleic Acids Res. 2021 Sep 7;49(15):8556-8572. doi: 10.1093/nar/gkab626. PMID: 34329471; PMCID: PMC8421228. (IF:16.9)

[11] Li T, Chen X, Qian Y, Shao J, Li X, Liu S, Zhu L, Zhao Y, Ye H, Yang Y อุปกรณ์ออปโตเจเนติกส์สังเคราะห์ที่ใช้ BRET สำหรับการแสดงออกของทรานส์ยีนแบบเป็นจังหวะซึ่งช่วยรักษาสมดุลของกลูโคสในหนู Nat Commun. 27 ม.ค. 2021;12(1):615. doi: 10.1038/s41467-021-20913-1. PMID: 33504786; PMCID: PMC7840992. (IF:14.92)

[12] Pan Y, He X, Li C, Li Y, Li W, Zhang H, Wang Y, Zhou G, Yang J, Li J, Qu J, Wang H, Gao Z, Shen Y, Li T, Hu H, Ma H กิจกรรมของเซลล์ประสาทดึงดูดแกน CRTC1/CREB เพื่อขับเคลื่อนออโตฟาจีที่ขึ้นอยู่กับการถอดรหัสเพื่อรักษา LTD ในระยะหลัง Cell Rep. 2021 ก.ค. 20;36(3):109398 doi: 10.1016/j.celrep.2021.109398 PMID: 34289350 (IF:9.42)

[13] Liu H, Xing R, Ou Z, Zhao J, Hong G, Zhao TJ, Han Y, Chen Y. G-protein-coupled receptor GPR17 ยับยั้งการพัฒนาของก้อนเนื้อในสมองโดยเพิ่มการผลิต ROS ที่เกิดจาก polycomb repressive complex 1 Cell Death Dis. 2021 มิถุนายน 12;12(6):610. doi: 10.1038/s41419-021-03897-0. PMID: 34120140; PMCID: PMC8197764. (IF:8.463)

[14] Fan Y, Wang J, Jin W, Sun Y, Xu Y, Wang Y, Liang X, Su D.CircNR3C2 ส่งเสริมผลการยับยั้งเนื้องอกที่เกิดจาก HRD1 ผ่านการดูดซับ miR-513a-3p ในมะเร็งเต้านมชนิดสามชนิดลบ Mol Cancer 2 กุมภาพันธ์ 2021;20(1):25 doi: 10.1186/s12943-021-01321-x PMID: 33530981; PMCID: PMC7851937 (IF:27.403)

[15] Gu C, Wang Y, Zhang L, Qiao L, Sun S, Shao M, Tang X, Ding P, Tang C, Cao Y, Zhou Y, Guo M, Wei R, Li N, Xiao Y, Duan J, Yang Y AHSA1 เป็นเป้าหมายการบำบัดที่มีแนวโน้มดีสำหรับการแพร่กระจายของเซลล์และการดื้อต่อสารยับยั้งโปรตีเอโซมในมะเร็งไมอีโลม่าหลายแห่ง J Exp Clin Cancer Res. 6 ม.ค. 2022;41(1):11. doi: 10.1186/s13046-021-02220-1. PMID: 34991674; PMCID: PMC8734095. (IF:11.161)

[16] Luo Q, Wu X, Zhao P, Nan Y, Chang W, Zhu X, Su D, Liu Z. OTUD1 กระตุ้นการตายของเซลล์แบบอิสระจากคาสเปสและแบบพึ่งพาคาสเปสโดยส่งเสริมการเคลื่อนย้ายนิวเคลียสของ AIF และการย่อยสลายของ MCL1 Adv Sci (Weinh) 8 กุมภาพันธ์ 2021;8(8):2002874 doi: 10.1002/advs.202002874 PMID: 33898171; PMCID: PMC8061361 (IF:15.84)

[17] Luo Q, Wu X, Nan Y, Chang W, Zhao P, Zhang Y, Su D, Liu Z. TRIM32/USP11 สร้างสมดุลระหว่างเสถียรภาพของ ARID1A และสถานะการก่อมะเร็ง/การยับยั้งเนื้องอกของมะเร็งเซลล์สความัส Cell Rep. 7 ม.ค. 2020;30(1):98-111.e5. doi: 10.1016/j.celrep.2019.12.017. PMID: 31914402. (IF:9.42)

[18] Sun X, Peng X, Cao Y, Zhou Y, Sun Y. ADNP ส่งเสริมการสร้างความแตกต่างของระบบประสาทโดยการปรับสัญญาณ Wnt/β-catenin แนทคอม. 12 มิ.ย. 2020;11(1):2984. ดอย: 10.1038/s41467-020-16799-0. PMID: 32533114; PMCID: PMC7293280. (หาก:14.911)

[19] Yang X, Wang H, Xie E, Tang B, Mu Q, Song Z, Chen J, Wang F, Min J. การเชื่อมต่อสัญญาณ ERBB3 และ ERK ใหม่ช่วยให้ต้านทานการยับยั้ง FGFR1 ในมะเร็งทางเดินอาหารที่มีการกลายพันธุ์ ERBB3-E928G Protein Cell. 2020 ธ.ค.;11(12):915-920. doi: 10.1007/s13238-020-00749-z. PMID: 32632529; PMCID: PMC7719122. (IF:14.872)

[20] Chen, T., Chen, Y., Chen, H. และคณะ นาโนแมชชีนเดินดีเอ็นเอไร้ขอบเขตที่ขับเคลื่อนด้วยเอนไซม์คู่สำหรับการถ่ายภาพภายในเซลล์ของไมโครอาร์เอ็นเอที่แสดงออกต่ำ Nano Res. 12, 1055–1060 (2019) https://doi.org/10.1007/s12274-019-2344-5 (ถ้า:8.21)

[21] Zhang X, Qi Z, Yin H, Yang G. ปฏิสัมพันธ์ระหว่าง p53 และการส่งสัญญาณ Ras ควบคุมความต้านทานต่อซิสแพลตินผ่านการควบคุมอะพอพโทซิสและออโตฟาจีที่เกิดจาก HDAC4 และ HIF-1α Theranostics 30 ม.ค. 2562;9(4):1096-1114 doi: 10.7150/thno.29673 PMID: 30867818; PMCID: PMC6401400 (IF:8.12)

[22] Zou Y, Wang A, Shi M, Chen X, Liu R, Li T, Zhang C, Zhang Z, Zhu L, Ju Z, Loscalzo J, Yang Y, Zhao Y การวิเคราะห์ภูมิประเทศรีดอกซ์และพลวัตในเซลล์ที่มีชีวิตและในร่างกายโดยใช้เซ็นเซอร์ฟลูออเรสเซนต์ที่เข้ารหัสทางพันธุกรรม Nat Protoc. 2018 ต.ค.;13(10):2362-2386 doi: 10.1038/s41596-018-0042-5 PMID: 30258175; PMCID: PMC6714056 (IF:13.49)

[23] Zhang K, Zhao X, Chen X, Wei Y, Du W, Wang Y, Liu L, Zhao W, Han Z, Kong D, Zhao Q, Guo Z, Han Z, Liu N, Ma F, Li Z. Enhanced Therapeutic Effects of Mesenchymal Stem Cell-Derived Exosomes with an Injectable Hydrogel for Hindlimb Ischemia Treatment. ACS Appl Mater Interfaces. 2018 กันยายน 12;10(36):30081-30091. doi: 10.1021/acsami.8b08449. Epub 2018 สิงหาคม 29. PMID: 30118197. (IF:8.09)

[24] Hao H, Hu S, Chen H, Bu D, Zhu L, Xu C, Chu F, Huo X, Tang Y, Sun X, Ding BS, Liu DP, Hu S, Wang M. การสูญเสีย Endothelial CXCR7 ทำให้การรักษาสมดุลของหลอดเลือดและการปรับโครงสร้างของหัวใจหลังกล้ามเนื้อหัวใจตายเสียหาย: ผลกระทบต่อการค้นพบยาสำหรับหลอดเลือดและหัวใจ Circulation 28 มีนาคม 2017;135(13):1253-1264 doi: 10.1161/CIRCULATIONAHA.116.023027 Epub 2 กุมภาพันธ์ 2017 PMID: 28154007 (IF:18.881)