คำอธิบาย
รีเอเจนต์ทรานสเฟกชันโพลีเอทิลีนอิมีนเชิงเส้น PEI 25000 เป็นพอลิเมอร์ที่มีประจุบวกสูงซึ่งจับกับโมเลกุลกรดนิวคลีอิกที่มีประจุลบได้ง่าย สร้างสารเชิงซ้อน และอนุญาตให้สารเชิงซ้อนเข้าสู่เซลล์ รีเอเจนต์ทรานสเฟกชันเป็นรีเอเจนต์ทรานสเฟกชันชั่วคราวที่มีพิษต่อเซลล์ต่ำ ประสิทธิภาพทรานสเฟกชันสูง และประสิทธิภาพการแสดงออกของยีนสูงในเซลล์ เช่น HEK293 และ CHO ได้รับการยืนยันแล้วว่ารีเอเจนต์ทรานสเฟกชัน PEI เชิงเส้นสามารถนำไปใช้ได้กับสายเซลล์ต่างๆ มากมาย เช่น เซลล์ HEK-293, HEK293T, CHO-K1, COS-1, COS-7, NIH/3T3, Sf9, HepG2 และ Hela เป็นต้น รีเอเจนต์นี้เข้ากันได้กับตัวกลางที่มีซีรั่มและสามารถนำกรดนิวคลีอิกเข้าสู่เซลล์ได้อย่างมีประสิทธิภาพ
ข้อมูลจำเพาะ
| ชื่อ | โพลีเอทิลีนเอมีนเชิงเส้น (เกาะพงพีอี) ม.W25000 |
| หมายเลข CAS | 9002-98-6, 26913-06-4 |
| สูตรโมเลกุล | (ช2ช.2น.ส.)น |
| น้ำหนักโมเลกุล | 25,000 |
| รูปร่าง | สีขาว หรือผงสีเหลืองอ่อน |
| จุดหลอมเหลว | 73-75 ℃ |
| ความสามารถในการละลาย | ละลายได้ในน้ำร้อน น้ำเย็นที่มีค่า pH ต่ำ เมทานอล และเอธานอล ไม่ละลายในเบนซิน อีเธอร์ และอะซิโตน |
| โครงสร้าง |
|
การขนส่งและการเก็บรักษา
สินค้าจะถูกจัดส่งที่อุณหภูมิห้องและสามารถเก็บผงได้ที่อุณหภูมิ 2-8ºC นาน 2 ปี ส่วนสารละลายพื้นฐานจะถูกเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 2-8ºC นาน 3 เดือน
ข้อควรระวัง
1) หลังจากนำสารละลาย PEI ที่เตรียมไว้ออกจากอุณหภูมิ -20 ºC และละลายแล้ว สามารถเก็บไว้ในตู้เย็น 4 ºC ได้ และห้ามนำไปแช่แข็งซ้ำ
2) สำหรับเซลล์ส่วนใหญ่ การใช้สารถ่ายโอนยีน PEI 3.0 μL ต่อ DNA 1 μg จะช่วยให้การถ่ายโอนยีนมีประสิทธิภาพสูง นอกจากนี้ คุณยังสามารถลองใช้สารถ่ายโอนยีน PEI เชิงเส้นปริมาณ 1.5~4 μL ต่อ DNA 1 μg เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพได้อีกด้วย
3) เพื่อความปลอดภัยและสุขภาพของคุณ โปรดสวมเสื้อคลุมแล็บ, ถุงมือแบบใช้แล้วทิ้ง และเครื่องดูดควันขณะปฏิบัติงาน
4) ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยทางวิทยาศาสตร์เท่านั้น ไม่ใช่เพื่อใช้สำหรับมนุษย์
สารละลายสต๊อก เตรียม (1 มก./มล.)
1. วัสดุ
PEI 25000, น้ำ/น้ำสำหรับฉีด Milli-Q® (WFI) หรือน้ำทางชีวภาพเกรดใกล้เคียงกัน, กรดไฮโดรคลอริก (HCl) 12 โมล/ลิตร, โซเดียมไฮดรอกไซด์ (NaOH) 10 โมล/ลิตร, แผ่นกรองปลอดเชื้อสุญญากาศ PES แบบใช้แล้วทิ้งขนาด 0.1~0.2 μm, ขวดเก็บ HDPE หรือโพลีโพรพีลีนปลอดเชื้อ
2. เตรียมสารละลายสต๊อก (1 มก./มล.)
1) ในบีกเกอร์แก้วขนาด 1 ลิตร เติมผง PEI 25000 1 กรัมลงในน้ำบริสุทธิ์พิเศษ Milli-Q® 900 มล. หรือน้ำชีวภาพเทียบเท่าอื่นๆ แล้วคนให้เข้ากันบนเครื่องกวนแม่เหล็กเพื่อสร้างกระแสน้ำวนขนาดเล็ก
2) เติมกรดไฮโดรคลอริก (12 โมล/ลิตร) ทีละหยดขณะคนเพื่อปรับ pH จนกระทั่ง pH <2.0
3) ปิดปากบีกเกอร์แล้วคนเป็นเวลา 3 ชั่วโมงจนละลายหมด รักษาค่า pH ไว้ < 2.0 ตลอดขั้นตอน
【หมายเหตุ】: อาจมีอนุภาคเส้นใยเล็กๆ บางส่วนที่ไม่สามารถละลายได้ ซึ่งถือเป็นปรากฏการณ์ปกติ
4) เติม NaOH (10 โมล/ลิตร) ทีละหยดขณะคนเพื่อปรับค่า pH จนถึง 6.9 ~7.1
5) ถ่ายสารละลายลงในกระบอกสูบที่มีมาตรวัด และเติมน้ำให้ได้ปริมาตร 1 ลิตร
6) กรองและฆ่าเชื้อด้วยตัวกรองสุญญากาศ PES แบบใช้แล้วทิ้งขนาด 0.1-0.2 µm เพื่อให้ได้สารละลายสต็อก 1 มก./มล.
7) แบ่งส่วนตามต้องการและเก็บที่อุณหภูมิ -20 °C คงตัวเป็นเวลา 1 ปี
【หมายเหตุ】: หลังจากละลายน้ำแข็งอีกครั้งแล้ว สามารถเก็บไว้ที่อุณหภูมิ 4°C และคงตัวได้เป็นเวลา 2 สัปดาห์ แต่ห้ามแช่แข็งซ้ำ
ขั้นตอนการถ่ายโอนยีน (ใช้จาน 6 หลุมเป็นตัวอย่าง)
1. การเพาะเซลล์: เพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการถ่ายโอนยีน แนะนำให้เพาะเซลล์หนึ่งวันก่อนการถ่ายโอนยีน และความหนาแน่นของเซลล์ในเวลาการถ่ายโอนยีนควรอยู่ที่ 70%~80%
2. เตรียมคอมเพล็กซ์ DNA-PEI: เตรียมคอมเพล็กซ์รีเอเจนต์การถ่ายโอนกรดนิวคลีอิก DNA-PEI ตามระบบต่อไปนี้:
1) สำหรับแต่ละหลุมของเซลล์ ให้เจือจาง DNA เป้าหมาย 2 μg ด้วยอาหารเลี้ยงเชื้อปราศจากซีรั่ม 100 μL แล้วผสมให้เข้ากันเพื่อสร้างการเจือจาง DNA
[หมายเหตุ]: แนะนำให้ใช้ Opti-MEM หรือ ddH2O สำหรับสารเจือจางที่ไม่มีซีรั่ม
2) เติมสารถ่ายโอนยีน PEI 25000 ปริมาณ 5 μL ลงในสารเจือจาง DNA ปริมาณ 100 μL ทันที เขย่าด้วยเครื่องวอร์เท็กซ์เป็นเวลา 10 วินาที แล้วผสมให้เข้ากัน
3) ฟักที่อุณหภูมิห้องเป็นเวลา 10-25 นาที เพื่อสร้างสารเชิงซ้อนของรีเอเจนต์การถ่ายโอนกรดนิวคลีอิกบวก DNA-PEI
3. เซลล์ที่ถูกถ่ายโอน:
1) ในระหว่างการสร้างเชิงซ้อน ให้เอาส่วนผสมการเจริญเติบโตของเซลล์ออก และเติมส่วนผสมที่สมบูรณ์ที่อุ่นไว้ล่วงหน้า 2 มิลลิลิตรลงในแต่ละหลุม
2) เติมกรดนิวคลีอิก DNA-PEI-PEI complex ปริมาตร 100 μL ลงในเซลล์โดยตรง เขย่าแผ่นเพาะเลี้ยง และผสมเบาๆ
3) เพาะเลี้ยงในตู้ฟักที่อุณหภูมิ 37°C ที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 5% และสามารถตรวจพบการแสดงออกของทรานส์ยีนได้ภายใน 7 ชั่วโมงหลังการทรานส์เฟกชัน โปรดกำหนดเวลาทดสอบที่เหมาะสมด้วยตัวคุณเอง
4. การคัดกรองแบบหมุนคงที่ (ทางเลือก)
หลังจากถ่ายโอนยีนไปแล้ว 24 ชั่วโมง เซลล์จะถูกเพาะเลี้ยงต่อในอาหารเลี้ยงเชื้อสด (เจือจางเซลล์มากกว่า 10 เท่า) และฟักค้างคืนที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียสในตู้ฟักที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 5% วันรุ่งขึ้น จะมีการเติมยาคัดกรองที่ตรงกับยีนต้านทานการถ่ายโอนยีนลงไป โคลนที่ต้านทานยาสามารถคัดกรองได้ภายในเวลาประมาณ 1 ถึง 2 สัปดาห์ ในช่วงเวลานี้ จำเป็นต้องเปลี่ยนอาหารเลี้ยงเชื้อที่มียาคัดกรองอยู่บ่อยครั้ง
ปริมาณการถ่ายโอนยีนสำหรับภาชนะเพาะเลี้ยงเซลล์ที่แตกต่างกัน (เพื่อใช้เป็นข้อมูลอ้างอิงเท่านั้น):
| วัฒนธรรม เรือ | การเล่นเซิร์ฟ พื้นที่ ต่อ บ่อ*(cm2) | ดีเอ็นเอ(ไมโครกรัม) | การถ่ายโอนยีน สารเคมี(μL) | เล่มที่ ของ การเจือจาง ปานกลาง **(ไมโครลิตร) | เล่มที่ ของ การชุบ ปานกลาง |
| 96 หลุม | 0.3 | 0.1 | 0.1 | 10 | 100ไมโครลิตร |
| 48 หลุม | 0.7 | 0.2 | 0.3 | 20 | 200ไมโครลิตร |
| 24 หลุม | 1.9 | 0.5 | 1 | 50 | 500ไมโครลิตร |
| 12 หลุม | 3.8 | 1 | 2 | 50 | 1มล. |
| 6 หลุม | 10 | 2 | 4 | 100 | 2มล. |
| กระติกน้ำ 25ตร.ซม. | 21 | 4 | 8 | 200 | 4 มล. |
| กระติกน้ำ 75ตร.ซม. | 58 | 10 | 20 | 500 | 10 มล. |
การอ้างอิง & เอกสารอ้างอิง:
[1] Qin J, Cai Y, Xu Z และคณะ กลไกระดับโมเลกุลของการกระตุ้นและการกระตุ้นย้อนกลับในตัวรับเกรลิน Nat Commun. 2022;13(1):300. เผยแพร่เมื่อวันที่ 13 มกราคม 2022 doi:10.1038/s41467-022-27975-9(ไอเอฟ:14.919)
[2] Wang Y, Chen J, Gao WQ, Yang R. METTL14 ส่งเสริมการเกิดเนื้องอกของต่อมลูกหมากโดยยับยั้ง THBS1 ผ่านกลไกที่ขึ้นอยู่กับ m6A-YTHDF2 Cell Death Discov. 2022;8(1):143. เผยแพร่เมื่อวันที่ 30 มีนาคม 2022 doi:10.1038/s41420-022-00939-0(ถ้า:5.241)
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม