โพลีเบรน (เฮกซาดิเมทรินโบรไมด์) หรือที่รู้จักกันในชื่อโพลีเบรน เป็นพอลิเมอร์ประจุบวกที่ใช้กันทั่วไปในการทดลองถ่ายโอนยีนด้วยดีเอ็นเอกับเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนของไลโปโซม โพลีเบรนใช้กันอย่างแพร่หลายในการถ่ายโอนยีนโดยอาศัยเรโทรไวรัสและการถ่ายโอนยีนโดยอาศัยเลนติไวรัส กลไกการออกฤทธิ์อาจเกี่ยวข้องกับการทำให้กรดไซอะลิกเป็นกลางบนพื้นผิวเซลล์ อำนวยความสะดวกในการดูดซับโดยเอาชนะแรงผลักไฟฟ้าสถิตด้วยอนุภาคไวรัส โพลีเบรนยังได้รับการยอมรับว่าเป็นสารกันเลือดแข็ง (สารต้านเฮปาริน) และมักใช้ในการผลิตเซลล์เม็ดเลือดแดงที่รวมตัวกันไม่จำเพาะ นอกจากนี้ ในการจัดลำดับโปรตีน โพลีเบรนในปริมาณต่ำได้รับการพิสูจน์แล้วว่าสามารถปรับปรุงการย่อยสลายของเปปไทด์ได้อย่างมีนัยสำคัญในการวิเคราะห์การจัดลำดับอัตโนมัติ การเติมโพลีเบรนลงในเมมเบรน PVDF ยังช่วยเพิ่มความสัมพันธ์ของเมมเบรนได้อีกด้วย

ข้อมูลจำเพาะ

ผลิตภัณฑ์มีรูปแบบสารละลาย และผงจะถูกสร้างใหม่ใน NaCl 0.9% เพื่อให้ได้สารละลาย 10 มก./มล. จากนั้นจึงฆ่าเชื้อโดยใช้ตัวกรองขนาด 0.22 ไมโครเมตร โดยทั่วไปจะเจือจางในอัตราส่วน 1:1000-1:2000 สำหรับการใช้งาน โดยมีอัตราส่วนการเจือจางเฉพาะขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์ตามที่ระบุไว้ในเอกสารที่เกี่ยวข้อง

การขนส่งและการเก็บรักษา

แนะนำให้ขนส่งและจัดเก็บที่อุณหภูมิ -20 องศาเซลเซียส โดยมีอายุการเก็บรักษา 2 ปี แนะนำให้แบ่งส่วนและจัดเก็บเพื่อหลีกเลี่ยงการแช่แข็งและละลายซ้ำๆ

ข้อควรระวัง:

1. สวมชุดห้องปฏิบัติการและถุงมือแบบใช้แล้วทิ้งเพื่อความปลอดภัยและสุขภาพ

2. ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น

ขั้นตอนการดำเนินงาน

(สำหรับการอ้างอิง ความเข้มข้นที่เฉพาะเจาะจงอาจแตกต่างกัน โปรดดูเอกสารที่เกี่ยวข้อง):

หมายเหตุ: โพลีเบรนอาจแสดงความเป็นพิษอย่างมีนัยสำคัญต่อเซลล์บางชนิด (เช่น เซลล์ประสาทที่แยกความแตกต่างในระยะสุดท้าย เซลล์ DC) และแนะนำให้ทดสอบความเป็นพิษก่อนการใช้ครั้งแรก

การทดลองที่ 1: การติดเชื้อไวรัสย้อนกลับ

1. การเตรียมสต็อกเรโทรไวรัสแบบรีคอมบิแนนท์: เพาะเลี้ยงเซลล์ที่มีโมโนเลเยอร์ของเซลล์ที่บรรจุเรโทรไวรัสที่ผ่านการทรานส์เฟกชันในจานขนาด 100 มม. พร้อมอาหารเลี้ยงเชื้อ 5 มล. (เซรั่ม 5%) หลังจากผ่านไป 24 ชั่วโมง ให้เอาอาหารเลี้ยงเชื้อออกแล้วกรองผ่านตัวกรองขนาด 0.45 ไมโครเมตร

2. การเพาะเลี้ยงเซลล์เพื่อการติดเชื้อ: ในจานขนาด 100 มม. เติมอาหารเพาะเลี้ยงที่สมบูรณ์ 10 มล. ที่มีความหนาแน่นของเซลล์ 5 เท่า10⁵ ต่อจาน

3. การติดเชื้อไวรัส: หลังจากเพาะเลี้ยงเซลล์เป็นเวลา 24 ชั่วโมง ให้แยกอาหารเลี้ยงเชื้อทั้งหมดออก ติดเชื้อเซลล์ด้วยของเหลวเหนือตะกอนไวรัส 2 มล. ที่มีโพลีเบรน (ความเข้มข้นสุดท้าย: 5-10 μg/mL) ที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 3-6 ชั่วโมง

4. เก็บอนุภาคไวรัส: เติมอาหารเลี้ยงเชื้อที่สมบูรณ์ 8 มล. หลังจากเพาะเชื้อเป็นเวลา 2-3 วัน ให้เก็บอาหารเลี้ยงเชื้อเพื่อรับอนุภาคไวรัส

การทดลองที่ 2: การถ่ายโอนยีน

1. เพาะเลี้ยงเซลล์ในอาหารเลี้ยงเชื้อที่สมบูรณ์โดยมีความหนาแน่นของเซลล์ประมาณ 50%

2. หลังจากเพาะเลี้ยงเซลล์เป็นเวลา 18-24 ชั่วโมง ให้เตรียมส่วนผสมของอาหารเลี้ยงเชื้อ DNA-โพลีเบรน เติมอาหารเลี้ยงเชื้อที่สมบูรณ์ (2 มล. สำหรับจานขนาด 60 มม., 3 มล. สำหรับจานขนาด 100 มม.) และอุ่นเครื่องไว้ที่ 37°C ผสมพลาสมิด 10 นาโนกรัม~10 ไมโครกรัมเบาๆ เติมโพลีเบรนจนมีความเข้มข้นสุดท้าย 5-10 μg/mL ผสมเบาๆ ควรเติมส่วนประกอบแต่ละอย่างตามลำดับที่กำหนด

3. นำอาหารเลี้ยงเชื้อออกแล้วเติมสารละลายโพลีเบรนสำหรับเลี้ยงเชื้อ DNA ลงในเซลล์ที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 6-20 ชั่วโมง ค่อยๆ ผสมทุกๆ 1.5 ชั่วโมงภายใน 6 ชั่วโมงแรกของการเลี้ยงเซลล์

4. นำสารละลายโพลีเบรนซึ่งเป็นตัวกลางในการเจริญ DNA ออก คลุมเซลล์ด้วยสารละลายช็อก DMSO (DMSO 15% ใน 1× HBSS)เขย่าจานเพาะเชื้อเบาๆ เป็นเวลา 10 วินาทีทุกครั้งที่เติมสารละลายลงไป เพื่อให้กระจายตัวอย่างสม่ำเสมอ ฟักเซลล์ที่อุณหภูมิ 37°C เป็นเวลา 4 นาที

5. รีบนำสารละลายช็อก DMSO ออกทันที แล้วล้างเซลล์เบาๆ สองครั้งด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อที่สมบูรณ์ สำหรับจานขนาด 60 มม. ให้ล้างด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ 5 มล. ทุกครั้ง และสำหรับจานขนาด 100 มม. ให้ล้างด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อ 10 มล. ทุกครั้ง

6. เติมอาหารเจริญเติบโตที่สมบูรณ์ให้แก่เซลล์

7. การแสดงออกของโปรตีน: หลังจากผ่านการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24-72 ชั่วโมง ให้รวบรวมเซลล์เพื่อวิเคราะห์การแสดงออกของโปรตีนตามความจำเป็น

การคัดเลือกเซลล์: หลังจากเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 24-72 ชั่วโมง ขึ้นอยู่กับสถานะเซลล์ ให้เปลี่ยนไปใช้ตัวกลางการคัดเลือกสด และดำเนินการคัดเลือกเซลล์ต่อไป