คำอธิบาย
รีเอเจนต์ถ่ายโอนยีนสากล Hieff Trans™ เป็นรีเอเจนต์ถ่ายโอนยีนไลโปโซมเอนกประสงค์ สะดวก และมีประสิทธิภาพ ซึ่งพัฒนาขึ้นจากนาโนเทคโนโลยีล่าสุด รีเอเจนต์นี้เหมาะสำหรับการถ่ายโอนยีน DNA, RNA และโอลิโกนิวคลีโอไทด์ รวมถึงเซลล์หลัก เซลล์ที่ถ่ายโอนยีนได้ยาก รวมถึงเซลล์ประสาท มีประสิทธิภาพในการถ่ายโอนยีนสูง สูตรเฉพาะของรีเอเจนต์นี้ช่วยให้เติมลงในตัวกลางได้โดยตรง และการมีซีรั่มไม่ส่งผลต่อประสิทธิภาพในการถ่ายโอนยีน ซึ่งช่วยลดความเสียหายต่อเซลล์ที่เกิดจากการกำจัดซีรั่ม ไม่จำเป็นต้องกำจัดคอมเพล็กซ์รีเอเจนต์ถ่ายโอนยีนกรดนิวคลีอิกหรือเปลี่ยนด้วยตัวกลางใหม่หลังการถ่ายโอนยีน และสามารถเปลี่ยนตัวกลางใหม่ได้หลังจากผ่านไป 4-6 ชั่วโมง ขึ้นอยู่กับสถานะของสารอาหารในเซลล์
ส่วนประกอบของผลิตภัณฑ์
| หมายเลขส่วนประกอบ | ส่วนประกอบ | #/ขนาดแมว | ||
| 40808ES02 | 40808ES03 | 40808ES03 | ||
| 40808-ก | ยูนิเวอร์แซล-เอ | 0.5 มล. | 1 มล. | 5×1 มล. |
| 40808-ข | ยูนิเวอร์แซล-บี | 0.5 มล. | 1 มล. | 5×1 มล. |
การขนส่งและการเก็บรักษา
สินค้าจัดส่งพร้อมถุงน้ำแข็งและสามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8℃ ได้นาน 1 ปี ห้ามแช่แข็ง!
ข้อควรระวัง
1) ในระหว่างการดำเนินการถ่ายโอนยีน จะดีกว่าหากการบรรจบกันของเซลล์ถึง 70%-90% และความหนาแน่นของการชุบเฉพาะจะถูกกำหนดตามสถานการณ์ของเซลล์
2) การเตรียมสารเชิงซ้อนของการถ่ายโอนยีนต้องมีการเจือจาง DNA และสารปฏิกิริยาการถ่ายโอนยีนในตัวกลางที่ไม่มีซีรั่ม
3) ไม่สามารถเติมยาปฏิชีวนะลงในอาหารเลี้ยงเชื้อระหว่างการถ่ายยีน
4) การใช้ DNA หรือ RNA ที่มีความบริสุทธิ์สูงช่วยให้ได้รับประสิทธิภาพการถ่ายโอนที่สูงขึ้น และเอนโดทอกซินในพลาสมิดเป็นศัตรูของการถ่ายโอน
5) เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8ºC ระวังอย่าเปิดฝาซ้ำๆ เป็นเวลานาน
6) ควรปรับความเข้มข้นของกรดนิวคลีอิกและปริมาตรของรีเอเจนต์ให้เหมาะสมสำหรับการใช้ครั้งแรกเพื่อให้ได้ประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนสูงสุด
7) ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น!
คำแนะนำ
การถ่ายโอนดีเอ็นเอ
[หมายเหตุ] ปริมาณรีเอเจนต์ทรานส์เฟกชันที่ใช้ขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์และเงื่อนไขการทดลองอื่นๆ ขอแนะนำให้ตั้งค่าการไล่ระดับเพื่อให้ได้ปริมาณการใช้ที่เหมาะสมที่สุดสำหรับครั้งแรก
1) เซลล์ได้รับการเพาะเลี้ยง และความหนาแน่นของเซลล์ควรอยู่ที่ 70%-90% เมื่อถึงเวลาของการถ่ายยีน
2) เจือจางสารละลาย Universal-B ด้วยตัวกลาง Opti-MEM ตามตารางด้านล่างและผสมเบาๆ
3) เจือจาง DNA ด้วยตัวกลาง Opti-MEM เพื่อให้ได้ DNA พรีมิกซ์ จากนั้นเติมสารละลาย Universal-A และผสมเบาๆ เพื่อให้ได้ DNA ที่เจือจาง
4) เติม DNA ที่เจือจางลงในสารละลาย Universal-B ที่เจือจาง (อัตราส่วน 1:1)
5) ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 5 นาที
6) เติมคอมเพล็กซ์ DNA-ไลโปโซมลงในเซลล์โดยค่อยๆ หยดลงไปแล้วผสมเบาๆ
7) ฟักที่อุณหภูมิ 37°C, 5% CO2 เป็นเวลา 48-96 ชั่วโมง จนกว่าจะวิเคราะห์การแสดงออกของยีน
การถ่ายโอนยีนของ siRNA
ขั้นตอนสำหรับการถ่ายโอนยีน siRNA จะเหมือนกับการถ่ายโอนยีน DNA ยกเว้นว่าไม่จำเป็นต้องเติมสารละลาย Universal-A (ขั้นตอนที่ 3) เมื่อเจือจาง siRNA
ตารางที่ 1 ปริมาณการถ่ายโอนในภาชนะเพาะเลี้ยงเซลล์ต่าง ๆ (เพื่อใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงเท่านั้น)
| ภาชนะเพาะเลี้ยงเซลล์ | 96 หลุม | 24 หลุม | 6 หลุม | |
| เซลล์ที่ยึดติด | 1-4×104 | 0.5-2×105 | 0.25-1×106 | |
| เจือจางสารละลาย Universal-B ด้วยตัวกลาง Opti-MEM ตามตารางด้านล่างและผสมเบาๆ | สื่อ Opti-MEM | 5 ไมโครลิตร | 25 ไมโครลิตร | 125 ไมโครลิตร |
| ยูนิเวอร์แซล-บี | 0.2 ไมโครลิตร | 1 ไมโครลิตร | 5 ไมโครลิตร | |
| เจือจาง DNA ด้วย Opti-MEM medium เพื่อให้ได้ DNA premix จากนั้นเติมสารละลาย Universal-A และผสมเบาๆ เพื่อให้ได้ DNA ที่เจือจาง | สื่อ Opti-MEM | 5 ไมโครลิตร | 25 ไมโครลิตร | 125 ไมโครลิตร |
| ดีเอ็นเอ (0.5–5 μg/μL) | 0.1 ไมโครกรัม | 0.5 ไมโครกรัม | 2.5 ไมโครกรัม | |
| ยูนิเวอร์แซล-เอ (2 μL/μg DNA) | 0.2 ไมโครลิตร | 1 ไมโครลิตร | 5 ไมโครลิตร | |
| เติม DNA ที่เจือจางลงในสารละลาย Universal-B ที่เจือจาง (อัตราส่วน 1:1) | สารละลายดีเอ็นเอเจือจาง | 5 ไมโครลิตร | 25 ไมโครลิตร | 125 ไมโครลิตร |
| ยูนิเวอร์แซล-บี | 5 ไมโครลิตร | 25 ไมโครลิตร | 125 ไมโครลิตร | |
| ฟักที่อุณหภูมิห้องประมาณ 5 นาที | ||||
| คอมเพล็กซ์ดีเอ็นเอ-ไลโปโซม | ส่วนประกอบ(แต่ละส่วน) | 96 หลุม | 24 หลุม | 6 หลุม |
| ออปติ-เมม | 10 ไมโครลิตร | 50 ไมโครลิตร | 250 ไมโครลิตร | |
| ดีเอ็นเอ(0.5–5 ไมโครกรัม/ไมโครลิตร) | 0.1 ไมโครกรัม | 0.5 ไมโครกรัม | 2.5 ไมโครกรัม | |
| ยูนิเวอร์แซล-บี | 0.2 ไมโครลิตร | 1 ไมโครลิตร | 5 ไมโครลิตร | |
| ยูนิเวอร์แซล-เอ | 0.2 ไมโครลิตร | 1 ไมโครลิตร | 5 ไมโครลิตร | |
| เติมคอมเพล็กซ์ DNA-ไลโปโซมลงในเซลล์โดยค่อยๆ หยดลงไปแล้วผสมเบาๆ | คอมเพล็กซ์ดีเอ็นเอ-ไลโปโซม | 10 ไมโครลิตร | 50 ไมโครลิตร | 250 ไมโครลิตร |
[หมายเหตุ] ปริมาณที่ใช้ในตารางเป็นเพียงข้อมูลอ้างอิงเท่านั้น ปริมาณเฉพาะของ DNA และสารละลาย Universal-B ที่ใช้ควรปรับให้เหมาะสมตามประเภทของเซลล์และเงื่อนไขการทดลองอื่นๆ ขอแนะนำให้รักษาอัตราส่วนไว้ระหว่าง 1:0.5-1:5
(1) ถาม: สามารถมีเซรั่มอยู่ได้หรือไม่เมื่อเตรียมสารเชิงซ้อนของรีเอเจนต์การถ่ายโอนกรดนิวคลีอิก?
A: การมีซีรั่มจะส่งผลต่อการสร้างไลโปโซม ขอแนะนำให้ใช้ตัวกลางที่ไม่มีซีรั่ม (โดยทั่วไปคือตัวกลาง MEM) เมื่อเตรียมคอมเพล็กซ์รีเอเจนต์การถ่ายโอนกรดนิวคลีอิก
(2) ถาม: สามารถแช่แข็งรีเอเจนต์การถ่ายโอนยีนได้หรือไม่
A: ต้องเก็บสารเคมีนี้ที่อุณหภูมิ 2-8°C และควรหลีกเลี่ยงการเปิดฝาซ้ำๆ เป็นเวลานาน เนื่องจากการเปิดฝาเป็นเวลานานจะทำให้เกิดออกซิเดชันของไลโปโซมและส่งผลต่อประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีน
(3) ถาม: ฉันควรใส่ใจอะไรบ้างเมื่อใช้ Hieff Trans™ Universal Transfection Reagent?
A: 1) ในระหว่างการดำเนินการถ่ายโอนยีน จะดีกว่าหากการบรรจบกันของเซลล์ถึง 70%-90% และความหนาแน่นของการชุบเฉพาะจะถูกกำหนดตามสถานการณ์ของเซลล์
2) การเตรียมสารเชิงซ้อนของการถ่ายโอนยีนต้องมีการเจือจาง DNA และสารปฏิกิริยาการถ่ายโอนยีนในตัวกลางที่ไม่มีซีรั่ม
3) ไม่สามารถเติมยาปฏิชีวนะลงในอาหารเลี้ยงเชื้อระหว่างการถ่ายยีน
4) การใช้ DNA หรือ RNA ที่มีความบริสุทธิ์สูงช่วยให้ได้รับประสิทธิภาพการถ่ายโอนที่สูงขึ้น และเอนโดทอกซินในพลาสมิดเป็นศัตรูของการถ่ายโอน
5) เก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8ºC ระวังอย่าเปิดฝาซ้ำๆ เป็นเวลานาน
6) ควรปรับความเข้มข้นของกรดนิวคลีอิกและปริมาตรของรีเอเจนต์ให้เหมาะสมสำหรับการใช้ครั้งแรกเพื่อให้ได้ประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีนสูงสุด
(4) ถาม: จำเป็นต้องยุติหลังการถ่ายยีนหรือไม่?
A: ไม่จำเป็น ไม่จำเป็นต้องเอาคอมเพล็กซ์รีเอเจนต์การถ่ายยีนกรดนิวคลีอิกออกหรือเปลี่ยนด้วยตัวกลางใหม่หลังการถ่ายยีน และสามารถเปลี่ยนตัวกลางใหม่ได้หลังจากผ่านไป 4-6 ชั่วโมง ขึ้นอยู่กับสถานะสารอาหารของเซลล์
(5) ถาม: สามารถใช้รีเอเจนต์การถ่ายโอนยีนเพื่อการถ่ายโอนยีนการบรรจุเวกเตอร์ไวรัสได้หรือไม่
ก. ใช่.ประสิทธิภาพของการบรรจุเวกเตอร์ไวรัสไม่จำเป็นต้องเกี่ยวข้องกับประสิทธิภาพของการถ่ายโอนยีน แต่ยังเกี่ยวข้องกับการคัดเลือกพลาสมิดบรรจุภัณฑ์และอัตราส่วนระหว่างพลาสมิดอีกด้วย
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม