คำอธิบาย
ไฮโกรไมซิน บี ซึ่งเป็นยาปฏิชีวนะประเภทอะมิโนไกลโคไซด์ที่สังเคราะห์โดยสเตรปโตไมซีส ไฮโกรสโคปิคัส มีฤทธิ์ยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนโดยรบกวนการเคลื่อนย้ายไรโบโซม 70S และทำให้เกิดการอ่านเทมเพลต mRNA ผิดพลาด ส่งผลให้โพรคาริโอต (เช่น แบคทีเรีย) ยูคาริโอต (เช่น ยีสต์ เชื้อรา) และยูคาริโอตของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมชั้นสูงตาย
ยีนที่ต้านทานไฮโกรไมซิน (hyg หรือ hph) ที่ได้จาก Escherichia coli เข้ารหัสไฮโกรไมซิน บี ฟอสโฟทรานสเฟอเรส ซึ่งจะทำปฏิกิริยากับไฮโกรไมซิน บี จนกลายเป็นผลิตภัณฑ์ฟอสโฟรีเลตที่ไม่ได้มีฤทธิ์ทางชีวภาพ ทำให้เป็นเครื่องหมายเลือกที่ยอดเยี่ยมสำหรับการคัดกรองและเพาะเลี้ยงเซลล์โพรคาริโอตหรือยูคาริโอตที่ถ่ายโอนยีนที่ต้านทานไฮโกรไมซินสำเร็จ นอกจากนี้ เนื่องจากมีกลไกการออกฤทธิ์ที่แตกต่างกัน ไฮโกรไมซิน บีจึงมักใช้ร่วมกับ G418 หรือบลาสติซิดิน เอส เพื่อคัดเลือกสายเซลล์ที่ต้านทานสองชนิดได้ ไฮโกรไมซิน บียังสามารถใช้เป็นสารต้านไวรัสได้ เนื่องจากสามารถแทรกซึมเข้าไปในเซลล์ที่มีความสามารถในการซึมผ่านเยื่อหุ้มเซลล์เพิ่มขึ้นเนื่องจากการติดเชื้อไวรัส และยับยั้งการแปล นอกจากนี้ ไฮโกรไมซิน บียังสามารถทำหน้าที่เป็นสารขับไล่แมลงได้โดยผสมกับอาหารสัตว์
นอกจากนี้,
คุณสมบัติ
การผลิตที่ได้มาตรฐาน โดยใช้โหมดการผลิตจำนวนมากแบบโรงงาน
แอปพลิเคชั่น
การคัดกรองเซลล์สายพันธุ์ที่ผ่านการถ่ายโอนยีนอย่างเสถียร
ข้อมูลจำเพาะ
| หมายเลข CAS | 31282-04-9 |
| โมเลกุล ฟอร์มูลาร์ | ซี20ชม37เอ็น3โอ้13 |
| น้ำหนักโมเลกุล | 527.52 กรัม/โมล |
| ความบริสุทธิ์ | มากกว่า 90% (เอชพีแอลซี) |
| ศักยภาพ | 1000 ยู/มก. |
| โครงสร้าง |
|
ส่วนประกอบ
| ส่วนประกอบ หมายเลข | ชื่อ | 60225ES03 | 60225ES10 |
| 60225 | ไฮโกรไมซิน บี | 1 กรัม | 10 กรัม |
การขนส่งและการเก็บรักษา
การ ไฮโกรไมซิน บี สินค้าควรเก็บไว้ที่ -15℃ - -25℃ สำหรับ 2 ปี.
คำแนะนำ
1. การเตรียมสารละลายสต๊อก (50 มก./มล.)
ชั่ง Hygromycin B 0.5 กรัม แล้วเติมลงในยา 10 มล.PBS, pH 7.4 หลังจากละลายจนหมด ให้กรองผ่าน 0.22 μกรองด้วยเครื่องกรองขนาด 1 ม. เพื่อฆ่าเชื้อ แบ่งใส่เป็นปริมาตรเล็กๆ เพื่อใช้ครั้งเดียว (เช่น 1 มล.) แล้วเก็บที่อุณหภูมิ -25 ถึง -15℃หรือ 2 ถึง 8℃-
2. ความเข้มข้นในการคัดกรองที่ใช้กันทั่วไป
ความเข้มข้นในการทำงานของไฮโกรไมซิน บี ที่ใช้ในการคัดกรองสายพันธุ์ถ่ายโอนที่เสถียรจะต้องแตกต่างกันไป ขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์ อาหารเลี้ยงเชื้อ สภาวะการเจริญเติบโต และอัตราการเผาผลาญของเซลล์ โดยความเข้มข้นที่แนะนำคือ 50-1,000 μg/mL สำหรับระบบทดลองแรก ขอแนะนำให้ใช้กราฟการฆ่า (kill curve) ซึ่งก็คือกราฟปฏิกิริยาต่อปริมาณยา เพื่อกำหนดความเข้มข้นในการคัดกรองที่เหมาะสมที่สุด
โดยทั่วไปเซลล์ของสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม: 50-500 μกรัม/มล.; เซลล์แบคทีเรีย/พืช: 20-200 μกรัม/มล.; เชื้อรา: 300-1000 μกรัม/มิลลิลิตร
3. การจัดทำเส้นโค้งการฆ่า
หมายเหตุ: เพื่อคัดกรองสายเซลล์ที่เสถียร จำเป็นต้องกำหนดความเข้มข้นขั้นต่ำของยาปฏิชีวนะที่สามารถฆ่าเซลล์โฮสต์ที่ไม่ได้รับการถ่ายยีน ซึ่งสามารถทำได้โดยการสร้างเส้นโค้งการฆ่า (เส้นโค้งปริมาณ-การตอบสนอง) ควรจัดเรียงความเข้มข้นอย่างน้อยห้าระดับ
1) วันที่ 1: เซลล์ที่ยังไม่ได้เปลี่ยนแปลงจะถูกวางลงในจานเพาะเลี้ยงที่เหมาะสมโดยมีความหนาแน่นของเซลล์ 20-25% และเพาะเลี้ยงข้ามคืน
หมายเหตุ: สามารถเพิ่มปริมาณเซลล์ที่ฉีดได้สำหรับเซลล์ที่ต้องการความหนาแน่นสูงเพื่อตรวจจับความมีชีวิตชีวา
2) ตั้งค่าความเข้มข้นให้อยู่ในช่วงที่เหมาะสมตามชนิดของเซลล์เซลล์สัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมสามารถตั้งค่า 50, 100, 250, 500, 750, 1000 μกรัม/มล. เจือจางสารละลาย Hygromycin B ในอัตราส่วน 1:10 ด้วยน้ำดีไอออนไนซ์หรือบัฟเฟอร์ PBS ให้ได้ 5 มก./มล. จากนั้นเจือจางสารละลายให้ได้ความเข้มข้นที่เหมาะสมตามตารางต่อไปนี้
| ความเข้มข้นขั้นสุดท้าย (μกรัม/มล) | ปริมาตรปานกลาง (มล.) | ปริมาตรการเติม 5 มก./มล. ไฮโกรไมซิน บี (มล.) |
| 50 | 9.9 | 0.1 |
| 100 | 9.8 | 0.2 |
| 250 | 9.5 | 0.5 |
| 500 | 9.0 | 1.0 |
| 750 | 8.5 | 1.5 |
| 1,000 | 8.0 | 2.0 |
3) วันที่ 2: เปลี่ยนด้วยตัวกลางที่เตรียมใหม่ซึ่งมีความเข้มข้นของยาที่สอดคล้องกัน ทำตัวอย่างขนานกันสามตัวอย่างสำหรับความเข้มข้นแต่ละระดับ
4) จากนั้นเปลี่ยนด้วยสื่อสดที่มีตัวยาใหม่ทุก 3-4 วัน
5) ทำการนับจำนวนเซลล์ที่มีชีวิตในช่วงเวลาที่กำหนด (เช่น ทุกๆ 2 วัน) เพื่อกำหนดความเข้มข้นที่เหมาะสมที่จะยับยั้งการเติบโตของเซลล์ที่ไม่ได้รับการถ่ายยีน เลือกความเข้มข้นที่ต่ำที่สุดที่สามารถฆ่าเซลล์ส่วนใหญ่ได้ภายในจำนวนวันที่เหมาะสม (โดยปกติคือ 7-10 วัน) เป็นความเข้มข้นในการทำงานสำหรับการคัดเลือกสารถ่ายยีนที่เสถียร
4. การคัดกรองเซลล์สายพันธุ์ที่ผ่านการถ่ายโอนยีนอย่างเสถียรในสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนม
1) 48 ชั่วโมงหลังการถ่ายยีน เซลล์จะถูกเพาะเลี้ยงต่อด้วยอาหารกรองที่มีไฮโกรไมซินบีในความเข้มข้นที่เหมาะสม (โดยตรงหรือเจือจาง)
หมายเหตุ: ยาปฏิชีวนะจะได้ผลดีที่สุดกับเซลล์ที่กำลังแบ่งตัว หากเซลล์มีความหนาแน่นมากเกินไป ยาปฏิชีวนะจะไม่สามารถฆ่าเซลล์ได้ ให้แยกเซลล์ออกเพื่อให้เซลล์รวมกันไม่เกิน 25%
2) เปลี่ยนสื่อคัดกรองทุกๆ 3-4 วัน
3) วัดการสร้างกลุ่มเซลล์หลังจากทำการคัดกรองเป็นเวลา 7 วัน การสร้างกลุ่มเซลล์อาจใช้เวลาอีกหนึ่งสัปดาห์หรือมากกว่านั้น ขึ้นอยู่กับชนิดของเซลล์โฮสต์ การถ่ายโอนยีน และประสิทธิภาพของการคัดกรอง
4) คัดโคลนที่ต้านทานได้ 5-10 โคลน แล้วถ่ายโอนไปยังจานเพาะเลี้ยงเซลล์ขนาด 35 มม. จากนั้นเพาะเลี้ยงด้วยอาหารคัดกรองที่ประกอบด้วยยาเป็นเวลา 7 วัน
5) ทดแทนด้วยอาหารสดที่ไม่มียาในการเพาะเลี้ยง
เอกสาร:
เอกสารข้อมูลความปลอดภัย
60225_เอกสารความปลอดภัย_HB220420_EN.pdf
คู่มือการใช้งาน
การชำระเงินและความปลอดภัย
ข้อมูลการชำระเงินของคุณได้รับการดำเนินการอย่างปลอดภัย เราไม่เก็บรายละเอียดบัตรเครดิตและไม่สามารถเข้าถึงข้อมูลบัตรเครดิตของคุณได้
การสอบถาม
คุณอาจชอบ
คำถามที่พบบ่อย
ผลิตภัณฑ์นี้มีวัตถุประสงค์เพื่อการวิจัยเท่านั้น และไม่ได้มีวัตถุประสงค์เพื่อใช้ในการรักษาหรือวินิจฉัยโรคในมนุษย์หรือสัตว์ ผลิตภัณฑ์และเนื้อหาได้รับการคุ้มครองโดยสิทธิบัตร เครื่องหมายการค้า และลิขสิทธิ์ที่เป็นของ
แอปพลิเคชั่นบางตัวอาจต้องใช้สิทธิ์ในทรัพย์สินทางปัญญาของบุคคลที่สามเพิ่มเติม